硫酸软骨素蛋白多糖在脊髓损伤中的研究进展

硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs)是中枢神经系统细胞外基质的组成部分,在中枢神经系统发育、正常维持及病理过程中都发挥着关键的作用。脊髓损伤后,损伤部位CSPGs的表达明显上调,这主要源于病变部位活化的星形胶质细胞。CSPGs的上调会限制脊髓损伤部位的轴突再生、传导和再髓鞘化,并且可以促进脊髓损伤中的炎症反应,不利于脊髓损伤后神经功能恢复。因此,抑制CSPGs可能是促进脊髓损伤后轴突再生和功能恢复的有效治疗方法。本文对CSPGs在脊髓损伤中的研究现状进行综述。

不同强度流体剪切力对MC3T3-E1成骨细胞内Piezo1蛋白表达的影响

目的:研究在不同强度的流体剪切力作用下,MC3T3-E1成骨细胞内Piezo1蛋白的表达差异。方法:对载玻片上贴附的MC3T3-E1成骨细胞加载不同强度(0、3、6、9、12、15、18 dyne/cm^2)流体剪切力45 min,通过免疫荧光和Western Blot分别观察MC3T3-E1成骨细胞内Pieoz1蛋白的表达。结果:免疫荧光及Western Blot结果显示,随着流体剪切力强度的增加,MC3T3-E1成骨细胞内Piezo1蛋白表达量逐渐递增,6 dyne/cm^2时达顶峰,此后逐渐下降,15、18 dyne/cm^2时与空白组水平相当,显微镜下可观察到细胞结构破坏,细胞被冲散。结论:流体剪切力可促进MC3T3-E1成骨细胞内Piezo1蛋白表达;加力6 dyne/cm^2时,Piezo1表达最高;较大的流体剪切力非但不能促进MC3T3-E1成骨细胞内Pizeo1蛋白的表达,反倒对细胞起破坏作用。

机械应力对成骨细胞影响的研究进展

成骨细胞是参与骨的生长、重建和修复的关键细胞,机械应力刺激对成骨细胞发育、增殖和修复起着十分重要的作用。通过对体外培养的成骨细胞施加不同的机械应力刺激(力的加载方式、大小、频率、时间等),研究成骨细胞在细胞、分子、基因水平上产生的生物学效应,为细胞生物力学实验技术、临床疾病的诊疗以及组织工程学的研究和发展提供指导意义。就近年来对体外培养成骨细胞施加机械应力的加载方式,以及不同应力刺激对成骨细胞的影响进行综述。

Piezo1离子通道介导的流体剪切应力抑制MLO-Y4骨细胞凋亡

目的:研究Piezo1机械敏感性离子通道对骨细胞的调控作用。方法:应用课题组研发的流体剪切力(FSS)加载装置,使用免疫荧光探究FSS对Piezo1通道在MLO-Y4中影响的最佳强度;对Piezo1使用FSS、激动剂Yoda1或阻滞剂GsMTx4进行干预。使用Western Blot探究Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白的表达量;使用Hoechst-33258以及流式细胞凋亡检测MLO-Y4骨细胞的凋亡比例。结果:免疫荧光染色结果表明FSS对MLO-Y4骨细胞中Piezo1的表达呈现先增加后降低的单峰趋势,其中以9 dyne/cm2加载30 min为最佳刺激条件。使用Yoda1抑制MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05),使用GsMTx4促进MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05)。Piezo1介导的FSS抑制MLO-Y4细胞凋亡(P<0.05)。结论:Piezo1机械敏感性离子通道介导的FSS在9 dyne/cm2条件下抑制MLO-Y4骨细胞凋亡,且FSS在该条件下可以有效逆转Piezo1阻滞剂GsMTx4在4μmol/L作用0.5 h下促进MLO-Y4细胞凋亡作用。

失神经对大鼠胫骨骨折愈合影响作用的实验研究

目的通过观察失神经后大鼠胫骨骨折的愈合情况,探讨中枢神经系统影响失神经骨折愈合的作用机制。方法将64只SD成熟雌性大鼠随机分为失神经骨折组、单纯骨折组,每组各32只。分别于术后第7、14、21、28天进行BBB评分,观察骨折愈合情况,并行左下肢骨折部位X线检查、胫骨湿重称量、骨痂体积测量,进行相关统计学分析。结果 BBB行为学评分提示两组大鼠在术后各时间点具有统计学意义(P<0.05)。通过比较失神经骨折组与单纯骨折组BBB评分结果,提示在术后各时间点,失神经骨折组大鼠运动功能恢复速度明显减慢。X线片提示失神经骨折组大鼠骨折处有大量骨痂生成,且愈合速度明显加快。在术后7天,两组大鼠胫骨湿重称量、骨痂体积测量则无统计学意义(P>0.05),而在术后14至28天,失神经骨折组与单纯骨折组相比,胫骨湿重称量、骨痂体积测量分别具有统计学意义(P<0.05),提示在失神经骨折中晚期会生成过量骨痂。结论中枢神经系统在骨折愈合中起重要的调节作用,完整的神经支配是骨折愈合的必要条件。

组织工程骨膜修复兔大段骨缺损的可行性实验研究

目的探索组织工程骨膜体内成骨修复兔大段骨缺损的可行性。方法培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),以成骨诱导剂诱导成骨分化后,与猪小肠粘膜下层(SIS)复合构建组织工程骨膜。扫描电镜(SEM)观察细胞与材料复合情况。选4月龄新西兰大白兔24只,制备单侧桡骨干4 cm缺损模型。随机选12只植入组织工程骨膜,作为实验组;另12只骨缺损旷置,作为对照组。术后6周后摄x线片观察,切取整段桡骨作为标本行HE及Masson染色观察。结果BMscs诱导14 d后可成骨分化。SEM显示构建的组织工程骨膜上黏附大量种子细胞。x线片观察:实验组骨缺损处有长柱状新生骨形成,并与截骨端骨性融合,密度与正常骨相近;对照组骨缺损处无成骨征象,密度同周围软组织影。组织学观察:实验组骨缺损处有新骨形成,新生骨组织中可见丰富的血管腔及不规则髓腔样结构;对照组骨缺损处仅为纤维结缔组织,无骨组织形成。结论以SIS和BMSCs构建的组织工程骨膜有修复兔大段骨缺损的可行性。组织工程骨膜有进一步深入研究、开发的价值和前景。

骨髓间充质干细胞的培养及其体外标记跟踪的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外分离培养;观察Brdu、DAPI以及Hoechst33342体外染色的合适时间和最佳剂量,比较三种方法的优缺点。方法 BMSCs取自SD雄性大鼠的股骨和胫骨,然后采用贴壁分离培养法对BMSCs进行分离培养,当BMSCs培养至第三代时,采用流式细胞仪对其表面抗原CD34、CD44、CD45进行测定;同时分别用Brdu、DAPI以及Hoechst33342对BMSCs进行染色标记,Brdu标记效果用免疫细胞化学方法检测,DAPI和Hoechst33342的标记率用荧光显微镜观测,最后用MTT检测BMSCs的细胞增值率,观察三种不同方法体外染色的合适时间和最佳剂量,同时比较其优缺点。结果流式细胞仪检测发现BMSCs表达CD44阳性,CD34和CD45阴性;BMSCs染色前后其表面标志表达无明显统计学差异(P<0.05);Brdu染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是10μmol/L、48小时;DAPI染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是20μg/ml、30分钟;Hoechst33342染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是5μg/ml、1小时。结论采用粘附贴壁分离培养法能够有效获取高纯度的BMSCs;运用Brdu、DAPI以及Hoechst33342三种方法标记BMSCs效果良好,方法可靠、合理,为研究BMSCs体内追踪打下了基础。

ERK5阻断剂BIX02188介导的流体剪切力对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的观察在流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)作用下,成骨细胞(MC3T3-E1)中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)mRNA的表达情况,以及探讨ERK5信号通路在其中的作用。方法用不同浓度的ERK5特异性阻断剂BIX02188干预MC3T3-E1成骨细胞,用MTT比色法检测490nm吸光度值,观察成骨细胞的增殖情况,并检测ERK5 mRNA的表达情况。给成骨细胞加载生理强度为12 dyne/cm^2的流体剪切力,观察OPG、RANKL mRNA的表达。结果浓度为15μM的ERK5特异阻断剂BIX02188能够有效的抑制ERK5 mRNA的表达;生理强度为12 dyne/cm^2的FSS能够显著地促进OPG mRNA表达(P<0.05),降低RANKL mRNA表达(P<0.05);当BIX02188干预成骨细胞后,FSS对成骨细胞OPG、RANKL mRNA的影响明显减弱(P<0.05)。结论 ERK5特异阻断剂BIX02188能够有效介导FSS对成骨细胞OPG、RANKL mRNA的表达。

大鼠T_(10)脊髓半横断损伤模型的制备及评价

目的通过制备大鼠T10脊髓半横断动物模型,模拟脊髓损伤,研究其病理生理变化,为研究急性脊髓损伤的机制及治疗提供基础。方法成年雌性SD大鼠24只,随机分为两组:脊髓损伤组和假手术组,每组各12只。脊髓损伤组咬除棘突及相应椎板,横向半切断T10脊髓,假手术组仅行椎板切除术。分别于术后1、3、5、7、14、21、28 d进行BBB运动功能评分,同时于术后7、14、21、28 d分别检测其运动诱发电位和体感诱发电位,记录N1和P1波潜伏期,进而评估神经传导通路的完整性。结果脊髓损伤组大鼠术后BBB运动功能评分较低,在术后各时间点与假手术组相比具有统计学意义(P<0.05)。神经电生理检测结果表明,与假手术组相比,脊髓损伤组运动诱发电位和体感诱发电位潜伏期均具有统计学意义(P<0.05)。结论通过本实验方法建立大鼠急性脊髓损伤模型,制作过程简单,易于复制,可用于脊髓损伤的相关研究。

中国临床路径的证据来源调查

目的分析目前我国临床路径证据的来源情况。方法从国家卫生和计划生育委员会网站获取已批准的临床路径,由2名研究者独立提取资料,对路径的发布时间、关注疾病、证据报告等方面进行描述性分析。对路径诊断和治疗部分不同证据发表与路径发布时间间隔进行方差分析并使用LSD法进行两两比较。结果临床路径引用证据的类型主要为指南、教科书、标准指标和共识意见。其中约80%引用了临床实践指南,36%引用了教科书。每个路径引用证据数量的中位数为2个。85%的证据报告了其发表时间,路径发布与证据发表的平均时间间隔为5.2年,在时间间隔大于15年的证据中占比最大的为教科书。除教科书对比标准指标的时间间隔外,其他证据发表与路径发布时间间隔的两两比较均有显著差异(P<0.05)。结论我国临床路径的证据类型选择基于循证医学的理念,但引用证据的时间范围跨度较大。制定临床路径时,要重视最新的研究证据,增强临床路径制订过程的透明性,采用证据质量评价标准对引用证据进行评价和选择。