苦豆子总碱及4种单体生物碱对幽门螺杆菌的体外抑菌作用研究

目的探讨苦豆子总碱、苦参碱、苦参素、槐定碱、槐果碱体外抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)的作用。方法选用5种苦豆子生物碱,纸片扩散法粗测抑菌浓度范围;依据粗测范围,液体倍比稀释法测定5种生物碱的最小抑菌浓度(MIC)。结果苦豆子总碱的MIC为32mg/ml,在体外对Hp有一定的抑制作用。苦参碱、苦参素的MIC为64mg/ml,槐定碱的MIC为128mg/ml,体外抑菌活性微弱。槐果碱在体外对Hp无明显抑制作用。结论苦豆子总碱有可能成为替代抗生素的抗Hp候选药物。

兰州市不同毒力基因型志贺菌致病力研究

目的检测2007年兰州市分离的不同毒力基因型志贺菌株致病力情况,探讨毒力基因型与致病力的关系。方法选用不同毒力基因型的志贺菌,以腹腔注射为感染途径,测定其对昆明种小鼠的半数致死量(LD50)。结果7株不同毒力基因型(分别为virA+ipaH+setlA、virA+ial+ipaH+setlA+setlB+sen、virA+setlA、virA+ial+ipaH+setlA+sen、virA+ipaH+setlA+sen、virA+ipaH+setlA+setlB、virA+ial+ipaH+setlA+setlB)志贺菌LD50分别为:1.422×109cfu/mL、6.653×107cfu/mL、6.653×108cfu/mL、1.422×109cfu/mL、1.422×109cfu/mL、6.653×108cfu/mL、3.062×109cfu/mL;结果表明,不同毒力基因型的志贺菌之间存在致病力差异,其中以基因组合为virA+ial+ipaH+setlA+setlB+sen的福氏志贺菌Ⅳ菌株的LD50最小,致病力最强。结论志贺菌的毒力基因型与致病力密切相关。

布鲁氏菌BP26蛋白的表达纯化及其抗原性的研究

目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别用Western-blot,间接ELISA检测其抗原性。结果DNA测序及酶切鉴定证实PET-30a/bp26原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中高效表达,免疫印迹和间接ELISA实验证明BP26重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清产生特异性结合。结论成功获得了布鲁氏菌中序列全长为696bp,编码232个氨基酸的BP26蛋白,通过血清学反应证实,该蛋白为人和动物布鲁氏菌病临床诊断试剂盒的研发奠定了基础。

复频高能聚焦超声治疗小鼠泡球蚴病的实验研究

目的研究复频高能聚焦超声治疗昆明小鼠皮下泡球蚴病灶的效果。方法将皮下接种泡球蚴的昆明小鼠随机分为3组,每组10只,分别用不同强度的复频聚焦超声照射小鼠的泡球蚴病灶。对照组(A组)未照射,其他实验组均一次性照射5 min。其中小功率联合照射组(B组)的3个换能器的照射功率为4 W+4 W+5 W,大功率联合照射组(C组)换能器的照射功率为10 W+11 W+10 W。治疗后用透射电镜观察泡球蚴组织的形态结构变化。用美兰染色法观察原头节存活率。用激光共聚焦显微镜观察泡球蚴组织中的线粒体含量。用考马斯亮蓝染色法检测泡球蚴的总蛋白含量。用琥珀酸脱氢酶试剂盒检测泡球蚴的琥珀酸脱氢酶活性。结果复频聚焦超声照射后,透射电镜观察显示,B组和C组泡球蚴生发层细胞减少,线粒体肿胀破裂,内质网扩张,核膜不清,微绒毛变短或消失,且C组较B组损伤更严重。原头节存活率,B组(70.50%)和C组(59.83%)与A组(82.33%)相比,差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间差异也有统计学意义(P<0.05)。总蛋白含量和琥珀酸脱氢酶活性,B组(3.07 mg/ml,2.15 U/mg)和C组(2.87 mg/ml,1.87 U/mg)与A组(3.83 mg/ml,3.50 U/mg)相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但B、C组间的差异无统计学意义(P>0.05)。线粒体含量,B组(105.46 a.u./个)和C组(70.90 a.u./个)较A组(133.45 a.u./个)均下降,且C组与A、B组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但A、B两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论复频高能聚焦超声可对小鼠皮下泡球蚴病灶造成损伤,对其有一定治疗效果。

高危型HPV E6、E7蛋白致宫颈癌的分子机制研究

对近年来高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6、E7蛋白诱导宫颈癌发生的分子机制的研究进展进行了综述,为今后宫颈癌的防治提供思路。

陇马陆配伍中药抑制幽门螺杆菌作用的实验研究

目的:探讨陇马陆分别与红芪、黄连、红景天、马齿苋、蒲公英配伍后的抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)作用以及药物间是否有协同效应。方法:采用水提法和醇提法提取上述药物配方及陇马陆、红景天和黄连单药的有效成分,应用纸片琼脂扩散法筛选上述配方对Hp的抑制作用;建立Hp液体培养模型,采用稀释法测定陇马陆、黄连、红景天单药及复方提取物的抗Hp最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并比较药物间配伍后的协同效应。结果:陇马陆与红芪、红景天、黄连、马齿苋、蒲公英药配伍后对Hp均有抑制作用,以与黄连配伍后抑制作用最强;陇马陆、黄连、红景天、陇马陆-黄连、陇马陆-红景天对Hp的MIC分别为20~40、0.63~1.25、1.25~2.50、1.25~2.50、10~20 mg/m L;与陇马陆配伍后,黄连和红景天的抗Hp MIC仅为单药的1/2倍。结论:陇马陆分别与红芪、红景天、黄连、马齿苋、蒲公英配伍对Hp均有一定的抑菌作用;陇马陆与黄连、红景天配伍后可产生抗Hp的协同效应;Hp液体培养稀释法可以有效判断中药的抗Hp效能。

快速康复外科对食管癌术后早期肠内营养患者免疫功能的影响

目的探讨应用快速康复外科理论指导术后早期肠内营养(EEN)对食管癌患者免疫功能调节作用及促进患者康复的机制。方法随机选择63例食管癌患者,分为实验组和对照组,其中实验组应用快速康复外科围术期理论处理,术后6小时起用肠内营养液行EEN,术日补充营养总量的1/4,术后第2日补充1/2,第3日补充全量,连续7天。对照组根据肠功能恢复情况,给予普通流质。检验各组患者手术前和术后8天免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、淋巴细胞计数(LYM)和细胞因子CD4+、CD8+、CD4/CD8值及切口、尿路和肺部感染率。结果实验组患者IgA、IgM、CD4+显著升高,LYM和CD4/CD8升高,IgG接近术前水平,CD8+降低;实验组切口、尿路和肺部感染率均降低。结论应用快速康复外科理论指导术后早期肠内营养可提高食管癌患者免疫功能,减少感染等并发症。

幽门螺杆菌感染对胃癌组织Runx3、iNOS蛋白表达及患者生存率的影响

目的研究胃癌组织Runx3、iNOS蛋白表达、幽门螺杆菌(HP)感染与临床病理特征及患者生存的关系。方法应用免疫组织化学链霉菌素-生物素法(SP法)检测胃癌组织、癌旁组织及正常对照组织中Runx3、iNOS蛋白表达;用快速尿素酶诊断法和Warthin-Starry染色法检测胃癌患者及对照组HP感染状况;用Kaplan-Meier限乘法计算生存率。结果胃癌组织Runx3蛋白表达率(43.02%,37/86)明显低于相应癌旁组织(89.53%,77/86)和正常对照组织(100%,20/20)(P<0.01);胃癌组织iNOS蛋白表达率(72.09%,62/86)明显高于相应癌旁组织(16.28%,14/86)和正常对照组织(10%,2/20)(P<0.01)。胃癌组织Runx3、iNOS蛋白表达与组织分化(P<0.05)、浸润深度(P<0.05)及淋巴结转移(P<0.05)等显著相关。HP感染的胃癌组织Runx3蛋白表达率较未感染的胃癌组织低(P<0.01);HP感染的胃癌组织iNOS蛋白表达率较未感染的胃癌组织高(P<0.01)。胃癌组织Runx3、iNOS蛋白表达显著负相关(r=-0.349,P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现Runx3蛋白表达与生存相关(P<0.01);iNOS蛋白表达与生存无关(P>0.05)。结论胃癌Runx3、iNOS蛋白与肿瘤进展和转移有关,HP感染影响Runx3、iNOS蛋白表达,呈显著负相关,Runx3蛋白表达与患者生存相关。

甘南藏族自治州动物棘球绦虫感染状况调查

目的了解甘南藏族自治州动物棘球绦虫及棘球蚴的感染状况,为该地区制定防制策略提供依据。方法2004年8月～2007年9月在甘南藏族自治州选择玛曲县和碌曲县的8乡21个自然村为调查点,采用鼠夹、粘鼠板捕捉啮齿类动物进行剖检,收集当地屠宰场绵羊、牦牛的肝、肺和心脏等剖检,进行棘球蚴病原学和病理学检查。对家犬、牧羊犬采用15%槟榔碱溶液驱虫,随机捕杀无主野犬剖检十二指肠成虫感染情况。结果共捕获啮齿类动物331只,经剖检进行病理学检查和鉴定,4只感染多房棘球蚴,即达乌尔鼠兔(Ochotona daurica)和中华鼢鼠(Myospalax fontanieri),感染率分别为1.2%(1/87)和2.3%(3/132);6只喜马拉雅旱獭(Marmota himalayana)、34只西藏鼠兔(Ochotona tibetana)和72只小家鼠(Mus musculus)未感染棘球蚴。剖检绵羊1021头,其中细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率分别为11.1%(113/1021)和0.3%(3/1021)。剖检牦牛634头,其细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率为19.9%(126/634)和0.3%(2/634)。犬的细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的感染率分别为23.0%(17/74)和5.4%(4/74)。牧羊犬、家犬棘球绦虫的检出率为24.6%(15/61),无主野犬检出率为6/13,未发现两型绦虫的混合感染。结论甘南藏族自治州动物以细粒棘球绦虫感染为主,有少量多房棘球绦虫感染。

细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗的构建

目的构建细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗(rsBCG-Eg95)。方法分别以卡介苗BCG基因组DNA和pGEX-4T-Eg95重组质粒为模板,PCR扩增获117bp的BCG抗原85B(BCG-Ag85B)信号肽序列和471bp的Eg95基因序列。将这两个序列定向克隆至大肠埃希菌-BCG穿梭质粒pMV261,经酶切、PCR扩增及测序鉴定得到重组质粒pSMEg95。电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rsBCG-Eg95疫苗,卡那霉素抗性基因筛选并经PCR扩增鉴定。结果质粒pSMEg95经双酶切、PCR扩增及测序鉴定,证实克隆基因Ag85B信号肽和Eg95基因序列正确插入载体pMV261,并将此重组质粒导入BCG菌,经PCR扩增鉴定证实细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗(rsBCG-Eg95)构建成功。结论构建了含有BCG信号肽Ag85B和保护性抗原Eg95基因序列的细粒棘球绦虫Eg95重组分泌型卡介苗rsBCG-Eg95。

ABCG2与CD133在宫颈癌的表达及意义

目的:探讨ABCG2及CD133蛋白在宫颈癌的表达及临床意义。方法:用免疫组化SP法检测92例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)和30例正常宫颈组织中AB-CG2及CD133蛋白的表达。结果:ABCG2在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织的阳性表达率分别为69.6%、42.5%、23.3%,CD133为57.6%、37.5%、23.3%,两者在宫颈癌的表达均高于CIN及正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05);两者表达与宫颈癌患者年龄、肿瘤大小、临床分期无相关性(P>0.05),而在不同分化组间表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ABCG2和CD133蛋白异常表达与宫颈癌的发生、发展有关,二者联合检测可作为评估宫颈癌恶性程度、指导治疗的重要参考指标。

超声随访检查对肝泡型包虫病药物治疗效果的评价

目的分析57例肝泡球蚴病患者阿苯达唑治疗1年后的超声检查结果,评价阿苯达唑治疗效果。方法对血清学检查(ELISA)阳性和经B型超声检查确诊的57例肝泡球蚴病患者给予阿苯达唑治疗1年后同法复查,根据疗后B超声像变化评价治疗效果。结果57例患者使用阿苯达唑治疗1年后B超检查9例钙化痊愈,35例部分钙化好转,8例退化稳定,5例扩大恶化。结论阿苯达唑治疗泡球蚴病有效,B型超声检查可用于阿苯达唑等药物治疗后的效果评价。

阿苯达唑治疗肝细粒棘球蚴病的系统评价

目的系统评价阿苯达唑治疗肝细粒棘球蚴病(HCE)的疗效。方法通过计算机检索和手工检索,全面收集阿苯达唑治疗HCE的随机和半随机对照试验,按Cochrane协作网推荐的方法进行分析。结果仅2个试验符合纳入标准,其方法学质量评价均为"B"级。1个研究比较了阿苯达唑与甲苯达唑治疗HCE的疗效,结果显示其包囊数和病例数的有效率,两组差异均无统计学意义[RR1.19,95%CI(0.97,1.46);RR1.35,95%CI(0.91,2.00)]。另一个研究比较了阿苯达唑联合手术与单纯手术治疗HCE的疗效,结果显示,阿苯达唑治疗1月再手术与直接手术疗效比较差异无统计学意义[RR1.63,95%CI(0.90,2.93)],阿苯达唑治疗3月再手术与直接手术疗效比较差异有统计学意义[RR1.89,95%CI(1.09,3.29)]。结论①阿苯达唑与甲苯达唑治疗HCE的疗效相似;②阿苯达唑联合手术治疗与单纯手术治疗相比,阿苯达唑治疗疗程应足够长(3个月)才会显示出联合治疗的优越性。但由于本系统评价纳入试验数和病例数较少,测量指标不全面,因此会影响到上述结论的强度。要确定阿苯达唑治疗HCE的效果,尚需开展更多高质量试验。

武威市消化道疾病患者幽门螺杆菌感染分析

目的了解甘肃省武威市胃肠道疾病患者组织中幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)的感染状况。方法用Warthin-Starry银染色法结合革兰染色法判断所选组织幽门螺杆菌的感染状况。比较不同病变类型、性别、部位及不同病理类型的肿瘤组织中幽门螺杆菌的感染状况。结果胃癌组、癌前病变组和慢性浅表性胃炎组幽门螺杆菌感染率分别为86.42%(70/81)、94.12%(64/68)和80.36%(45/56),后两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别的病变组织间、不同部位以及不同病理类型的肿瘤组织中幽门螺杆菌的感染差异均无统计学意义。结论甘肃省武威市胃肠道疾病患者中存在较高的幽门螺杆菌感染率;幽门螺杆菌感染与性别无关;幽门螺杆菌在该地区的致癌作用与感染部位及所致胃癌的组织类型无关。

复频高强度聚焦超声对离体细粒棘球蚴囊壁超微结构的影响

目的分别用单频和多频聚焦超声体外照射细粒棘球蚴包囊,观察对其囊壁的损伤情况。方法用羊肝细粒棘球蚴原头节接种小鼠,1年后处死,自腹腔取出包囊,选择直径约2cm的包囊40只随机均分4组。对照组剪破包囊壁,用3%戊二醛固定并立即冷藏。实验A组包囊用2号单频换能器(4W)照射,实验B组用2及3号双频换能器(功率分别为4和5W)同时照射,实验C组用1、2及3号3频换能器(功率分别为4、4及5W)同时照射。各组均照射1min,然后立即用3%戊二醛固定并冷藏。用肉眼、扫描电镜及透射电镜观察其变化。结果肉眼见实验组囊壁变厚,颜色浑浊。透射电镜观察显示,随超声频数增加囊壁结构被破坏程度加重,角皮层纤维增粗、紊乱,生发层细胞核肿胀破裂,线粒体明显受损,微绒毛变短,断裂或消失。部分区域仅剩细胞碎片和破裂的细胞核。扫描电镜观察显示,随超声频数增加,囊壁内外表面被破坏程度加重,最终正常结构被完全破坏。结论在体外,复频高强度聚焦超声对小鼠细粒棘球蚴囊壁损伤明显,其损伤程度随超声频数的增加而加重。

E-test法检测幽门螺杆菌对3种抗生素的耐药性

目的了解幽门螺杆菌(Hp)对临床常用3种抗生素的耐药性,以指导临床合理用药。方法收集上消化道疾病患者胃黏膜标本,分离培养、鉴定出42株Hp临床菌株,采用E-test(Epsilome test)方法测定3种抗生素对Hp菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果 42株临床分离的Hp菌株对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林的耐药率分别为64.3%、14.3%和0。结论 Hp对甲硝唑耐药率高,故甲硝唑不应作为根除Hp感染的一线药物;Hp对克拉霉素耐药率较高,应在药敏监测下选择使用;Hp对阿莫西林敏感,可作为根除Hp感染的主要药物。

HBsAg阳性孕妇免疫接种阻断HBV宫内感染疗效的Meta分析

目的评价HBsAg阳性孕妇产前应用乙肝免疫球蛋白（HBIG）或联用乙肝疫苗阻断胎儿HBV宫内感染的有效性及安全性。方法计算机检索6个数据库,手检9种期刊,并追查参考文献,纳入国内外符合纳入标准的随机对照试验和半随机对照试验,由两名评价员独立筛查文献,评价质量和提取资料。用Revman 4.2.10软件分析数据。采用χ2检验鉴定研究间异质性,使用固定效应或随机效应模型合并结果。结果HBsAg阳性/HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG总剂量600 IU,胎儿HBV宫内感染率〈空白对照组（RR=0.42,95%CI=0.21-0.83,P=0.01）,新生儿HBV DNA阳性率低于空白对照组（RR=0.30,95%CI=0.10-0.85,P=0.02）,新生儿HBeAg阳性率Anti-HBs阳性率与空白组比较差异无统计学意义;总剂量大于600 IU时,宫内感染率〈空白对照组（RR=0.39,95%CI=0.26-0.58,P〈0.000 01）,新生儿Anti-HBs阳性率与对照组比较差异无统计学意义。HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG总剂量〉600 IU,胎儿HBV宫内感染率、新生儿HBeAg阳性率、新生儿HBV DNA阳性率、新生儿Anti-HBs阳性率与对照组比较差异均无统计学意义;总剂量600 IU组新生儿HBeAg阳性率和新生儿HBV DNA阳性率与对照组比较差异有统计学意义。结论HBsAg阳性/HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG可降低胎儿HBV宫内感染率;HBsAg和HBeAg均阳性孕妇孕期应用HBIG阻断宫内感染的疗效尚不清楚。

胃癌中Notch1、DLL4和HES1的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的通过检测Notch信号系统中的Notch1、DLL4和HES1蛋白在胃癌组织中的表达,分析它们与患者临床病理特征及生存期之间的关系,探索胃癌发生发展的机制。方法将胃癌、癌旁组织制作组织芯片,采用免疫组化法检测Notch1、DLL4和HES1的表达,随访患者,分析它们的表达与患者临床病理特征及生存期之间的关系。结果 Notch1在胃癌、癌旁及对照组中的表达阳性率分别为48.30%、25.00%和16.67%,三者间差异有统计学意义(P<0.05);Notch1的表达阳性率在有淋巴结转移组中为41.3%,显著低于无淋巴结转移组(61.28%,P<0.05);在其他病理特征间Notch1表达差异均无统计学意义(P>0.05)。DLL4在胃癌、癌旁和对照组中的表达阳性率分别为55.94%、45.7%和56.67%,三者间差异无统计学意义(P>0.05);在不同病理特征间DLL4的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。HES1在胃癌、癌旁和对照组中的表达阳性率分别为36.64%、34.40%和33.3%,三者间差异无统计学意义(P>0.05);HES1在低分化胃癌中的表达阳性率为51.43%,高于高/中分化组(31.25%,P<0.05);在其他病理特征间HES1的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。Notch1、DLL4和HES1阳性组和阴性组生存期之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌组织中Notch1呈高表达,可作为胃癌诊断和治疗的靶点;Notch1的表达与胃癌淋巴结转移呈负相关;HES1在低分化胃癌中表达升高,可能是胃癌分化程度的一个标志物。

甘肃河西走廊西段农村地区胃癌流行状况调查

目的:调查甘肃河西走廊西段农村地区胃癌流行状况,探索该地域胃癌高发的原因。方法:随机抽样结合问卷调查的方法,调查酒泉市9个乡镇38个行政村常住人口10140人。结果:2001～2010年间当地胃癌年均粗发病率为72.98/100000,年均粗死亡率67.06/100000,其中男105.72/100000,女27.82/100000,男女胃癌死亡率之比为3.80∶1。结论:甘肃河西走廊西段农村地区为胃癌高发区。当地人群胃癌高发可能与长期食用腌制食品、滥用药物、暴饮暴食、不按时进食、大量吸烟和饮酒以及对胃癌的认知程度低等因素有关。

甘肃省民乐县人体泡型棘球蚴病2例报告

泡型棘球蚴病（alveolar echinococcosis,AE）是由多房棘球绦虫幼虫寄生于动物或人体内导致的人兽共患寄生虫病,绝大多数原发于肝脏,症状与肝癌类似,病死率较高。我国泡型棘球蚴病患者主要分布于新疆、青海、四川、甘肃和宁夏等地。