间充质干细胞对异体B淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSC）在体外对异体外周血B淋巴细胞增殖和凋亡的影响。方法从骨髓中分离、培养MSC。从外周血中分离单个核细胞，L-亮氨酸甲酯去除单核细胞，以2-氨乙基硫脲溴化物（AET）处理绵羊红细胞（SRBC）的花环形成法，去除T淋巴细胞获得纯化的B淋巴细胞。用羊抗人IgM单克隆抗体（Anti-IgM，终浓度10μg／ml）刺激与不同比例的MSC（B：MSC 50：1、10：1、1：1）及不同浓度的MSC培养上清（12．5％、25％、50％）共培养的B淋巴细胞，72h后四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色分析测B淋巴细胞的增殖。B淋巴细胞与MSC等比例，加或不加Anti—IgM，共培养24、48h后，流式细胞术检测B淋巴细胞的凋亡。结果10：1、1：1组B淋巴细胞A值分别为0．418±0．103、0．365±0．114，显著低于对照组的0．679±0．049（P〈0．01），1：1组显著低于50：1组（P〈0．05）；50％MSC上清组B淋巴细胞A值（0．504±0．099），同对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05），并且显著低于12．5％组（0．669±1．023，P〈0．05）。MSC不诱导B淋巴细胞的凋亡；B淋巴细胞与MSC共培养24、48h，加或不加Anti—IgM，各组细胞凋亡率为（1．90±0．75）％、（2．33±1．01）％、（2．33±0．75）％、（1．39±0．63）％，组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MSC及其上清抑制B淋巴细胞增殖，作用机制与MSC细胞数量和MSC分泌的细胞因子有关，但是在体外MSC不诱导B淋巴细胞的凋亡。

骨髓间充质干细胞对异体外周血B淋巴细胞的免疫调节作用

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）在体外对异体外周血B淋巴细胞的免疫调节作用。方法用密度梯度离心法从骨髓中分离、培养MSC，从外周血中分离单个核细胞，L-亮氨酸甲酯去除单核细胞，以2-氨乙基硫脲溴化物（AET）处理绵羊红细胞（SRBC）的花环形成法，去除T淋巴细胞获得纯化的B淋巴细胞。用羊抗人IgM单克隆抗体（anti-IgM）刺激与或未与MSC或其培养上清共培养3d的B淋巴细胞，应用MTT法测B淋巴细胞的增殖，ELISA法测培养上清中免疫球蛋白IgG、IgM的产生，应用流式细胞术分别检测与MSC共培养24、48h后B淋巴细胞的凋亡。结果MSC及其培养上清抑制由anti-IgM诱导的B淋巴细胞的增殖和分泌IgG、IgM，且随着MSC细胞数量及其培养上清浓度的增加，这种抑制越明显。流式细胞术结果显示，与MSC共培养不同时间的B淋巴细胞的凋亡变化无统计学意义，MSC抑制B淋巴细胞的增殖存在暂时性和可逆性。结论MSC对异体外周血B淋巴细胞存在免疫调节作用，并且这种调控机制是复杂的，不仅与MSC细胞数量有关，还与细胞间的相互作用和MSC分泌的细胞因子有关。