艰难梭菌毒素A诱导K562细胞凋亡及其机制研究

本研究探索艰难梭菌毒素A(Tcd A)对人慢性髓系白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。采用MTT法检测Tcd A的细胞毒作用,用Hoechst33342染色和流式细胞术观察细胞凋亡,免疫细胞化学法检测BCL-2、BAX蛋白表达水平,比色法检测caspase-3活性。结果表明,Tcd A能明显抑制K562细胞增殖,具有浓度和时间依赖性;荧光染色和流式细胞术检测到细胞凋亡;Tcd A作用后BCL-2蛋白表达下降,而BAX蛋白表达明显增加,与对照组相比差异有统计学意义(p<0.05);caspase-3活性增强,差异有统计学意义(p<0.05)。结论 :Tcd A能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调BAX蛋白表达,激活caspase-3有关。

艰难梭菌毒素A对白血病细胞株K562增殖、凋亡及相关基因调控的研究

目的探讨艰难梭菌毒素A(TcdA)对白血病细胞株K562增殖、凋亡的作用及其机制。方法采用四唑蓝比色试验(MTT)检测TcdA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞Bcl-2/Bax,Egr-1mRNA表达的变化。结果 TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率(IR)为47.67%,流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰)。TcdA作用后K562细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达上调,而Egr-1基因表达上调,并呈量效关系。结论艰难梭菌毒素A可诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,上调Egr-1基因表达水平有关。

粒细胞集落刺激因子治疗急性淋巴细胞白血病疗效和安全性的系统评价

目的系统评价粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的疗效和安全性。方法计算机检索Cochrane Library、PubMed、EMbase、中国期刊全文数据库和维普中文科技期刊数据库,检索时间2000年1月～2009年10月。纳入G-CSF治疗急性淋巴细胞白血病的随机对照研究。按Cochrane系统评价方法评价纳入研究的方法学质量和提取有效数据,用RevMan 5.0软件对总体生存率、诱导化疗结束后的完全缓解率、生存质量、感染情况、复发率、不良反应等进行Meta分析。结果共纳入6个随机对照试验,共620例患者,研究质量均为C级。Meta分析结果显示G-CSF组在成人ALL总体生存率[RR=2.24,95%CI(1.28,3.90),P=0.004]方面优于对照组。结论 G-CSF可提高成人ALL患者的总体生存率,尚不能证明其有提高完全缓解率、改善生存质量、减少感染情况、降低复发率的作用,有待进一步研究证实。

大黄素诱导白血病KG-1a细胞凋亡及对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的本研究观察大黄素(emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用。方法采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化。结果大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系。结论大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关。

慢性免疫性血小板减少性紫癜的循证治疗

目的针对1例慢性免疫性血小板减少性紫癜(chronic immune thrombocytopenic purpura,CITP)患者,检索当前最佳循证治疗方案。方法根据循证临床实践的PICO原则,计算机检索Cochrane Library、MEDLINE、Embase、CBM、CNKI、VIP、万方数据库,对所获证据进行严格质量评价,采用RevMan5.0软件对纳入文献进行Meta分析,最后结合患者意愿制定治疗方案。结果共纳入18个前瞻性研究,2个系统评价,1篇临床指南。证据结果表明:检索未发现利妥昔单抗与脾切除比较的随机对照试验;利妥昔单抗对约60%的患者治疗有效,其副作用较脾切除轻且发生率低。对国内外利妥昔单抗治疗ITP的Meta分析研究结果显示,脾切除不影响利妥昔单抗的治疗效果(P>0.05)。结论慢性免疫性血小板减少性紫癜患者在脾切除之前选用利妥昔单抗治疗适当可行,也是不适宜脾切除患者的最佳选择。

中国甘肃人群髓过氧化物酶基因多态性与急性白血病易感性的关系

本研究旨在探讨甘肃汉族人群髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)基因多态性和急性白血病易感性的关系。用1∶1配对病例-对照方法及LDR-PCR方法,对100例急性白血病(AL)患者和100例非血液病、非肿瘤者作为对照进行mpo基因G463A突变分析。结果发现,AL病例组mpo基因a等位基因频率(19%)和ga/aa基因型频率(31%)均低于对照组(28%和54%)。携带ga/aa基因型的个体发生AL的相对风险度为其野生型(gg)的0.383倍(95%CI=0.215-0.682)。进一步分层分析显示,急性髓系白血病(AML)病例组ga/aa基因型频率(28.2%)低于对照组(54%)(p<0.01)。携带ga/aa基因型的个体发生AML的相对风险度为其野生型(gg)的0.346倍(95%CI=0.157-0.546)。急性淋巴细胞白血病(ALL)病例组mpo基因a等位基因频率和ga/aa基因型频率均与对照组无统计学差异(p>0.05)。结论:本研究人群mpo基因多态性与AML遗传易感性相关,等位基因a对AML易感性有保护作用,但与ALL易感性无关联。

AZT对白血病细胞株KG-1a细胞增殖和端粒酶活性的影响

本研究探索端粒酶抑制剂3'-叠氮-2',3'-脱氧胸腺核苷(AZT)对人急性髓系白血病细胞株KG-1a细胞增殖和端粒酶活性的影响。用MTT法检测不同浓度AZT分别作用24、48、72 h时KG-1a细胞增殖水平;流式细胞术检测AZT对KG-1a细胞周期及细胞凋亡的影响;TRAP-PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性;RT-PCR法检测细胞端粒逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。结果表明,AZT能抑制KG-1a细胞增殖,抑制作用具有时间和浓度依赖性;随AZT浓度的增加,处于S期的细胞数目减少,G2/M期细胞数目增加,且出现凋亡峰;AZT作用后实验组细胞的端粒酶活性降低,hTERT-mRNA表达下降,下调程度与AZT浓度呈正相关。结论:AZT在体外能明显抑制KG-1a细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制与降低端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。

艰难梭菌毒素A对K562细胞生长增殖的影响

本研究探讨艰难梭菌毒素A(Tcd A)对人慢性髓系白血病(CML)细胞株K562生长增殖的影响及其机制。采用四氮唑蓝比色法(MTT法)观察Tcd A对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期及线粒体膜电位的变化;免疫细胞化学法观察细胞色素C蛋白的表达水平;DNA凝胶电泳技术检测细胞凋亡。结果表明,不同浓度的Tcd A明显抑制K562细胞增殖,呈一定的时间和浓度依赖性;流式细胞仪检测显示,细胞阻滞于G0/G1期,并出现凋亡峰,细胞内细胞色素C蛋白含量增高;DNA凝胶电泳出现片段化的梯形带。结论:Tcd A可以抑制K562细胞的生长增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与线粒体膜电位降低,基质中释放出致凋亡活性物质细胞色素C有关。

GSTP1、CYP2E1基因遗传多态性与急性白血病易感性的关系

本研究旨在探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(GSTP1)和细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因多态性与急性白血病易感性的关系。采用1∶1配对病例-对照、LDR分型方法对150例急性白血病(AL)患者和150例对照组进行GSTP1和CYP2E1的基因多态性进行检测。结果表明:AL病例组GSTP1基因G等位基因频率(26.7%)和Ile/Val和Val/Val基因型频率(44%)均高于对照组(10%和16%)。携带突变基因型(Ile/Val和Val/Val)个体发生AL的相对风险度为Ile/Ile个体的3.226倍(95%CI=1.527-5.236)。进一步分层分析表明,急性髓系白血病(AML)病例组Ile/Val和Val/Val基因型频率(55.0%)高于对照组(16%)(p<0.05)。携带Ile/Val和Val/Val基因型的个体发生AML的相对风险度为野生基因型(Ile/Ile)个体的2.214倍(95%CI=1.009-3.260)。AL病例组CYP2E1基因C2等位基因频率(16.7%)和C1C2/C2C2基因型频率(30%)均高于对照组(13.9%和26%),但其差异均无统计学意义。进一步分层分析显示,急性髓系白血病(AML)病例组突变基因型(C1C2/C2C2)频率(36%)高于对照组(32%),其差异无统计学意义。两基因多态交互作用分析显示,GSTP1杂合型和突变型者(Ile/Val+Val/Val)且CYP2E1杂合型和突变型者(C1C2+C2C2)发生AML的风险约增加3.208倍。结论 :GSTP1与急性髓系白血病易感性相关,携带GSTP1突变基因型(Ile/Val+Val/Val)个体可降低白血病的发病风险;CYP2E1与急性白血病易感性无关,GSTP1野生型且CYP2E1杂合型和突变型联合作用可进一步降低AML的发病风险。

艰难梭菌毒素A对K562细胞Rho GTPases及细胞骨架的影响

目的:研究艰难梭菌毒素A(TcdA)对白血病K562细胞株Rho GTPase及细胞骨架的影响。方法:体外培养K562细胞经不同浓度的TcdA处理,采用四唑蓝比色试验(MTT)检测TcdA对K562细胞增殖的影响;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞骨架调节蛋白相关基因cdc42、RhoA、Rac1 mRNA表达的变化;激光共聚焦显微镜观察TcdA作用48h后细胞微丝的变化。结果:TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率(IR)为47.67%,TcdA可下调细胞骨架调节蛋白相关基因cdc42、RhoA、Rac1 mRNA表达,与对照组相比差异具有统计学意义(P <0.05)。激光共聚焦显微镜显示,TcdA处理后细胞内微丝含量下降。结论:艰难梭菌毒素A可抑制白血病细胞株K562增殖,其作用机制可能与Rho GTPase通路蛋白相关基因的表达下降,微丝形成受抑相关。

根除幽门螺杆菌治疗特发性血小板减少性紫癜的Meta分析

目的评价根除幽门螺杆菌治疗特发性血小板减少性紫癜的临床疗效。方法检索1998年1月至2010年10月PubMed、EMbase、CNKI、维普中文科技期刊数据库等,纳入有关抗Hp方案治疗ITP的RCT。按Meta分析方法提取有效数据,用RevMan5.0.24软件对结局指标进行Meta分析。结果共纳入11个RCT,包括605例患者。Meta分析结果显示:实验组的总有效率高于对照组[OR=3.96,95%CI(2.52,6.23),P<0.000 01];实验组治疗3、6个月后血小板升高程度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.000 01);实验组的复发率低于对照组[OR=0.21,95%CI(0.09,0.46),P=0.000 01]。结论抗Hp治疗ITP可提高治疗有效率,并能降低复发率,可作为治疗ITP有效可行的方法。

GSTP1基因多态性与急性髓系白血病易感性的关系

目的:研究甘肃汉族人群谷胱甘肽-S-转移酶P1(GSTP1)基因多态性和急性髓系白血病(AML)易感性的关系。方法:用1∶1配对病例-对照方法,LDR-PCR分型法,对78例AML患者和100例对照组进行GSTP1基因A81G突变分析。结果:AML病例组GSTP1基因G等位基因频率(26.9%)和突变基因型(Ile/Val和Val/Val)频率(41%)均高于对照组(11.5%和19%)。携带Ile/Val和Val/Val基因型的个体发生AML的相对风险度为其(Ile/Ile)基因型个体的2.981倍(95%CI=1.35～4.68)。结论:本研究人群NQO1基因多态性与AML遗传易感性相关,等位基因A对AML易感性有保护作用。

达沙替尼不同治疗方案治疗慢性髓细胞白血病疗效的Meta分析

目的系统评价达沙替尼140 mg,qd和70 mg,bid治疗慢性髓细胞白血病(chronic myeloidleukemia,CML)的疗效。方法计算机检索EMbase(1974～2011.11)、PubMed(1966～2011.11)、CochraneLibrary(2011年第11期)、CBM(1979～2011.11)、VIP(1989～2011.11)、CNKI(1994～2011.11)和WanFangData(1997～2011.11)等数据库并手工检索相关领域的杂志,查找比较达沙替尼140 mg,qd和70 mg,bid治疗CML的随机对照试验。对符合纳入标准的RCT,由两位评价员按Cochrane系统评价的方法,独立进行资料提取、质量评价并交叉核对后,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析。结果共纳入4个研究(2个随机对照试验,不同随访时间),862例患者。Meta分析结果显示,达沙替尼140 mg,qd和70 mg,bid长期治疗CML时,两者完全血液学反应[RR=0.97,95%CI(0.88,1.07),P=0.58]、完全细胞遗传学反应[RR=0.94,95%CI(0.80,1.11),P=0.47]及主要细胞遗传学反应[RR=0.99,95%CI(0.86,1.13),P=0.86]差异均无统计学意义;短期治疗CML慢性期(CP-CML)时,完全血液学反应[RR=0.99,95%CI(0.90,1.07),P=0.73]、完全细胞遗传学反应[RR=0.99,95%CI(0.78,1.26),P=0.95]及主要细胞遗传学反应[RR=1.01,95%CI(0.83,1.22),P=0.95]的差异也均无统计学意义;对长期治疗CML慢性期及进展期进行亚组分析,结果显示其完全血液学反应、完全细胞遗传学反应及主要细胞遗传学反应的差异均无统计学意义。结论达沙替尼140 mg单次和70 mg双次用药治疗CML的疗效相似。但鉴于纳入研究的方法学质量存在中度选择性偏倚的可能性,可能影响结果真实性,因此上述结论还有待开展更多高质量大样本的随机双盲临床对照试验来验证。

黄芪注射液治疗再生障碍性贫血疗效和安全性的系统评价

目的系统评价黄芪注射液+雄激素与雄激素单用比较治疗再生障碍性贫血(再障)的疗效和安全性。方法计算机检索Cochrane Library(2011年第3期)、PubMed(1966～2011.3)、EMbase(1974～2011.3)、CNKI(1994～2011.3)、VIP(1989～2011.3)和万方(1997～2011.3)数据库等,按照纳入排除标准选择文献、提取资料和进行质量评价后,采用RevMan 5.0.24软件进行Meta分析。结果共纳入7个随机对照试验,合计518例患者。Meta分析结果显示:黄芪注射液+雄激素治疗组的总有效率优于单用雄激素组,其差异有统计学意义[OR=3.12,95%CI(2.09,4.66),P<0.00001];治疗组与对照组的骨髓增生升级程度相当,其差异无统计学意义[OR=1.93,95%CI(0.85,4.38),P=0.11];治疗组的不良反应明显少于对照组,其差异亦有统计学意义[OR=0.30,95%CI(0.12,0.76),P=0.01]。结论黄芪注射液+雄激素治疗再障的有效率高于单用雄激素,且不良反应少。但由于纳入研究样本量小且质量较低,上述结论尚需更多高质量的研究来加以证实。

利妥昔单抗联合FC方案治疗慢性淋巴细胞白血病的疗效和安全性系统评价

目的系统评价利妥昔单抗与氟达拉滨和环磷酰胺(FC)组成的FCR方案对慢性淋巴细胞白血病(CLL)的治疗效果和安全性。方法计算机检索PubMed、Cochrane Library、SpringerLink、CNKI和CBM数据库2000～2011年期间发表的关于FCR方案和FC方案比较治疗CLL的随机对照试验(RCT)。由两位研究者独立进行文献筛选、资料提取和质量评价后,采用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果共纳入3个RCT,共1 623例患者。Meta分析结果显示:FCR方案与FC方案相比,两者无进展生存期(P<0.001)、总体生存率[OR=1.94,95%CI(1.49,2.53),P<0.000 01]、完全缓解率[OR=2.54,95%CI(2.00,3.22),P<0.000 01]、Ⅲ/Ⅳ级中性粒细胞减少症发生率[OR=1.60,95%CI(1.33,1.92),P<0.000 01]、总的Ⅲ/Ⅳ级不良反应发生率[OR=1.72,95%CI(1.35,2.20),P<0.000 1]差异均有统计学意义;而两者部分缓解率[OR=0.74,95%CI(0.35,1.55),P=0.43]、Ⅲ/Ⅳ级血小板减少症[OR=0.97,95%CI(0.74,1.27),P=0.83]、自身免疫性溶血性贫血[OR=0.86,95%CI(0.59,1.27),P=0.45]发生率差异均无统计学意义。结论利妥昔单抗联合氟达拉滨和环磷酰胺组成的FCR方案可明显延长CLL的无进展生存期,提高总体生存率和完全缓解率。但部分患者也会出现Ⅲ/Ⅳ级中性粒细胞减少症、血小板减少症、自身免疫性溶血性贫血、恶心呕吐等不良反应。

甘肃人群NQO1基因多态性与急性髓系白血病易感性的关系

目的:研究醌氧化还原酶(NQO1)基因多态性和急性髓系白血病易感性的关系。方法:用1:1配对病例-对照方法,PCR-LDR方法,对78例急性髓系白血病患者(AML)和100例对照人群进行NQO1基因突变分析。结果:AML病例组NQO1基因T等位基因频率(43%)和TC/TT基因型频率(63%)均高于对照组(28%和43%)。携带TC/TT基因型的个体发生AML的相对风险度为其野生型(CC)的1.67倍(95%CI=1.212～2.727)。结论:NQO1基因多态性与AML遗传易感性相关,等位基因C对AML易感性有保护作用。