生物制药注射用水工艺的质量控制趋势分析

目的分析2014—2015年度制药注射用水系统4个重要质量指标的趋势,为制水系统日常运行及生产过程中的质量控制提供依据。方法对注射用水p H、电导率、总有机碳（Total organic carbon,TOC）、微生物限度4项质量指标进行趋势分析。结果 104周注射用水的质量检测结果显示p H均在5.0~7.0之间,25℃电导率均≤1.3μS/cm,TOC远低于药典标准0.50 mg/L,微生物限度检查未检出细菌、霉菌和酵母菌,各项指标均符合《中华人民共和国药典》2010版（二部）标准,且连续2年趋势稳定。结论制水系统运行正常,可以持续有效地生产出符合制药工艺要求的注射用水,为生物制药提供了安全保证。

疫苗的稳定性研究进展

疫苗的稳定性始终贯穿在产品的研发阶段以及疫苗上市、疫苗运输和上市后继续追踪其免疫效果的全过程。疫苗稳定性试验所得数据是评价该疫苗质量和免疫效果的重要依据,更是制定产品储存条件、有效期等重要参数的主要依据。现就疫苗的稳定性相关法规、研究方案、有效期制定、联合疫苗稳定性研究及成品中有效成分的累计时间等方面作一综述。

生物制品批签发管理现状与展望

生物制品批签发是国家药品管理机构或其授权单位根据批生产检定记录的审核和试验检测的结果,对即将上市销售的生物制品进行批放行的制度,是生物制品大规模使用前最重要的一项技术保障[1]。1批签发管理制度的建立1992年,WHO推荐疫苗生产国实施批签发制度,1998年进一步将其作为生物制品管理的6项关键职能之一。我国于2001年开始试行批签发制度[2],

轮状病毒疫苗温度挑战性研究

目的探究口服轮状病毒活疫苗在高温保存和冻融后的病毒滴度变化趋势.方法选取2022年生产的3批口服轮状病毒活疫苗,于37℃放置0、7、9、11和14 d或-20℃-室温冻融0、1、2、3、4、5次,进行病毒滴度检测;选取2022年生产的5批口服轮状病毒活疫苗原液,于37℃放置0、3、5、7、9和11d或-20℃-室温冻融0、1、2、3、4、5次,进行病毒滴度检测.结果口服轮状病毒活疫苗于37℃保存9 d时病毒滴度大于5.5 lgCCID50/ml;口服轮状病毒活疫苗原液于37℃保存9 d时病毒滴度不低于5.5 lgCCID50/ml;口服轮状病毒活疫苗5次冻融,病毒滴度不低于5.8 lgCCID50/ml;口服轮状病毒活疫苗原液5次冻融,病毒滴度不低于6.0 lgCCID50/ml;均符合质量标准.第1次冻融后口服轮状病毒活疫苗滴度明显降低,但不大于1 lg,后续4次反复冻融对滴度未产生明显影响.结论口服轮状病毒活疫苗在37℃可保存9 d,5次冻融后滴度仍符合质量标准.

高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查

目的探索高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查的可行性。方法采用高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装密封性进行检查,并观察此方法对疫苗有效成分的影响。结果口服轮状病毒活疫苗经18 000 V和14 000 V高压静电检测显示,导电电流值均极低;病毒滴度结果均在6.0~6.5 lg CCID_(50)/mL之间,热稳定性试验病毒滴度下降值在0.5~1.0 lg之间,均符合质量标准,且与对照组(A组和B组)检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论高压静电检漏法用于口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查是可行的。

洁净区消毒剂杀菌性能验证

目的验证5种消毒剂的杀菌性能及消毒效果,为环境微生物控制的策略及实施提供依据。方法采用中和剂鉴定试验测定相应中和剂的中和效果,然后通过悬液定量杀灭试验测定消毒剂的杀菌效果和作用时间;最后通过载体定量杀灭试验测定消毒剂在最短有效作用时间下对不同载体表面微生物的杀灭效果。结果试验选取的中和剂对测试的消毒剂有良好的中和作用,中和剂及中和产物对测试微生物的生长无显著影响,可用于悬液定量杀灭试验及载体定量杀灭试验。悬液定量杀灭试验中,5种消毒剂对测试微生物均具有较高的杀灭作用,对细菌的杀灭对数值在4.26～6.44之间,对真菌的杀灭对数值在3.51～5.35之间,芽孢杆菌的杀灭对数值为4.21。载体定量杀灭试验中,消毒剂对细菌的杀灭对数值在4.25～5.65之间,对真菌的杀灭对数值在3.31～4.72之间,芽孢杆菌的杀灭对数值为3.61。结论 5种消毒剂对测试微生物的杀灭效果均符合标准规定,可用于洁净区的表面消毒灭菌。

高效毛细管电泳检测脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜残余量

目的采用毛细管区带电泳法(capillary zone electrophoresis,CZE)测定脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的含量。方法以25 mmol/L四硼酸钠(p H 8.0)为背景电解质,以20 cm×50μm I.D.未涂层的毛细管为色谱分离柱,于200 nm波长检测脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜的残余量。结果DMSO在不同溶液中质量浓度为1~100 mg/L的线性范围内线性关系良好,R2≥0.998 9。加标回收率为98.07%~103.13%,变异系数为0.38%~2.57%。结论该方法简单、快速、经济、环保,不受混合物组分中其他物质的干扰,适用于快速检测结合疫苗中DMSO的残余量。

A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性及免疫原性分析

目的:探讨并分析婴幼儿接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性及免疫原性。方法:选取115名接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的婴幼儿作为研究对象,观察其接种疫苗后的表现,根据其出现全身或局部不良反应的情况评价该疫苗的安全性。在接种疫苗前及接种疫苗后30 d,检测并评价婴幼儿的免疫原性。结果:接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗前,这115名婴幼儿A群流脑抗体的阳性率和C群流脑抗体的阳性率分别为2.61%和6.09%,几何平均滴度(GMT)分别为4.30和4.38。接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗后30 d,这115名婴幼儿A群流脑抗体的阳性率和C群流脑抗体的阳性率分别为95.65%和97.39%,GMT分别为162.27和157.39。这115名婴幼儿接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗后出现的不良反应有发热、腹泻、皮肤斑丘疹、皮肤瘙痒、皮肤水泡疹等,其上述不良反应多较为轻微。结论:为婴幼儿接种A群C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的安全性及免疫原性。

IOOSR评价实验室稳定性的应用

在药品质量管理中,为保证产品质量和提高实验室检测数据可靠性,提出了一种IOOSR计算和应用方法,可以有效地评价和提高实验室稳定性。基于兰州某医药公司质量控制实验室2018~2020年的OOS报告数据,对OOS有效性进行甄别,计算得出3年的IOOSR分别为21.05%、56.52%和56.00%。经对IOOS原因进行分类分析,发现造成2019年和2020年IOOSR显著提高的主要原因是检测设备IOOS报告数大幅度增加和检测用耗材IOOS报告数小幅度上涨,还有部分原因是2019年和2020年增加了异常情况IOOS。通过计算和应用IOOSR,可以分析得出2019年和2020年的实验室处于不稳定状态,主要是由于设备和耗材变化引起的,应加强管控。该应用研究表明,IOOSR可有效评价实验室稳定性,并为实验室持续改进提供明确的方向和依据。

生产场地变更前后灭菌注射用水质量可比性分析

目的通过可比性分析确保灭菌注射用水生产场地变更前后质量的一致性。方法应用风险评估的方法对灭菌注射用水生产场地变更前后的材料、厂房设施、人员、生产工艺进行可比性分析,并对产品质量参数及稳定性试验的结果进行统计学分析。结果确认灭菌注射用水生产场地变更前后的材料及人员均一致,且确认厂房设施及生产工艺发生了变更,需经变更后连续3批上市规模的灭菌注射用水进行验证。生产场地变更后连续生产的3批产品与变更前连续2年生产的灭菌注射用水的关键质量指标p H、电导率、不挥发物的检定结果差异无统计学意义（P〉0.05）;3批灭菌注射用水加速稳定性试验6个月内p H为5.0-7.0,电导率≤25μS/cm（25℃）,不挥发物≤1 mg。结论灭菌注射用水生产场地变更前后质量一致,均符合《中国药典》二部（2010版）的标准。

2019年国产口服轮状病毒活疫苗质量控制中病毒滴度趋势分析

目的对口服轮状病毒活疫苗(oral rotavirus vaccine, ORV)质量控制中的病毒滴度进行趋势分析。方法利用CCID50+ELISA检测国内企业2019年生产的ORV的关键控制指标(病毒滴度),根据检测结果计算均值,建立警戒限(均值■和行动限(均值■,绘制趋势分析图,进行连续性和周期性趋势分析;并将中国食品药品检定研究院(National Institutes for Food and Drug Control, NIFDC)病毒滴度结果与企业病毒滴度结果进行比较。结果病毒滴度趋势分析显示NIFDC检测结果未见超趋势(out of trend, OOT),企业检测结果有1次连续10批以上结果高于平均值,经偏差调查证实生产、质控和检测环节均未发现异常情况,分析原因可能是其中有多批成品来自同一批原液。2019年度和2018年度比较结果显示年度间具有较好的一致性。NIFDC与企业病毒滴度结果显示均检测结果差异没有统计学意义(P=0.082 7,P>0.05);Bland-Altman法统计显示97%批次的检测结果的差值位于2倍标准差(2s)以内。结论对2019年国产ORV病毒滴度的趋势分析反映出该制品的批间一致性以及生产工艺的稳定性良好。

制定疫苗生产过程中各类质量属性控制限的统计学方法分析

目的探讨制定疫苗生产过程中各类质量属性控制限的统计学分析方法。方法采用个体分布识别、正态概率检验及阈值法等统计分析方法,以2019年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量(A群多糖磷含量、C群多糖N-乙酰神经氨酸含量)及水分指标为例,应用Minitab数据分析软件对疫苗生产过程中制定各类质量属性控制限的统计学方法进行分析。结果对服从正态分布的质量属性,采用μ±2σ或μ±3σ制定其控制限;对不服从正态分布的质量属性,通过分布拟合的情况计算其概率函数,再根据其分布规律制定相应的警戒限或行动限,包括Johnson变换和Box-Cox变换;对于不能拟合任何分布的质量属性,利用阈值法或公差限制的方法制定其控制限度。结论采用科学规范的统计学分析方法制定疫苗生产过程中各类质量属性的控制限对持续生产符合预定质量标准的产品具有一定的指导意义。

2013～2016年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗质量的一致性分析

目的分析2013~2016年本公司生产的A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗关键质量属性的变化趋势,评价产品质量的一致性。方法根据《中国药典》三部(2010及2015版)规定的方法对2013~2016年本公司生产的520批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的多糖含量(A群磷含量、C群多糖N-乙酰神经氨酸含量)、水分及多糖分子大小等关键质量指标进行检测,应用Minitab数据分析软件对产品关键质量指标的检测结果进行I-MR控制图趋势比较分析、方差分析及工艺能力指数分析。结果 2013~2016年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的A群磷含量、C群多糖N-乙酰神经氨酸含量、水分及多糖分子大小的检测结果均在国家标准范围内,整体处于稳定状态。结论 A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产工艺稳定,产品质量一致性良好。

两种恒温状态下疫苗温度指示标签对Hib结合疫苗的有效性研究

目的研究25℃与37℃恒温状态下疫苗温度指示标签(vaccine vial monitor,VVM)失效时间与b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗有效性指标之间的关系,判断VVM对疫苗温度暴露情况的指示作用是否可靠。方法将检定合格的3批贴有VVM标签的Hib结合疫苗分别放置于25℃与37℃温度中,25℃放置的样品于0、10、20、30、40、50、60 d取样,37℃放置的样品于3、7、9 d取样,检测VVM反应区与参照区吸光度差值和Hib结合疫苗各有效性质量指标之间的关系。当测量VVM上至少2个点的AR-I≤0.00时,肉眼观察反应区颜色与参照区颜色相同或更深,提示VVM失效。绘制VVM吸光度差值结果与疫苗有效性变化统计表和曲线图,研究VVM与疫苗失效时间的先后顺序,了解VVM是否存在先于疫苗失效的情况。结果25℃时,VVM开始失效的时间范围为45~50 d;37℃下,VVM开始失效的时间范围为6~7 d。疫苗在25℃放置60 d和37℃放置7 d,各有效性指标均符合标准规定。观察期内未发现疫苗失效情况,疫苗稳定性较好。结论2种温度下VVM均于疫苗失效前到达终点。证明VVM应用于Hib结合疫苗的匹配性良好,可反映该疫苗的热暴露情况,为疫苗接种前的有效性确认提供可靠帮助。

2015—2020年口服轮状病毒活疫苗的趋势分析和质量评价

目的统计分析我国2015—2020年口服轮状病毒活疫苗质量属性检测数据,评价其质量可控性和工艺稳定性。方法根据口服轮状病毒活疫苗注册标准和中国药典(2010、2015、2020年版)规定的方法对634批口服轮状病毒活疫苗的病毒滴度、热稳定性、抗生素残留量、渗透压以及pH进行检测,应用Minitab和GraphPad数据软件对检测结果进行单值移动极差控制图分析、方差分析和箱线图分析。结果2015—2020年634批口服轮状病毒活疫苗的病毒滴度均在每毫升5.5~7.0 lg半数细胞培养物感染量(50%cell culture infectious does,CCID_(50)),热稳定性试验病毒滴度均不低于5.5 lgCCID_(50)/ml、滴度下降不大于1.0 lg CCID_(50)/ml、抗生素残留量、渗透压以及pH均在国家标准范围及企业内控标准范围内。结论2015—2020年的口服轮状病毒活疫苗产品有较好的质量可控性,生产工艺稳定。

口服轮状病毒活疫苗病毒滴度评价国家参考品的制备

目的 制备口服轮状病毒（rotavirus,RV）活疫苗病毒滴度评价的国家参考品.方法 选取检定合格的口服RV活疫苗原液,加入保护剂,1.0 ml/安瓿分装,冷冻干燥,制备病毒滴度参考品.用微量细胞病变法检测参考品的病毒滴度,用Karber法计算半数细胞培养感染量（50％ cell culture infective dose,CCID50）.由3家实验室对参考品的病毒滴度进行协同标定,采用单因素方差分析和最小显著差数法对3家实验室的标定结果进行统计学分析.另外,将参考品于-20℃放置1年、4℃放置1年、37℃放置14d、-60℃放置2年,测定病毒滴度,分析参考品的热稳定性和长期稳定性.结果 经单因素方差分析比较,3家实验室检测结果的差异无统计学意义（F=0.379,P=0.686）.采用最小显著差数法对3家实验室检测结果的均值进行两两比较,差异亦无统计学意义（s（x）值均为0.078 2,P值均＞0.05）.参考品的平均病毒滴度为6.5 lgCCID50/ml,于不同温度放置一段时间后病毒滴度下降均未超过1.0 lgCCID50/ml.长期稳定性试验结果的变异系数为4.9％.结论 制备了可用于口服RV活疫苗病毒滴度检测的国家参考品.

支原体检测PCR法与药典方法的对比分析

目的研究PCR技术在疫苗生产过程支原体检测中应用的可行性。方法选择GP03和MGSO作为引物,与《中国药典》三部(2015)规定的3种支原体阳性株(肺炎支原体、口腔支原体和猪鼻支原体)进行16s r RNA序列比对分析和特异性扩增检测,确定引物适用性。以支原体阳性株为PCR模板,进行浓度梯度试验和不同代次扩增,确认PCR法的检测限和精密度。以口服轮状病毒活疫苗生产过程中20个细胞培养物为样品,分别采用PCR法、液体培养法和固体培养法检测,对比三种方法的检测结果。结果GP03和MGSO适用于支原体检测。PCR法与液体培养法、固体培养法检测结果一致,同时具备操作简单和检出结果快速的特点。结论PCR技术可作为疫苗生产过程中检测支原体的一种手段。

组正交超饱和设计在发酵罐手工清洗方法开发中的应用

目的开发一种适用于发酵罐手工清洗方法。方法采用组正交超饱和设计方法(15个因素2个水平),试验因素包括9个实际影响发酵罐清洗因素和6个假因素;评价指标为发酵罐清洗后淋洗水电导率与总有机碳(total organic carbon,TOC)含量;通过标准最小二乘法拟合试验结果获得较优清洗条件,从而建立发酵罐手工清洗方法,进而通过试验验证发酵罐淋洗水电导率和TOC含量的实际值是否与预测值具有等效性。结果获得发酵罐手工清洗条件如下:预清洗次数1次,预清洗温度25℃;枸橼酸洗涤浓度5 g/L,枸橼酸洗涤次数1次,枸橼酸清洗温度25℃,酸洗涤剂去除清洗次数1次;氢氧化钠洗涤浓度5 g/L,氢氧化钠洗涤次数3次,碱洗涤剂去除清洗次数5次。验证试验淋洗水电导率和TOC含量检测结果均高于预测值,数据中位数均低于《中华人民共和国药典》2020版(四部)注射用水标准。结论此手工清洗方法对于发酵罐的清洗结果有效,且淋洗水检测结果理想。

新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)无菌分装工艺验证

目的评价新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)无菌分装工艺过程,确保疫苗安全性。方法根据质量风险管理原则,运用失效模式和影响分析的风险管理工具评估影响新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)分装过程无菌性的潜在风险。用胰酪大豆胨液体培养基为介质,模拟新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)半成品的无菌分装工艺过程,从最差条件的选择、模拟干预动作的设计、模拟分装试验品培养、促生长试验、完整性试验5个方面设计基于风险评估的试验方案,进行连续3次成功的培养基模拟灌装试验。结果连续3次试验培养基污染瓶数为0;各项检测结果均符合可接受标准。结论新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)分装工艺满足法规对产品无菌性的要求,无菌风险可控。

口服轮状病毒活疫苗稳定性评价

目的评价兰州生物制品研究所有限责任公司(兰州公司)口服轮状病毒活疫苗的稳定性。方法选取兰州公司2014年生产的3批口服轮状病毒活疫苗,置于37℃条件下进行热稳定性试验,在0和7 d取样进行病毒滴度检查;置于25℃条件下进行加速稳定性试验,在0、1、2、3个月进行全部检定项目检查;置于2~8℃条件下进行长期稳定性试验,在0、3、6、9、12、15、18个月进行全部检定项目检查。结果口服轮状病毒活疫苗于37℃条件保存7 d,热稳定性试验符合质量标准(病毒滴度≥每毫升5.5 lg半数细胞培养物感染量,病毒滴度下降≤1.0 lg)。在25℃条件下保存3个月,全部检定项目均符合质量标准。在2~8℃条件下保存18个月,全部检定项目均符合质量标准。结论兰州公司生产的口服轮状病毒活疫苗质量稳定。