盐生植物四翅滨藜Actin基因片段的克隆及表达分析

在研究植物功能基因表达模式中肌动蛋白(Actin)编码基因是最常用的内参基因之一。本研究根据藜科植物Actin基因编码区保守序列设计一对简并引物,以盐生植物四翅滨藜(Atriplex canescens)4周龄幼苗叶片的总RNA为模板,采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法扩增出Actin基因片段并连接到pMD19-T载体上,所得阳性克隆经PCR检测后进行测序。序列分析结果表明,该基因片段长度为598bp,编码198个氨基酸;该序列与Genbank中登录的高等植物Actin基因核苷酸序列同源性在84%以上,氨基酸序列同源性在94%以上。说明其为Actin基因片段,具有高度保守性,命名为AcACT。序列进化分析显示,AcACT与甜菜(Beta vulgaris)和碱蓬(Suaeda glauca)肌动蛋白编码基因的亲缘关系最近。荧光定量PCR分析结果表明,AcACT在盐处理下各组织中的表达量恒定。表明AcACT可作为内参基因来研究四翅滨藜耐盐相关基因的表达模式。

红砂肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

肌动蛋白(Actin)基因是研究植物功能基因表达模式中最常用,也是最重要的内参基因。本研究以泌盐型强旱生植物红砂(Reaumuria soongorica)地上部总RNA为模板,根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR方法克隆其Actin基因片段。序列分析结果表明,该基因片段长度为598bp,编码198个氨基酸,与GenBank中登陆的其他植物Actin基因核苷酸序列和氨基酸序列的一致性分别在82%和90%以上,说明其为Actin基因片段,命名为RsACT。进化分析显示,RsACT与陆地棉(Gossypium hirsutum)和白杨(Populus trichocarpa)肌动蛋白的亲缘关系最近。