基于气味信息和活性成分的三七产地溯源研究

目的基于气味信息和活性成分对三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen进行产地溯源研究。方法采集4个产地的三七样品,测定其活性成分(人参皂苷R1、Rg1、Rb1、Rd)和气味信息并进行多元统计分析和神经网络分析。结果方差分析结果表明,三七产地对其皂苷含量、电子鼻传感器特征响应信号影响显著;典则判别分析和聚类分析可实现三七产地的判别,多层感知器神经网络分析对三七产地的判别准确率均在87%以上;结合偏最小二乘回归分析、多元线性回归分析、多层感知器神经网络分析构建皂苷含量的预测模型,气味信息与皂苷含量间存在相关关系(0.42<r<0.95)。结论基于电子鼻和高效液相色谱法对三七产地判别具有可行性,可为三七开发利用、产地追溯、真伪鉴定提供科学依据。

MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究

分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。

BHK-21细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果显示,2个来源的BHK-21细胞系均呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体为21对,二倍体均占主体;外源质粒在该2株细胞系中能进行复制和表达。这可为开展BHK-21细胞系及口蹄疫疫苗的研究与开发提供基础理论依据和细胞资源。

蛋白水解物制备工艺及其在生物技术领域中的应用研究进展

蛋白水解物是蛋白质经酶、酸、碱和发酵等方法水解得到的混合物,由于其含有丰富的氨基酸和多肽,并为细胞生长提供多种营养成分、贴壁因子及生长因子类似物等,从而在生物技术领域中得到了广泛的应用。本文综述了蛋白水解物制备工艺、在生物技术领域中的应用及其在细胞培养中对细胞增殖、代谢的影响,以期为蛋白水解物的开发和应用提供参考。

动物细胞生物反应器大规模培养技术研究进展

生物反应器大规模培养技术在生物制剂领域和医学领域发挥着至关重要的作用,生物反应器大规模培养动物细胞的方法有微载体培养、片状载体培养和全悬浮培养等,与传统的动物细胞大规模培养工艺相比有明显的技术优势。本文主要分析了动物细胞生物反应器大规模培养技术的研究进展,以供参考。

兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系的建立

目的：通过耳缘组织细胞的分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源.方法：采用植块法培养兰州黑白花奶牛的耳缘组织原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中冷冻保存,并对保存的耳缘组织细胞系进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内、外源病毒因子检查.结果：兰州黑白花奶牛耳缘组织植块培养时第4天可见细胞从植块边缘生长,第6天消化传代后生长变快,形态以上皮型为主.冷冻保存的兰州黑白花奶牛耳缘细胞系复苏活力达95%,生长良好,生长曲线呈近＂S＂型,最大增殖浓度3.36×105/ml,对数生长期倍增时间为24 h,无菌、支原体和内、外源病毒因子检查为阴性.结论：成功建立了兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系,使这一物种的种质资源在细胞水平上得以长期保存.

PK15细胞的生物学特性和质量评价研究

为评价PK15细胞能否用于兽用疫苗的研究和生产,对其进行了生物学特性研究和微生物污染及病毒外源因子检测。结果表明:PK15细胞复苏活力为91.77%,呈贴壁性生长,形态为上皮型;生长曲线呈"S"型,最大增殖浓度为24.67×104个·mL-1,群体倍增时间为21.08h;同工酶为5条,染色体2n=38,证实为猪源性且没有发生细胞间的交叉污染;细菌、真菌和支原体检查均为阴性;细胞体外培养观察、血吸附试验、接种鸡胚和动物以及特异性荧光抗体结合物检查病毒均为阴性;能较好地表达外源基因,达到了兽用疫苗生产用细胞的质量要求,可为以该细胞为基质的疫苗研究和生产提供细胞资源。

滩羊种质资源细胞库的构建及细胞的生物学鉴定

目的：通过对滩羊体细胞的体外分离培养和保存,在细胞水平上保存其种质资源。方法：用胰蛋白酶消化分离培养肾和睾丸组织的原代细胞,用组织块法培养耳缘组织的原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中保存。细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性和微生物污染的检查。结果：滩羊肾、睾丸和耳缘组织的原代细胞生长良好,细胞冻存后复苏检查的细胞活力在91.12%-97.74%,细胞形态和长势良好,生长曲线呈近＂S＂型曲线,最大增殖浓度为在2.12x3.19×10^5/ml,倍增时间在24.62-28.1 h,细菌、真菌、支原体和病毒检查为阴性。结论：滩羊的种质资源细胞库成功构建,使这一物种的种质资源在细胞水平上得到保存。

基于电子鼻技术的湄潭春茶产地溯源研究

为实现不同产地湄潭春茶的快速、客观判别,基于电子鼻与多元统计分析定性判别不同产地湄潭春茶间的差异,并定量预测其产地。对电子鼻信号进行分析,发现其响应信号在传感器S7、S9、S6和S2的强度均较明显;方差分析发现湄潭春茶产地对传感器响应影响均显著;基于第80 s数据进行主成分分析(PCA)和典则判别分析(CDA),发现其基本能区分不同产地的湄潭春茶,且数据点的分布均与各产地地理位置分布呈现一定特征规律性,但区分效果不够理想。为进一步提高对不同乡镇茶叶的区分效果,利用不同特征值(平均值、曲线面积、最大值、斜率、主成分分析优选参数、loading优选参数)进行判别分析,其中平均值、曲线面积、最大值判别结果优于80 s时的判别结果;斜率、主成分分析优选参数、loading判别结果比80 s时的判别结果差;以响应曲线的平均值进行判别时,可达到100%正确识别。多层神经网络分析(MLP)作为效果最佳、决定系数最高(R_(c)^(2)=0.9855,R_(p)^(2)=0.9941)的茶叶产地预测模型,可以实现对不同产地湄潭春茶的有效预测。因此,以特征值中平均值数据作为输入,采用电子鼻结合多元统计与神经网络分析,可以实现对春茶产地的判别,以期为湄潭春茶开发利用、产地追溯、真伪鉴定提供科学依据。

基于流感疫苗生产用MDCK细胞的安全性评价

随着流感疫苗产业升级,传统的鸡胚基质疫苗已经满足不了大众需求,世界卫生组织建议使用细胞来代替鸡胚生产流感疫苗,MDCK细胞被认为是最适合于流感疫苗生产的细胞系之一,但由于MDCK细胞会使免疫缺陷型小鼠形成肿瘤,因此其安全性存在争议。本文阐述了MDCK细胞的安全性问题及生产中的应对策略,旨在为细胞基质流感疫苗的生产提供理论基础。

^(60)Coγ射线辐照对新生牛血清总蛋白含量、噬菌体及促Vero细胞生长的试验研究

试验将已知大肠杆菌噬菌体为阳性的同批新生牛血清,分别用剂量为4、8、12、18、24、28,32、40、44、48kGy的60Coγ射线辐照,检测其中的大肠杆菌噬菌体、总蛋白含量及对促Vero细胞生长效应的影响,以观察辐射对新生牛血清的影响.结果表明,当剂量大于等于8kGy时,噬菌体结果均为阴性;当辐射剂量为8、12、24、28、32、40、44、48kGy时,血清总蛋白含量无明显差异(P>0.05);当辐照剂量大于等于16kGy时Vero细胞最大增殖浓度随辐照剂量的增大而降低;倍增时间在8kGy、16kGy、24kGy时没有显著变化 从32kGy开始倍增时间增加 提示用60Coγ射线辐照可使阳性大肠杆菌噬菌体的牛血清转阴,在小于16kGy时对促细胞生长试验无影响;在大于24kGy时对细胞的分裂增殖有影响。

我国新生牛血清的生产现状

文章针对我国新生牛血清的生产现状,从行业规范、原料采集点建设、生产规模、质量管理和存在的问题等进行总结分析.

酶解制备牦牛乳酪蛋白降血压肽的初步研究

目的:牦牛乳富含酪蛋白,其经酶解制备的降血压肽以安全性高、无副作用等优点已成为乳品开发和高血压防治药物研究的新热点.方法:本实验对从牦牛乳中提取的酪蛋白,依据复合蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶各自的最适pH及温度采用酶解方法制备降血压肽,并且以ACE抑制活性为指标初步筛选最佳水解酶.结果:五种酶ACE抑制肽抑制率分别为:复合蛋白酶为39.02%,中性蛋白酶为67.48%,碱性蛋白酶为56.10%,木瓜蛋白酶为71.54%,胰蛋白酶为8.94%.结论:说明,在最适pH及温度条件下,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为制备降血压肽的最佳酶选,这为后续进一步的制备降血压肽实验提供依据.

瑞士乳杆菌发酵制备牦牛乳酪蛋白源性降血压肽的工艺研究

目的:以牦牛乳源酪蛋白为原料,利用瑞士乳杆菌,对发酵法制备降血压肽的工艺进行初步探讨.方法:试验首先采用凝乳酶沉淀法从牦牛乳中提取酪蛋白,依据瑞士乳杆菌的发酵特点,按5%(体积比)接菌量进行发酵制备降血压肽.然后并以降血压肽对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制率为指标,主要探讨了底物浓度、pH值、发酵时间三因素对瑞士乳杆菌发酵法制备降血压肽工艺的影响.结果:在接菌量为5%,其他三因素各设置五个水平进行工艺优化,最优工艺条件为:底物浓度4%、发酵pH值8.0、发酵时间16 h.此工艺条件下ACE抑制率可达约68%.结论:通过实验说明底物浓度、pH值、发酵时间等参数的控制对发酵酪蛋白制备抑制肽很重要,此试验数据为后续进一步完善制备降血压肽的实验奠定了重要的基础.

大肠杆菌内毒素对Vero细胞培养的作用研究

将精制大肠杆菌内毒素(E.COliEndotoxin)加入含血清细胞培养液(MEM)中,配制成浓度分别为50、100、200、500EU/mL的细胞培养液 用此培养液对Vero细胞进行培养,测定细胞生长曲线、细胞平均倍增时间、最大增殖浓度及台盼蓝拒染率等指标,研究大肠杆菌内毒素对非洲绿猴肾细胞(Vero)培养的影响 结果显示,内毒素含量为50EU/mL时,Vero细胞仍能正常生长 当内毒素含量逐渐升高,培养时间逐渐延长时,细胞的增殖速度及活率明显下降 这表明,内毒素对Vero细胞的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间。

培养基对MDCK细胞贴壁率的影响

为确定培养基种类对犬肾细胞(MDCK)贴壁率的影响,用DMEM、MEM、M199和RPMI1640四种培养基加10%新生牛血清后分别以10个/cm2的密度接种培养MDCK细胞,培养14 d计数每种培养基培养后形成的细胞集落数,并计算贴壁率。结果表明,四种培养基对MDCK细胞均能形成明显的细胞集落,贴壁率分别为78.56%、60.23%、41.13%和39.61%,以DMEM培养基培养MDCK的贴壁率最高。

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从牦牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,其最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5%、水解6 h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2%.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.

不同浓度血红蛋白对小鼠骨髓瘤细胞体外培养的影响

用含不同浓度的牛源性血红蛋白细胞培养液培养小鼠骨髓瘤细胞，通过细胞计数绘制生长曲线，计算最大增殖浓度和倍增时间。并进行比较分析．结果表明：当培养液的血红蛋白浓度在1-5rag／dL时小鼠骨髓瘤细胞生长较好，细胞最大增殖浓度在1．2×10^6／mL以上，倍增时间小于20h，当培养液的血红蛋白浓度为6mg／dL时细胞生长抑制，细胞最大增殖浓度和倍增时间为6．7×10^5／mL和21．6h．由此可见，培养液中血红蛋白浓度≤5mg／dL时不影响细胞生长，达到6mg／dL时抑制细胞生长．

MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究

目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。方法运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID50滴度,分析其病毒敏感性。结果成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞(命名为MDCK-XF02细胞)并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×10^6 cells/mL以上,且差异无统计学意义(P>0.05);连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率差异无统计学意义(P>0.05);三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×10^6 cells/mL接种于5 L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达(14.57±0.47)×10^6 cells/mL,比生长速率分别为(0.027±0.012)h^-1、(0.028±0.013)h^-1、(0.027±0.013)h^-1(P>0.05);接种甲型流感病毒H1N1和H3N2,HA效价达到(6~7)log2HA/25μL、CCID50为(4.35~4.68)lgCCID50/mL;接种乙型流感病毒B/P和BX-35增殖效果更好,HA效价达到(9~10)log2HA/25μL,CCID50为(6.38~7.31)lgCCID50/mL。接种重组禽流感病毒H5亚型Re-5、Re-6、Re-10均能很好的增殖,HA效价达到(7~9)log2HA/25μL、CCID50为(6.21~6.96)lgCCID50/mL。结论本研究获得一株具有自主知识产权的流感/禽流感病毒敏感的无血清悬浮培养型MDCK-XF02细胞株,实现了生物反应器高密度放大培养,为我国开展流感疫苗研究和生产提供细胞基质,也为其他动物细胞悬浮驯化提供参考。

我国新生牛血清^(60)Coγ-射线照射技术的研究现状

新生牛血清是医药生物技术产品重要的原辅材料,其质量是生物制品质量保证的重要环节,国内的新生牛血清用60Coγ-射线照射已有多年,但还没有形成统一的操作规范和技术标准.文章对我国新生牛血清60 Coγ-射线照射的现况进行了分析总结,同时呼吁有关部门加强监督管理和技术指导,使60Coγ-射线照射技术在新生牛血清中得到更规范的应用.