复频高能聚焦超声治疗小鼠泡球蚴病的实验研究

目的研究复频高能聚焦超声治疗昆明小鼠皮下泡球蚴病灶的效果。方法将皮下接种泡球蚴的昆明小鼠随机分为3组,每组10只,分别用不同强度的复频聚焦超声照射小鼠的泡球蚴病灶。对照组(A组)未照射,其他实验组均一次性照射5 min。其中小功率联合照射组(B组)的3个换能器的照射功率为4 W+4 W+5 W,大功率联合照射组(C组)换能器的照射功率为10 W+11 W+10 W。治疗后用透射电镜观察泡球蚴组织的形态结构变化。用美兰染色法观察原头节存活率。用激光共聚焦显微镜观察泡球蚴组织中的线粒体含量。用考马斯亮蓝染色法检测泡球蚴的总蛋白含量。用琥珀酸脱氢酶试剂盒检测泡球蚴的琥珀酸脱氢酶活性。结果复频聚焦超声照射后,透射电镜观察显示,B组和C组泡球蚴生发层细胞减少,线粒体肿胀破裂,内质网扩张,核膜不清,微绒毛变短或消失,且C组较B组损伤更严重。原头节存活率,B组(70.50%)和C组(59.83%)与A组(82.33%)相比,差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间差异也有统计学意义(P<0.05)。总蛋白含量和琥珀酸脱氢酶活性,B组(3.07 mg/ml,2.15 U/mg)和C组(2.87 mg/ml,1.87 U/mg)与A组(3.83 mg/ml,3.50 U/mg)相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但B、C组间的差异无统计学意义(P>0.05)。线粒体含量,B组(105.46 a.u./个)和C组(70.90 a.u./个)较A组(133.45 a.u./个)均下降,且C组与A、B组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但A、B两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论复频高能聚焦超声可对小鼠皮下泡球蚴病灶造成损伤,对其有一定治疗效果。

超声基因药物传递新方法的研究与评估

目的:开发超声裸基因药物传递与治疗新方法,研究适合超声基因传递的安全计量与参数,进行安全性评价,建立超声裸基因传递系统。方法:建立一套经水听器与声功率计标定的低频超声基因传递实验系统(35·1K),用不同的计量对兔、鸡、S180肿瘤细胞悬液进行暴露,提取最佳基因传递参数。用绿色荧光蛋白作为传递基因进行传递实验。用荧光法、分光光度法、扫描电镜法、激光共聚焦扫描法和流式细胞术评估实验结果。结果:最佳传递参数下低频超声有效地将GFP基因传入了S180细胞,未见明显的细胞损伤与细胞毒性,转染率为35·83%(±2·53,n=6),并经活体证明细胞功能正常。90%细胞存活点的能量积累E是最佳传递参数(E=3·56±0·06),80%细胞存活点的E值是损伤阈值(E=59·67±3·54)。GFP的表达明显比病毒载体法强(P<0·001)。结论:超声可安全地用于基因传递和治疗,其基因表达和摄入量取决于90%细胞存活点的能量积累E。它可用作控制因子与其它参数结合控制传递效应。从结果证明平稳空化产生基因传递效应,瞬间空化造成细胞损伤。

复频高强度聚焦超声对离体细粒棘球蚴囊壁超微结构的影响

目的分别用单频和多频聚焦超声体外照射细粒棘球蚴包囊,观察对其囊壁的损伤情况。方法用羊肝细粒棘球蚴原头节接种小鼠,1年后处死,自腹腔取出包囊,选择直径约2cm的包囊40只随机均分4组。对照组剪破包囊壁,用3%戊二醛固定并立即冷藏。实验A组包囊用2号单频换能器(4W)照射,实验B组用2及3号双频换能器(功率分别为4和5W)同时照射,实验C组用1、2及3号3频换能器(功率分别为4、4及5W)同时照射。各组均照射1min,然后立即用3%戊二醛固定并冷藏。用肉眼、扫描电镜及透射电镜观察其变化。结果肉眼见实验组囊壁变厚,颜色浑浊。透射电镜观察显示,随超声频数增加囊壁结构被破坏程度加重,角皮层纤维增粗、紊乱,生发层细胞核肿胀破裂,线粒体明显受损,微绒毛变短,断裂或消失。部分区域仅剩细胞碎片和破裂的细胞核。扫描电镜观察显示,随超声频数增加,囊壁内外表面被破坏程度加重,最终正常结构被完全破坏。结论在体外,复频高强度聚焦超声对小鼠细粒棘球蚴囊壁损伤明显,其损伤程度随超声频数的增加而加重。