人呼吸道合胞病毒减毒活疫苗的研究进展

人呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是一种可引起严重下呼吸道疾病的病原体,易感人群为婴幼儿、老年人及免疫力低下者。目前尚无针对RSV的疫苗和特异而有效的抗病毒药物。研究发现,减毒活疫苗不产生疾病增强效应,在母传抗体的存在下仍可复制,且有较强的免疫原性,被认为是最有希望的RSV疫苗。就RSV减毒活疫苗的研究进展作一综述。

基于融合蛋白的呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起严重下呼吸道感染的病原体,易感人群为婴幼儿、老年人及免疫功能低下者。目前尚无有效的抗病毒药物和预防疫苗。RSV融合蛋白(fusion protein,F蛋白)具有高度保守性,其诱导的抗体可同时抑制A型和B型两个亚型的RSV感染。因此,以F蛋白作为靶抗原的RSV亚单位疫苗、颗粒样疫苗和病毒载体疫苗是目前研究的主要策略。现就基于F蛋白的RSV疫苗研究进展作一综述。

人用疫苗佐剂研究进展

佐剂(adjuvant)是增强和调节疫苗抗原免疫反应的增强剂,与抗原一起使用能使机体产生更强或更平衡的免疫反应。近年来,重组蛋白疫苗、核酸疫苗等新型疫苗是疫苗的研发热点,尤其是重组蛋白疫苗,通常存在免疫原性弱或辅助性T细胞(helper T cells,Th)1/Th2免疫反应不平衡等问题,需要添加佐剂以改善疫苗的免疫效果,因而佐剂开发就成为该类疫苗研发的焦点之一。疫苗佐剂种类繁多且机制复杂,主要分为递送类佐剂、免疫激动剂及复合佐剂等。现就已获批的人用疫苗佐剂以及具有潜力的部分新型佐剂从其作用机制和临床或临床前应用等方面作一概述,为人用疫苗佐剂的相关研究提供理论和应用参考。

人呼吸道合胞病毒兰州株基因组全长cDNA克隆的构建及鉴定

目的构建用于呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)体外拯救的RSV基因组全长cDNA克隆,并进行鉴定。方法根据RSV Long株基因组序列设计并合成引物,利用RT-PCR技术分6段扩增RSV LZ01/09基因组序列并构建克隆载体;测序后,利用重叠PCR与酶切连接技术,根据基因组序列选择特异性酶切位点,引入Kpn I、Xma I和Sal I酶切位点,构建成4个亚克隆载体;将亚克隆载体的插入片段连接至经过改造且包含T7启动子、锤头状核酶、多克隆位点、丁肝核酶、T7终止子的p RSV1载体中,构建RSV基因组全长cDNA克隆;对克隆全长cDNA序列进行测定,与亲本RSV LZ01/09基因组进行同源性比对分析,并与RSV实验参比株进行系统进化树分析。结果测序结果显示,RSV LZ 01/09的基因组全长为15 204 bp,与GenBank公布的RSV基因组序列长度相当,将完整的序列提交GenBank,登录号为KY782635;酶切及测序结果显示,用于RSV全长cDNA克隆构建的基本载体p BSKS-MCS(简称p RSV1)与预期相符,RSV全长基因组cDNA克隆质粒(简称转录载体p RSV1-4F)酶切片段大小与预期一致;同源性比对结果显示,全长cDNA序列与亲本RSV LZ01/09基因组序列同源性高达99.83%;系统进化树分析结果显示,其与RSV-A亚型序列同属于一个分支。结论测序及酶切分析结果表明已成功构建RSVLZ01/09基因组全长cDNA克隆,为建立拯救RSV重组病毒的反向遗传学系统平台奠定了基础。

呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的研究进展

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起急性呼吸道感染的主要病原体之一,给婴幼儿和老年人带来了沉重的疾病负担。自福尔马林灭活呼吸道合胞病毒疫苗(FI-RSV)失败以来,RSV疫苗研究进展缓慢。但近年随着对RSV F蛋白(fusion protein,F)结构研究的不断深入,RSV的候选疫苗取得了快速进展,RSV的候选疫苗种类也逐渐增多,包括RSV mRNA疫苗、重组载体疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、减毒活疫苗和嵌合疫苗等。其中,RSV mRNA疫苗具有成本低、免疫原性强、生产工艺简单、研发周期短、安全性高和易于标准化生产等特点,适合应对新发传染性疾病的防控。现就RSV疫苗的研究现状、RSV mRNA疫苗发展历程及临床研究进展作一概述。

G1P[8]型轮状病毒HN15D2株在Vero细胞上适应及传代稳定性的研究

目的 将G1P[8]型轮状病毒HN15D2株适应于Vero细胞,评价其在Vero细胞上的传代稳定性。方法 将从MA-104细胞上分离纯化的HN15D2毒株按照感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.01、0.05和0.10分别接种Vero细胞,通过显微镜观察细胞病变(cytopathogenic effect, CPE),采用细胞培养半数感染量(50%cell culture infective dose,CCID_(50))检测病毒滴度并绘制病毒增殖曲线,确定HN15D2在Vero细胞上的最适MOI。在病毒传代过程中,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)检测病毒基因带型;通过全基因测序分析病毒在MA-104细胞和Vero细胞中基因序列的同源性;电镜观察HN15D2毒株病毒形态;将HN15D2毒株在Vero细胞上连续传15代后分析各代次病毒滴度及基因电泳带型变化。结果 HN15D2毒株感染Vero细胞后形成明显的细胞病变;当MOI为0.05时,获得的病毒收获液滴度最高,为5.75 lgCCID_(50)/mL,确定病毒接种的最适MOI为0.05;全基因测序结果显示,2种细胞培养获得的病毒11个基因节段同源性在99.7%~100.0%;电镜下可以观察到典型的轮状病毒颗粒;HN15D2毒株在Vero细胞上连续传15代,病毒基因带型未发生变化,滴度稳定在5.25~5.75 lg-CCID_(50)/mL。结论 轮状病毒HN15D2毒株成功适应于Vero细胞,在连续传代过程中具有良好的稳定性。

急性下呼吸道感染患儿中RSV的分离鉴定及分析

目的对2015年兰州单中心急性下呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)进行分离鉴定及分析。方法收集临床急性下呼吸道感染患儿痰分泌物226份,在HEP-2细胞中连续盲传培养3代,收获的培养物用半巢式RT-PCR进行检测,选取强阳性样品进行测序以确定其型别,并对其流行病学特征进行分析。结果 226份样品中RSV阳性样本为76份(阳性率为34%)。RSV阳性患儿中,男女性别比为3∶1;年龄分布<6月龄患儿占45%,6月龄~2岁占35%,>2~5岁的占20%。冬季为发病高峰。76例RSV阳性患儿中,临床诊断依次为毛细支气管炎31例(40.79%)、喘息性支气管炎21例(27.36%)、支气管肺炎20例(26.32%)和支气管哮喘4例(5.26%)。40份强阳性RSV样品经测序确定为B亚型。结论 RSV是引起婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原之一,2015年RSV的流行株主要为B亚型。

重组胰酶在口服轮状病毒活疫苗制备中的初步应用

目的探究重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的可行性。方法确立3种重组胰酶的最佳工作浓度;观察3种重组胰酶和猪源胰酶消化MA104细胞并连续传10代(P1~P10),根据消化时间、消化后细胞总数、细胞活率、细胞生长状况、细胞形态变化等方面进行考量比较;观察轮状病毒LH9株经4种胰酶活化,分别接种对应胰酶传代的MA104细胞上培养,通过病毒滴度(lg CCID_(50)/mL)及RNA-PAGE检测,分析重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的应用。结果连续P1~P10代后3种重组胰酶和猪源胰酶在细胞总数、细胞活率及细胞生长状况,差异均无统计学意义(P>0.05),显微镜观察细胞形态无明显改变。轮状病毒LH9株经不同胰酶活化,接种MA104细胞P1~P10代培养后,病毒滴度差异均无统计学意义(P>0.05),且RNA-PAGE电泳图谱未见差异。结论初步应用试验表明3种重组胰酶均可替代猪源胰酶用于轮状病毒疫苗的制备。

肠道病毒D组68型假病毒的构建

目的制备携带萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒D组68型(enterovirus D68,EV-D68)假病毒。方法分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的EV-D68表达子和携带萤光虫荧光素酶报告基因的EV-D68复制子,共转染HEK-293T细胞后收获EV-D68假病毒;实时逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定EV-D68假病毒;实时荧光定量PCR检测假病毒滴度,荧光强度定量检测假病毒感染活性。结果成功构建EV-D68表达子和复制子;成功制备EV-D68假病毒,RT-PCR和Western blotting结果表明其具有萤火虫荧光素酶报告基因和与活病毒相同的衣壳蛋白,拷贝数为(4~8)×10^6 copies/mL,荧光强度与假病毒感染剂量呈正相关,证明其具有感染活性。结论成功构建了EV-D68假病毒。

新布尼亚病毒的流行病学及临床特征

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)是引起人类的一种病死率较高的新发传染病——发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)的病原体。本文从SFTSV的病原学、流行病学及临床特征等作一综述。

实时逆转录PCR检测G1、G2和G4型轮状病毒方法的建立

目的建立3种用于检测G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因的一步法实时逆转录PCR,用于本实验室G1、G2和G4型轮状病毒的快速检测和定量、定性分析。方法设计G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因特异性引物和探针,采用G1、G2和G4型轮状病毒特异性体外转录RNAs,建立实时逆转录PCR,特异性检测G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因方法。结果 3种实时逆转录PCR标准曲线R^2均大于0.99,扩增效率均在90%～110%之间。不同浓度体外转录RNAs重复性检测结果 CV均<5%,且可以对单拷贝RNAs样本进行检测。结论本检测方法快速、灵敏且重复性好,可以对轮状病毒VP7基因进行特异而有效的检测,为实验室轮状病毒毒株的分型和定量检测提供了特异而有效的检测方法,也为今后多重实时逆转录PCR的建立奠定了试验基础。

口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗病毒滴度参考品的建立及稳定性研究

目的建立轮状病毒疫苗病毒滴度检测参考品,用于口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗滴度测定并对该参考品质量进行研究。方法选取经Ⅲ期临床试验验证具有良好保护效果的同批次轮状病毒原液,制备企业轮状病毒疫苗病毒滴度检测参考品,并对其进行病毒滴度标定。分别采用细胞微量病变滴定法(cell culture infective dose 50%,CCID_(50))结合ELISA(CCID_(50)combined ELISA,本文简称CCIDEA_(50))和基于细胞感染的实时逆转录PCR(cell-based quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction assay,QPA)对该参考品的稳定性进行全面评估。结果CCIDEA_(50)检测结果显示LD、LS和LH单价轮状病毒参考品4℃和25℃分别存放1、3、7 d及冻融1次均具有良好稳定性,37℃分别存放3、7 d对病毒滴度均有影响。-60℃存放72个月仍具有良好的稳定性,试验间CV均≤15.06%。QPA检测结果显示,三价轮状病毒参考品-60℃保存36~84个月期间,LD、LS和LH轮状病毒毒株病毒滴度稳定性良好(P>0.05),试验间CV均≤6.90%。结论建立的轮状病毒疫苗病毒滴度检测参考品稳定性良好,可以用于企业口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗的质量控制。

基于腺病毒载体的呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是导致婴幼儿急性下呼吸道感染的主要病原体之一,也是造成免疫功能低下人群和老年人群下呼吸道疾病的主要原因。由于RSV感染所造成巨大的健康和经济负担,迫切需要研发预防性疫苗。自从RSV发现以来,研究者已采用不同的方法研发RSV疫苗,但至今全世界还未有正式批准RSV疫苗上市。目前,由于腺病毒载体的疫苗(adenovirus-vectored vaccine)具有安全、遗传性稳定、高产出率、容易构建和诱导平衡的免疫应答等特点,而且腺病毒载体研发的RSV疫苗可以通过黏膜免疫,避免了母传抗体的干扰,不会引起疾病的加重等,所以以腺病毒载体研发的RSV疫苗日益受到关注。现对腺病毒、腺病毒载体以及处于临床前和临床试验阶段的RSV腺病毒载体疫苗的研究作一概述。

基于qRT-PCR方法的三价轮状病毒重配疫苗效力试验中平行线模型的建立

目的建立基于定量逆转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法的三价轮状病毒重配疫苗效力试验的平行线模型,通过平行线模型建立试验有效性的验证方法以及疫苗相对效力和效力计算方法。方法系列稀释三价轮状病毒重配疫苗,在Vero细胞中轮状病毒增值到达平台期后,通过qRT-PCR方法检测不同接种剂量下mRNA的反应量(Ct值),以Ct值和剂量的对数建立平行线模型,随后对平行线模型进行方差分析(ANOVA)验证回归有效性以及平行性有效性进而验证试验有效性,有效性验证通过后计算相对效力和效力。结果对试生产中一个批次三价轮状病毒重配疫苗中G2、G3和G4型组分分别建立的平行线模型,G2型数据无异常值,G3型和G4型各检出一个异常值,剔除异常值后重新建立模型,分析平行线模型回归和平行性验证有效。试验有效性验证完成后计算相对效力和效力,各型相对效力分别为:G2:1.2(0.89~1.67),G3:7.1(4.49~11.74)和G4:3.5(2.49~5.07);效力分别为6.0(5.85~6.12)UI/mL,7.0(6.85~7.27)UI/mL和6.7(6.60~6.90)UI/mL。依据各型效力计算该批三价轮状病毒重配疫苗试产品总效力7.3 UI/mL。结论成功建立了三价轮状病毒重配疫苗效力试验的平行线模型,以此确立了三价轮状病毒重配疫苗相对效力和效力的计算方法以及试验有效性验证方法。

两种高危型HPV假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用

目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1+载体中,通过多质粒共转染293FT细胞制备假病毒。对转染试剂、多质粒共转染比例、转染时间和细胞裂解时间进行摸索优化,通过测定假病毒的滴度,确定假病毒制备的最佳条件。收获的假病毒用30%的碘克沙醇作为介质进行超速离心纯化,纯化后的假病毒用于电镜观察。利用假病毒中和试验对制备的原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清以及HPV16和HPV18病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)免疫血清进行中和活性评价。结果 成功构建了假病毒,并确定了假病毒制备的最佳条件:pL1∶pL2∶pEGFP等3种质粒共转染比例为1∶0.1∶0.5,总量为4μg;转染时间为72 h,细胞裂解时间为24 h时获得的假病毒滴度最高。透射电镜观察结果显示,HPV16和HPV18假病毒颗粒基本呈规则圆形,形态上与天然病毒颗粒相似。中和试验结果显示,当用原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清中和HPV16假病毒时,并不能抑制假病毒的感染活性;但HPV16和18 VLP免疫血清能明显的抑制HPV16和HPV18假病毒的感染活性。结论 成功构建并制备了2种高危型HPV假病毒,并可用于中和试验评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。

基于融合前F蛋白呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿和老年人下呼吸道感染(lower respiratory tract infection,LRTI)的主要原因,尚无可用于预防的疫苗。目前,WHO已将研发RSV疫苗确定为其疫苗研发和生物标准化倡议的优先事项之一。RSV融合蛋白(fusion protein,F)是病毒表面的主要保护性抗原,主要介导病毒包膜和靶细胞膜的融合。在感染过程中,F蛋白从亚稳态的融合前F蛋白(prefusion fusion protein,PreF)转变为稳定的融合后F蛋白(postfusion fusion protein,PostF)。近年来,研究发现PreF在体内诱导产生RSV中和抗体能力更强,适合作为免疫原用于RSV疫苗的研发。现就RSV PreF的结构、稳定策略及其作为疫苗候选抗原的应用作一概述。

人呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是导致婴幼儿和老年人下呼吸道感染的主要病原体,给世界各国公共卫生安全造成了极大的威胁,迄今尚无批准上市的HRSV疫苗。福尔马林灭活HRSV疫苗(formalin-inactivated HRSV vaccine,FI-HRSV)临床试验的失败表明HRSV疫苗研发存在多重难以克服的技术困难,此后该疫苗的研发进展极其缓慢。近年来,HRSV蛋白结构的深入解析为HRSV疫苗研发提供了新靶点,使HRSV疫苗的研发策略迅速增多,许多HRSV疫苗相继进入关键性研究阶段。目前,全球有19种HRSV疫苗正在开展临床试验,还有许多不同类型的候选疫苗也正在进行临床前的测试。现从减毒活疫苗、载体疫苗、亚单位疫苗和颗粒疫苗4个方面对HRSV疫苗的研发情况作一概述。

人3型副流感病毒F蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中表达的研究

目的用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac■baculovirus expression systems, Bac-to-Bac BES)表达人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3, HPIV-3)的重组融合蛋白(fusion protein, F),并研究密码子优化、疏水性区域、SUMOStar融合标签及gp67分泌信号肽对目的蛋白表达的影响,同时研究F蛋白的抗原性与免疫原性。方法全基因合成HPIV-3 F蛋白昆虫细胞密码子优化基因序列,设计特异性引物,经PCR扩增获得HPIV-3全长优化型F基因(op-F)、去除N端和C端疏水区域的截短优化型F基因(opt-F)和截短野生型F基因(wtt-F);将以上基因分别构建至pFastBac1、pI-SUMOStar、pI-secSUMOStar 3种载体,采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对各目的基因对应的蛋白进行表达。利用SDS-PAGE、Western blot等方法对各目的蛋白的表达及特异性进行检测。用纯化的重组opt-F蛋白免疫青紫蓝兔,制备F蛋白特异性抗体。结果 ①对HPIV-3的opt-F基因及wtt-F基因的表达对比显示,opt-F基因在3种载体中都得到了良好表达,而wtt-F基因在3种载体中均未表达,说明密码子优化对目的基因的表达具有重要作用;②对HPIV-3的op-F基因及opt-F基因在pFastBac1载体中的表达对比显示,opt-F基因得到了良好表达,而op-F基因未表达,说明疏水性区域可显著影响目的基因的表达;③对HPIV-3的opt-F基因在pFastBac1及pI-SUMOStar载体中的表达对比显示,SUMOStar融合标签可使opt-F基因的表达量明显提高;④对HPIV-3的opt-F基因在pI-SUMOStar及pI-secSUMOStar载体中的表达研究显示,添加gp67分泌信号肽后未检测到opt-F基因的可溶性表达,说明gp67信号肽对目的蛋白无促可溶性表达效果。⑤纯化的opt-F/pI-SUMOStar蛋白免疫青紫蓝兔,得到了滴度为1∶8 192的抗血清。Western blot显示,此血清可以特异性结合HPIV-3病毒的F蛋白。结论密码子优化、N/C端疏水区域的去除以及SUMOStar融合标签的嵌合,可以显著提高F蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达。

G9P[8]型轮状病毒HN-28灭活病毒在小鼠中的免疫原性和保护效力评价

目的 将G9P[8]型轮状病毒HN-28灭活后与弗氏佐剂配伍免疫小鼠,评价其免疫原性和保护效力。方法 将冻融1次的HN-28病毒收获液离心去除细胞碎片,上清用50%蔗糖垫底进行超速离心,用MEM培养液重悬沉淀得到纯化的病毒,通过SDS-PAGE和Western blot分析纯化后的病毒;然后用甲醛灭活病毒,将灭活病毒在MA-104细胞上连续盲传代3次,通过观察细胞病变(cytopathic effect, CPE)和半数细胞感染病变法(CCID_(50))进行病毒灭活验证检测;将灭活病毒与弗氏佐剂按1∶1比例混合,免疫BALB/c小鼠,对照组用MEM与弗氏佐剂按1∶1比例混合后按相同方法和剂量免疫BALB/c小鼠。定期采血并用ELISA检测小鼠血清中抗轮状病毒IgG和IgA滴度;3剂免疫后用病毒微量中和试验测定每剂免疫后血清中和抗体并计算几何平均滴度(geometric average titer, GMT);3剂免疫后28 d,用HN-28活病毒灌胃攻毒,评价血清抗体对小鼠的保护效力。结果 SDS-PAGE和Western blot分析结果显示,纯化后的病毒纯度较高,在预期分子量处出现了对应的条带;HN-28灭活病毒在MA-104细胞连续传3代,显微镜下均未观察到CPE,CCID_(50)检测结果为阴性;免疫小鼠血清检测结果显示,HN-28灭活病毒在小鼠体内诱导产生的IgG抗体平均滴度为4.53 lg、IgA抗体平均滴度为2.54 lg、中和抗体平均滴度为2.86 lg,而对照组和免疫前血清中IgG、IgA均为阴性;与实验组小鼠相比,攻毒后1周,对照组小鼠体温明显升高,腹泻率增加,对照组小鼠粪便中轮状病毒的检出率高于实验组。结论 HN-28灭活病毒在BALB/c小鼠中具有良好的免疫原性和保护性。

体外转录mRNA系统的建立及其在呼吸道合胞病毒疫苗中的应用

目的建立mRNA的体外转录系统,并用于评价呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)mRNA疫苗的免疫效果。方法以增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为模式蛋白,将EGFP基因分别克隆入pcDNA3.1(+)和pmRV载体中,通过体外转录合成EGFP mRNA,以验证载体及mRNA框架结构的正确性;然后将RSV融合前F蛋白(RSV preF)序列构建于经验证的载体,体外转录合成RSV preF mRNA;转染细胞后,通过荧光显微镜、流式细胞术、免疫荧光和Western blot等方法验证蛋白表达;进一步通过微流控技术用脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)包封体外转录合成的mRNA,经过粒径和多分散性指数检测后进行小鼠免疫和评价。结果经过验证发现,pcDNA3.1(+)的框架结构更适合mRNA;EGFP mRNA转染HEK 293T细胞24 h后,体外转染效率>90%;免疫荧光和Western blot等方法验证RSV mRNA能够在24 h内表达preF;包封后的RSV mRNA疫苗免疫小鼠,血清抗体滴度与RSV preF蛋白免疫抗体滴度相近(P>0.05),细胞因子IFN-γ和IL-4均有一定程度的上调。结论建立了正确表达目的蛋白的mRNA体外转录系统,以此为基础的RSV mRNA疫苗在小鼠体内可诱导强的免疫应答,为潜在的RSV mRNA候选疫苗奠定了基础。