改良Blue Native PAGE方法的建立及对注射用A型肉毒毒素活性药用成分天然结构的分析

建立具有较高分辨率的温和的Blue native PAGE方法,用于分析国产注射用A型肉毒毒素(商品名为衡力■)复合物活性药用成分(Pharmaceutical active ingredient,API)天然结构。通过改进样品处理方法解决蛋白样品分解的问题。由7种电极缓冲液构成8个组合,从中筛选出最优组合并改进染色方法,电泳结果的分辨率明显提高。以基于改良Blue native PAGE进行二维SDS-PAGE,以基于二维电泳的Western blotting对各组分定性分析,以改良对Blue Native PAGE对A型肉毒毒素API天然结构相对分子质量进行测定。改良Blue Native PAGE方法能够分析注射用A型肉毒毒素API天然结构,明确了注射用A型肉毒毒素API天然结构的存在形态及组成,注射用A型肉毒毒素API相对分子质量为(918±18. 38) k。