发根农杆菌A_4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后，在附加２ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前，用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ，然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物），再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液，于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。