核酸适体电化学生物传感器的研究进展

核酸适体(aptamer)是一种体外筛选,功能类似于单克隆抗体的,能与靶物质高特异性、高亲和力结合的寡核苷酸片段。因其具有诸多优于抗体的特点,已被广泛应用到生物传感器领域。而电化学检测技术因其具有选择性好、灵敏度高,以及快速、简单、测试费用低和易于联机化等优点而在适体传感器的发展中占有重要的地位。本研究依据电化学适体传感器的构建原理中DNA链的数量和结构,对近几年电化学适体传感器的研究发展做一综述,包括单链核酸物质体系构建的核酸适体电化学传感器、双螺旋结构的核酸物质体系构建的核酸适体电化学传感器和两条单链核酸物质体系构建的核酸适体电化学传感器。

临床生物化学检验技术课程中PBL+CBL教学案例的编写

“问题”结合“案例”的教学方法(PBL+CBL)具有研讨性、启发性和灵活性的优势,是激发学生学习兴趣、理论联系实践的一种有效教学方法。案例质量是PBL+CBL教学效果的决定性因素之一。在“临床生物化学检验技术”课程案例的编写过程中要明确教学目标,统筹学生已有知识架构,遵循由浅入深、循序渐进及学多深设计多深的原则。

胃癌生物标志物的相关研究进展

根据2012年国际癌症研究机构首次公布的全球癌症统计结果,胃癌是最常见的癌症,仅低于肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌和前列腺癌。胃癌的治疗手段效果有限,虽然中晚期的胃癌通过化疗能延长部分患者的生存期,但大多数化疗疗效局限且维持时间短,2年生存率小于10%。

X线照射诱导人胃癌SGC-7901细胞生物特性改变以及YKL-40基因表达变化

目的观察X线照射后胃癌SGC-7901细胞形态改变、细胞周期分布情况以及是否可以诱导YKL-40基因的表达。方法将胃癌细胞株SGC-7901分为空白对照组(不照射)和实验组(2Gy/1f和4Gy/2f),实验组细胞经6-MVX线照射后取两组细胞在倒置显微镜下观察细胞形态学的改变,流式细胞术检测SGC-7901细胞周期的变化情况,半定量RT-PCR检测基因YKL-40mRNA的表达。结果实验组(2Gy/1f)细胞经X线照射后出现明显的形态学改变;流式细胞检测发现,与空白对照组细胞比较,2Gy、4Gy实验组细胞S期上调,G2/M期下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测胃癌细胞株SGC-7901不表达YKL-40或检测不到YKL-40mRNA,经X线照射后YKL-40表达。结论 X线照射可使人胃癌细胞发生形态改变及细胞增殖周期再分布,并且可诱导人胃癌细胞表达YKL-40。

抗菌肽研究进展与展望

耐药性细菌出现后,抗生素治疗细菌感染效果降低,且危害愈发严重,因此,需要研究新型化的抗菌制剂。抗菌肽以其高效、低毒及广谱特点成为最具优势的代替抗生素新药制剂,受到国内外科研工作者广泛关注,也是目前的研究重点。本文总结抗菌肽生物学特性以及作用机制,展望其应用前景,为抗菌肽的研究和应用提供更多可能性。

K562细胞ssDNA适配子检测方法对慢性粒细胞白血病诊断价值的研究

目的评价K562细胞ssDNA适配子检测方法(简称适配子检测法)对慢性粒细胞白血病(CML)的临床诊断价值。方法采集18例CML患者、22例其他白血病患者、20名健康体检者(正常对照组)的血液标本各5 mL,分离粒细胞,用建立的适配子检测法检测荧光强度,绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果 CML组荧光强度为492.26±41.67,与其它白血病组(466.86±33.23)及正常对照组(469.33±37.13)比较,差异无统计学意义(P值分别为0.078、0.243);其它白血病组和正常对照组比较,差异亦无统计学意义(P=0.835)。适配子检测法诊断CML的ROC曲线下面积为0.702,最佳阳性临界值为475.13,灵敏度为83.33%、特异性为54.76%、阳性预测值为44.11%、阴性预测值为88.46%。结论适配子检测法对CML的诊断具有较低的准确性,实际应用还有一定的局限性。

产β-半乳糖苷酶酵母菌株15D产酶条件研究

从马克斯克鲁维酵母的突变菌株中,获得了一株高产β-半乳糖苷酶的酵母菌株15D。本文对菌株15D的产酶条件及小型发酵培养实验进行研究,表明在适宜条件下菌株15D产酶水平可达287.8U/mL,比出发菌产酶水平提高了5倍。

α-葡萄糖苷酶菌株的选育及发酵条件的研究

从2株芽胞杆菌中通过筛选获得了一株产α-葡萄糖苷酶活力较高的嗜热脂肪芽孢杆菌U2,以嗜热芽孢杆菌U2为菌种,优化发酵培养基后,在温度45℃、初始pH6.8、转速200r/min和10%接种量条件下,发酵20h,菌株U2产酶水平可达到2.62U/mL,比出发菌提高了4倍。

JmjC家族在肿瘤发生中作用的研究进展

肿瘤通常伴有遗传学和表观遗传学的改变,组蛋白修饰是一种重要的表观遗传学调控方式,常参与肿瘤的发生和发展。研究表明部分包含JmjC结构域的蛋白具有组蛋白去甲基化酶的活性,能够移除组蛋白上的甲基。JmjC家族在肿瘤的发生中发挥重要作用,其机制研究已成为肿瘤表观遗传学研究的热点。文章主要介绍JmjC家族成员的基本信息,并对其在肿瘤发生中的作用进行探讨。

纳米纤维素基血液接触性材料研究进展

纳米纤维素是在某一尺度上具有纳米级的纤维素材料,其具有优异的力学性能和良好的生物相容性,在血液接触性材料领域得到了迅速的发展。纳米纤维素材料具有可控的血液相容性,作为抗凝血材料和促凝血材料具有广泛的应用前景。本文讨论了纳米纤维素基血液接触性材料的制备方法,总结了其在抗凝血与促凝血中的应用,并就其未来应用进行了展望。

小鼠脑室下区细胞增殖能力随年龄增加逐渐下降与β-catenin的相关研究

目的:脑内成体干细胞状态和年龄的关系非常密切,本研究探讨小鼠老化过程中脑室下区(subven-tricular zone,SVZ)内成体干细胞随年龄增加增殖活性的变化和脑内β-catenin信号的相关性。方法:C57B/L小鼠分别饲养至2,12,18月时处死,各组动物处死前腹腔注射BrdU(60 mg/kg,处死前3 d开始注射,连续注射3 d,1次/d)。部分动物断头取脑,冰台上游离前额皮层,冷冻备用,部分动物灌注固定,连续冠状冰冻切片备用。利用免疫组织化学方法检测SVZ区BrdU和Ki67表达。利用Western blot技术检测前额皮层内β-catenin的表达水平。结果:12,18月时小鼠SVZ区BrdU和Ki67阳性细胞的数量与2月时比较明显有所减少(P<0.05)。Western blot结果可见前额皮层内β-catenin的表达水平在2月时达高峰,12月和18月时逐渐减少。结论:SVZ区干细胞的增殖能力随年龄增加逐渐下降可能与脑内β-catenin信号的减弱有关。

先兆子痫患者血浆ADMA与同型半胱氨酸水平相关性研究

目的探讨先兆子痫患者血浆不对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)水平与同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平的相关性,以及ADMA、Hcy水平与先兆子痫的关系。方法用酶联免疫吸附法检测91例先兆子痫患者血浆ADMA及血浆Hcy水平。以80例血压正常的健康孕妇为对照。结果先兆子痫组血浆ADMA水平(0.625±0.186μmol/L)显著高于对照组(0.524±0.106μmol/L)(P<0.05);先兆子痫组血浆Hcy水平(12.447±6.134μmol/L)显著高于对照组(8.207±2.797μmol/L)(P<0.05)。先兆子痫组血浆ADMA水平与Hcy水平呈正相关(r=0.623,P<0.05)。结论先兆子痫患者的血浆中不对称性二甲基精氨酸和同型半胱氨酸是升高的,这说明ADMA和Hcy的升高与先兆子痫的发生、发展有关,ADMA、Hcy可能是先兆子痫的危险因子。降低患者升高了的同型半胱氨酸和ADMA可能有助于治疗先兆子痫。

浅议医学生物化学教学方式改革

医学生物化学是我国高等院校医学人才培养中的一门必修专业课程,这门课程涉及概念繁多,结构复杂、知识点多且较为抽象,在教师讲授和学生学习过程中有一定困难。本文探究该门课程在讲授过程中容易产生的问题,剖析其内在原因,提出可行的教学改革方式,以提升课堂教学质量、提升学生学习效果为目的进行探讨,达到高等医学教育以培养新型复合型临床医学人才的根本目标。

浅谈PBL+CBL的教学方法在临床生物化学检验技术教学中的应用

临床生物化学检验技术是医学检验专业学生的必修课之一,是一门实践性和应用性非常强的课程。然而单一的传统教学模式已经不能满足国家应用型人才培养的需求,本文探讨了"问题"结合"案例"的教学方法(PBL+CBL)在临床生物化学检验技术教学中的应用,为培养高素质的医学检验人才提供了教育思路。

金丝桃素对口蹄疫病毒的体外抗病毒实验

本文报道了金丝桃素体外抗口蹄疫病毒(FM DV)的研究结果。采用双抗体捕获抗原法、病毒滴度测定、M TT法、组织细胞培养等方法均检测到抗病毒作用。结果显示:金丝桃素在BHK-21细胞感染FM DV前、后及同时加入,都有明显抑制细胞病变的作用。金丝桃素使FM DV的TC ID50从8.5下降到6.25。双抗体捕获抗原法检测到金丝桃素有效抑制FM DV和BHK-21细胞的吸附、融合,抑制率可达59.72%。研究结果提示:金丝桃素在体外有抗口蹄疫病毒作用,抑制口蹄疫病毒与宿主细胞的吸附、融合是抗病毒的重要途径之一。

慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.

金丝桃素的体外抗口蹄疫病毒活性

将体外培养的BHK21细胞感染FMDV后加入金丝桃素,日光灯下光活化1 h,通过细胞病变观察、MTT法、透射电子显微镜观察、H3 UR掺入试验,探讨了光活化金丝桃素对FMDV体外生长增殖的影响。结果表明,金丝桃素有明显的抑制FMDV致BHK21 细胞病变效应,能抑制FMDV的增殖,抑制率可达61.82%。透射电镜观察,金丝桃素组与病毒对照组相比,BHK21细胞的FMDV颗粒明显减少。证实,金丝桃素在体外有明显的抑制FMDV增殖的作用。

RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA对膀胱癌诊断价值的系统评价

背景与目的:Survivin基因逐渐成为肿瘤诊断、判断预后和治疗的靶点。用RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA作为一种无创性手段用于膀胱癌的诊断,国内外相关研究较多,但其结果不一。本研究旨在应用系统评价方法对相关文献进行客观评价,以评估RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA对膀胱癌的诊断价值。方法:以膀胱肿瘤、生存素、逆转录-聚合酶链反应、敏感度、特异度、诊断等为主要检索词检索PubMed、EMBASE、SCI、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊全文数据库(CJFD)、中文科技期刊数据库(CSJD)、中华医学会数字化期刊等数据库,并结合Google Scholar等搜索引擎全面搜集1997年到2009年4月关于RT-PCR检测尿液survivin mRNA诊断膀胱癌的研究。根据QUADAS(quality assessment of diagnostic accuracy studies)质量评价标准评价纳入文献质量,用Meta-Disc软件对结果指标进行分析。结果:最终纳入26个研究,共2416例。Meta分析结果显示,RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA诊断膀胱癌与病理检查相比准确度指标合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及SROC曲线下面积分别为88%、94%、14.56、0.13、0.9736;巢式RT-PCR技术检测的敏感度、特异度及SROC曲线下面积最高,分别为91%、95%、0.9805;普通RT-PCR技术检测的敏感度和特异度次之,分别为87%和94%;定量RT-PCR技术检测的敏感度为80%,特异度为93%。结论:与病理检查相比,RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA诊断膀胱癌有较高的敏感度和特异度,可作为膀胱镜检查的主要辅助手段之一,用于膀胱癌的筛查及术后监测。

SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立

目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。

Nested-PCR检测种传番茄细菌性溃疡病菌

利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵敏度为107cfu/mL,Nested-PCR为104cfu/mL;在自然感染种子提取液中,稀释104倍后Nested-PCR仍然可以检出。建立的番茄种子Nested-PCR检测技术,无需经过核酸提取步骤,可以在8 h内完成整个检测过程,方便快捷,成本低廉,可作为番茄种子带菌的常规检测方法。