重组猪胰酶在冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中的应用

目的 探究重组猪胰酶(recombinant porcine trypsin, RPT)代替猪源胰酶在冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产中的可能性。方法 选用SPF级地鼠,无菌取肾,用4种不同浓度(0.05、0.10、0.15和0.20 mg/mL)的重组猪胰酶消化原代地鼠肾(primary hamster kidney, PHK)细胞,比较细胞总数、细胞活率以及培养6 d的细胞形态,筛选出最佳重组猪胰酶的工作浓度;对消化液A(含0.30%柠檬酸钠的0.30 mg/mL重组猪胰蛋白酶溶液)和消化液B(含0.30%柠檬酸钠的0.15 mg/mL重组猪胰蛋白酶溶液)消化效果进行对比,选择合适的消化液;对P1代PHK细胞接种狂犬病病毒aG株,确定最佳病毒感染复数(multiplicity of infection, MOI);对不同胰酶消化的细胞接种狂犬病病毒aG株,并比较两者病毒滴度。结果 重组猪胰酶对原代PHK细胞消化的最佳浓度为0.10 mg/mL,消化液A更适用于P1代PHK细胞的消化,细胞培养6 d后形成致密单层,胞体饱满;最佳MOI范围为0.10~0.50,且试验具有高度重复性;镜下观察细胞病变无明显变化,但是重组猪胰酶消化后的细胞比猪源胰酶脱落较少,肉眼可见病毒收获液更澄清;2种胰酶消化制备的P1代PHK细胞病毒滴度差异无统计学意义(P=0.630,P>0.05)。结论 重组猪胰酶可以替代猪源胰酶用于制备冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞),为冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产工艺的改进奠定基础。