miR-451a调控TLR4信号通路参与结核分枝杆菌感染机制的研究

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)感染中微小RNA-451a(miR-451a)调控Toll样受体4(TLR4)的表达参与肺结核发病的机制。方法收集2020年4月-2021年4月活动性肺结核患者82例(活动性肺结核组),MTB感染但无肺结核症状的患者40例(MTB感染组),健康体检者40例(健康组),采用RT-qPCR检测miR-451a和TLR4表达水平并进行比较分析;同时进行体外细胞试验,通过双荧光素酶报告验证miR-451a和TLR4的靶向关系,并将人巨噬细胞U937分为4组:对照组、miR-451a组、TLR4组和miR-451a+TLR4组,分别转染NC质粒、miR-451a mimic过表达质粒、TLR4过表达质粒、miR-451a mimic和TLR4过表达质粒,比较各组miR-451a、TLR4的表达水平、细胞活力及凋亡率。结果MTB感染组患者血清miR-451a水平显著低于健康组(t=22.706,P<0.01),TLR4 mRNA水平显著高于健康组(t=36.914,P<0.01)。活动性肺结核组的miR-451a的水平显著高于MTB感染组(t=24.146,P<0.01),TLR4 mRNA水平显著低于MTB感染组(t=35.844,P<0.01)。miR-451a与TLR4 mRNA表达水平呈负相关(r值分别为0.462和0.511,P<0.05或P<0.01)。miR-451a组的miR-451a水平和凋亡率显著高于对照组(t值分别为53.805和61.388,均P<0.01),细胞活力显著低于对照组(F=4.366,P<0.01)。TLR4组的细胞活力、TLR4 mRNA和蛋白水平显著高于对照组(F_(细胞活力)=6.328,P<0.01;t_(mRNA)=63.884,P_(mRNA)<0.01;t_(蛋白)=43.571,P_(蛋白)<0.01),凋亡率显著低于对照组(t=33,797,P<0.01)。miR-451a+TLR4组的细胞活力、TLR4 mRNA和蛋白水平显著高于miR-451a组而低于TLR4组(细胞活力F值分别为4.742和5.291,均P<0.01;t_(mRNA)值分别为53.297和64.649,均P<0.01;t_(蛋白)值分别为51.450和43.556,均P<0.01),凋亡率显著低于miR-451a组,且显著高于TLR4组(t值分别为36.037和46.459,均P<0.01)。结论miR-451a可能通过靶向抑制TLR4信号通路调控MTB的感染过程。