单克隆抗体技术在兽医细菌学诊断中的应用

1975年k(?)hler 和 Milstein 创立淋巴细胞杂交瘤技术以来,单克隆抗体(McAb)已在生物学和医学领域显示了极其广阔的应用前景。目前 McAb的应用主要集中在动物疾病的诊断、治疗、预防、理论性研究以及纯化和鉴定抗原等方面,临床应用尚有一定困难。近年 McAb 技术在兽医细菌学诊断方面取得了很大进展,有些 McAb 诊断试剂已应用于临床,并获得了重大经济效益。一、在产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)诊断中的应用ETEC 是引起幼畜和婴儿腹泻的主要病原体。ETEC 的致病性取决于它们在宿主小肠上皮细胞上定居的能力和产生肠毒素的能力,两者缺一不可。ETEC 产生的肠毒素有两种:耐热性肠毒素(ST)和不耐热性肠毒素(LT);其中 ST 又分为 STa 和STb 两种。ETEC

McAb—ELISA在四种兽医相关细菌诊断中的应用

本文综述了McAb-ELISA在产毒素性大肠杆菌(ETEC)、布氏杆菌、空肠弯曲菌和鸡白痢沙门氏菌诊断中的应用情况。McAb-ELISA对ETEC的耐热性肠毒素STa和粘着素K99、K88、F41、987P的检测敏感性高、特异性强,时间可缩至1h。在布氏杆菌诊断中,可区分出野毒株和菌苗株,并可用抗耶尔森氏菌0∶9型菌株的McAb鉴别布氏杆菌和耶尔森氏菌。对空肠弯曲菌和鸡白痢沙门氏菌的检测也获得了满意结果。由于McAb-ELISA具有简便、快速、敏感和特异等优点,因此,其在兽医细菌学的诊断及其鉴别别诊断和流行病学监测中必将发挥更大的作用。

应用生物素标记的重组质粒作为探针的杂交条件及敏感性研究

貂肠炎细小病毒复制中间型 DNA(MEV-RF-DNA)的 HindⅢ-C 片段被克隆到 pBR322中形成重组质粒pBM。用光生物素(photo biotin)标记 pBM 和 HindⅣ酶切片段的 pBM 作为探针分别与貂,太细小病毒感染的细胞培养物人工感染细小病毒的貂和犬粪便进行斑点杂交试验,结果发现两种探针检测的敏感性相差10倍以上.光生物素标记的完整重组质粒探针具有放大作用,酶切后的 pBM 敏感性不如前者.另外,本实验还证明在用生物素标记的探针杂交时,被检样品用热变性处理比碱变性处理效果更佳,而且简便。

狂犬病毒微量滴定法的实验研究

由于狂犬病毒在普通细胞培养过程中无明显细胞病变,因此,对其毒力的滴定较为困难。本研究通过间接的手段建立的狂犬病毒微量滴定法,解决了狂犬病毒毒力的滴定,此法与经典的小鼠脑内接种法比较、特异、敏感、经济、持续周期短,重复性好,并且与半微量蚀斑法具有一定相关性。(一)材料与方法1.病毒株:鹿8202狂犬病毒株由侯世宽等人分离,见《兽医大学学报》1986年6(4):341～346;SAD狂犬病毒株由国外引进。

抗独特型抗体及其在寄生虫方面的研究进展

现代免疫学的飞速发展,使人们对疾病的认识不断受到启发,有些已付诸实践。如根据澳大利亚诺贝尔奖获得者Bunnet 关于动物体对侵入抗原所产生的抗体具有克隆选择性学说,由Kohler 和Milstein 在1979年创建的单克隆抗体(McAb)及其技术,不仅从理论上对抗体应答的持异性、免疫记忆、免疫耐受等现象作了较为满意的解释。

关于伊氏锥虫低温保存的研究

低温冰箱保存虫种可以代替传统的动物接种方法。以甘油作防冻剂,1640小牛血清作营养液,-80℃低温冰箱冷冻保存伊氏锥虫至一年,仍保持原有的浓度及毒力,接种小白鼠后第3天出虫,第6天死亡。

纤维素酶作为饲料添加剂的国内外研究进展

自1906年 Seilliere 在蜗牛的消化液中发现能分解天然纤维素的纤维素酶后,纤维素酶的研究和应用越来越受到世界各国的普遍关注.这主要是由于:纤维素酶是由内切β-葡聚糖酶(Cx)、外切β-葡聚糖酶(C_1)和β-葡萄糖苷酶三部分组成,三者协同作用可以把世界上产量最高、被人类所废弃的高纤维素类物质分解为易被动物所消化和吸收的低分子化合物和葡萄糖等.另外,纤维素酶在分解纤维素的同时,使细胞壁结构受到破坏,使细胞壁内容物溶解出来,提高了这些物质的利用率,从而全面地提高动物的生产性能.目前。

马(骡)体内伊氏锥虫循环抗原与抗体的相互关系研究

本文利用抗伊氏锥虫表膜抗原的单克隆抗体ELISA双抗体夹心法,对健康、人工接虫及先用伊氏锥虫弱毒株免疫后用强毒株攻击马(骡)血清的循环抗原(CAg)进行了追踪检测,同时用常规ELISA法检测了相应的循环抗体(CAb),结果为:CAg与CAb不全呈平行关系;部分免疫马(骡)首次攻虫前CAg即可呈现阳性,CAb为阴性;免疫马(骡)攻虫后大多经1～3个CAg高峰而后健活,CAg逐渐转阴,CAb则上升较慢,上升后则一直维持在较高水平:人工接虫马(骡)接虫后经1～2个CAg高峰而死,濒死前4/5动物CAg呈现阳性,而CAb在濒死前只有1/5呈现阳性;人工接虫马(骡)的CAg水平高于免疫马(骡),二次攻虫后的CAg水平高于首次。

抗破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应的研究

采用破伤风类毒素（ＴＴ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇（ＰＥＧ）ＷＭ４０００作用下进行配合，克隆化，通过ＥＬＩＳＡ法及毒素中和新价的检测获得两株（５Ｇ８，６Ｄ９）及多株亚株（５Ｇ８Ａ１０，５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１，５Ｇ８Ｂ９Ｅ１等）有保护作用的细胞株，其中一株经过液氯冻存，复苏仍能正常分泌抗体。

驽巴贝西虫补反抗原的制造及应用研究

驽巴贝西虫病在我国每年均有不同程度的发生和流行,有的马场发病率可高达30%,死亡率10%左右,危害较大。本病的诊断,目前国内、外主要沿用临床症状观察、流行病学分析及虫体镜检等方法综合判定。

CDV疫苗毒在Vero细胞内包涵体形成规律的研究

采用Vero细胞生产CDV(犬瘟热)弱毒疫苗是目前国内外生产CDV疫苗的主要方法。若提高CDV疫苗的效价,必须掌握细胞株的选择、培养方法、收毒时间、疫苗的保存及疫苗的使用时机。为了把好疫苗的培养及收毒时间关,我们进行了CDV疫苗毒在Vero细胞内生长规律的试验。CDV病毒可在细胞内产生包涵体,用G和HE染色后在普通显微镜下即可进行检查。本试验结果表明,CDV疫苗毒在Vero细胞中生长。

肉用仔鸡核黄素需要量的研究

1日龄超级星布罗商品代肉用仔鸡140只分成七组,日粮核黄素水平为0.4、2.4、4.4、6.4、8.4、10.4及12.0mg/kg,饲养至28日和56日龄。测定生长速度、采食量、饲料耗用比、BGRAC、肝脏总黄素浓度及肝脏总黄素的绝对量。在六个测定的指标评定中均以6.4mg/kg为最佳。因此,肉用仔鸡核黄素的适宜需要量可为6.4mg/kg。BGRAC是评价肉鸡核黄素营养状况灵敏而准确的指标,当日粮核黄素低于6.4mg/kg时,BGRAC值与日粮核黄素呈显著负相关(|r|>0.94)。肝脏总黄素浓度及肝脏总黄素的绝对量随日粮核黄素的增加而增加,当日粮核黄素为6.4mg/kg时达最高值。 根据饲料耗用比及肝脏总黄素含量等,评定各组肉仔鸡的核黄素营养状况等级。综合28日及56日龄各组肉仔鸡的BGRAC值,可以将核黄素营养状况的评价标准定为:≤1.05,充裕;1.06～1.20,不足;1.21～1.45,缺乏;>1.45,严重缺乏。

人尿胰蛋白酶抑制剂工艺研究

报道了人尿胰蛋白酶抑制剂的提取新工艺。新鲜男性尿碱化除去沉淀,调 pH 4.0,用 PolyerdeⅣ搅拌吸附,吸附剂经抽滤、洗涤、NH_4HCO_3洗脱。冼脱液经硫酸铵沉淀、透析、冻干得产品。活性回收率为60～68%,比活为515～660 u/mg。

犬用细小病毒自然弱毒株的分离、鉴定和免疫研究

应用猫肾传代细胞F81系,以同步接毒和带毒传代的方法。先后从50份犬、15份狐、75份貉和8份狮、虎、豹病料中分碍15株犬细小病毒(cpv)、3株貉细小病毒和6株猫泛白细胞减少症病毒,未分到狐细小病毒。通过人工感染试验,从中挑选到1株对犬和本动物无致病性、但具有良好免疫原性的细小病毒——貉细小病毒CR86106株。经核酸型、形态学、理化学、生物学特性试验以及与CPV核酸酶切图比较试验等系统鉴定,CR86106株病毒为1株与CPV特性基本相同,但也存在有一定差别的小DNA病毒。免疫试验和田间试验证明,CR86106株病毒遗传性稳定;对母源抗体干扰具有较强的抵抗力;免疫接种犬虽可随粪便排出少量原接种病毒,但不会使同居犬感染发病;试验犬经两次疫苗接种后攻毒,可获得完全保护,且不会随粪便排出强毒。累计免疫军、警犬3320只,全部安全,保护率达99.28％。

人尿促性腺激素生产新工艺研究

报道由绝经期妇女尿中提取、纯化人尿促性腺激素(HMG)的新工艺。尿液经乙酸酸化,Polyer-de-2吸附,10%乙酸铵-40%乙醇冼脱,乙醇沉淀,再经碱性离子交换层析纯化,所得初步纯化产物不含热原,FSH 活性为20 IU/mg,活性回收率为64～69%。

准备配种期公貂蛋白质需要量的研究

选用成年公貂44只,体重1.736±0.136公斤,随机分成5组,分别喂以蛋白质水平为34.2％、30.2％、25.2％、19.8％及11.4％的日粮,以探讨准备配种期公貂对蛋白质的需要量及氮沉积量与氮食入量的回归关系。试验结果表明,准备配种期公貂对蛋白质的维持需要量为7.5克/公斤,日粮蛋白质水平为17.4％;适宜需要量为11.0克/公斤,日粮蛋白质水平为25.2％;适宜蛋能比及动植物蛋白比为15.6及3.2。氮沉积景与氮食入量极其相关(P<0.01),相关系数为0.82。

人尿胰蛋白酶抑制剂与激肽释放酶联产及纯化的研究

本文探讨了采用Polyerde-3吸附剂,从男性尿中提取HUTI-HUKN粗品,再依次经抑肽酶-琼脂糖4B亲和层析、胰蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,将HUTI和HUKN分离并纯化。每20升尿液得精品HUTI50mg,比活1,250u/mg;HUKN3mg,比活666u/mg。活性回收率分别为41％和50％。

水貂流行性卡他性胃肠炎研究概况

水貂流行性卡他性胃肠炎(ECG)是以胃肠卡他性炎症为主要特征的传染病。本病首次报道于美国犹他州,又叫犹他州肠炎。随后加拿大、斯堪的纳维亚、苏联、丹麦等国亦相继报道了本病的发生。我国自1987年以来,由于从上述国家引进种貂,已在许多貂场暴发本病,给养貂业造成很大经济损失。目前世界许多国家正在对本病进行研究,并取得了一定进展,现就本病目前的研究情况概述如下。

桔皮提取物有效成分的毒性研究

进行了桔皮提取物有效成分对小鼠急性毒性,眼刺激性和致突变性研究。结果,桔皮有效成分对小鼠口服LD_(50)为1578.0±268.2mg/kg,腹腔注射LD_(50)为379.7±36.0mg/kg;浓度为0.1％时对兔眼无刺激作用;Ames试验,桔皮有效成分对TA_(97)、TA_(93)、TA_(100)和TA_(102)的回变菌落数与其自发回变菌落数相近,无剂量效应关系;鼠骨髓细胞微核试验,各试验组微核率(1.8‰～2.3‰)均在正常范围内,精子畸形试验,各试验组精子畸形率(1.72％～2.04％)与阴性对照组无显著差异。表明桔皮提取物有效成分无致突变性。

犬传染性肝炎病原、诊断与实验免疫研究

首次应用原代和传代犬肾细胞从临床疑似犬传染性肝炎(ICH)和狐狸脑炎(FE)的犬、狐病料中分离获得4株腺病毒。经形态学、理化学、生物学等系统鉴定,证明为犬1型腺病毒(CAV-1),即犬传染性肝炎病毒ICHV)和狐狸脑炎病毒(FEV).以往对 ICH 犬肝测不出HA 效价的原因,是因为其中含有大量不耐热的非特异 HI 物和可与完整病毒竞争红细胞 HA 受体的单价游离血凝素.通过加热和加犬2型腺病毒(CAV-2)免疫血清的方法,可检出其中的 CAV-1血凝素而确定 ICH 诊断.用 ICH 犬肝中的游离血凝素免疫 ICH 易感犬,可使其产生抗 CAV-1HI抗体,获得 ICH 免疫.研究了用于检测 ICH 犬血清、腹水和肝脏样品的处理方法,首先建立了 ICH 微量补反诊断法;在对 ICH 犬肝 HA 特性研究的基础上,应用新鲜或醛化人0型红细胞和犬抗 CAV-1与 CAV-2血清,又研究成既可用于临床诊断又可用于抗体调查的微量血凝诊断法.进行了 CAV-1和 CAV-2弱毒苗的复制和实验免疫试验,证明 CAV-2弱毒复制苗对各类犬、狐均安全有效.而且对 CAV-1母源抗体有较强的抵抗力.通过回忆反应和特异淋转试验,汪明 CAV-2弱毒对 ICH 的免疫主要在于细胞免疫.