2018年内蒙古察右后旗绵羊捻转血矛线虫流行病学调查及耐药性检测

为了解草原放牧绵羊捻转血矛线虫流行情况及目前常用驱虫药物的耐药情况,2018年3—10月,根据不同草场类型、不同养殖模式,在内蒙古乌兰察布市察右后旗贲红、白音察干、大陆号、锡林郭勒、土牧尔台5个地区选择16个牧场,每个牧场随机选择15只绵羊,共240只,进行绵羊捻转血矛线虫检测,发现绵羊捻转血矛线虫平均感染率为75%,平均感染强度为14.8×200个/g;选取6个牧场的感染率和感染强度都较大的绵羊进行驱虫试验,发现有5个牧场的绵羊捻转血矛线虫对阿苯达唑和伊维菌素产生了较强的耐药性。调查结果表明,察右后旗的绵羊捻转血矛线虫流行较为普遍,羊群感染较为严重,且对阿苯达唑、伊维菌素产生了不同程度的耐药性。结果提示,加强捻转血矛线虫的耐药性监测,研发新的驱虫药物,优化驱虫措施,防止盲目用药,同时加强饲养管理,改善圈舍和牧地环境卫生,依然是有效防控绵羊捻转血矛线虫的重要途径。

内蒙古部分地区放牧牛羊弓形虫血清学调查

[目的]了解内蒙古部分地区放牧牛羊弓形虫病感染情况。[方法]采用间接血凝试验(IHA)对阿拉善盟及呼伦贝尔市随机采集的286份放牧牛羊血清样本进行弓形虫抗体检测。[结果]绵羊血清弓形虫抗体总阳性率为1.68%,其中,阿拉善盟阳性率为4.84%,呼伦贝尔市阳性率为0.56%;经统计学分析,两个地区的绵羊血清弓形虫抗体阳性率差异不显著(P>0.05);牛血清弓形虫抗体总阳性率为0。[结论]内蒙古主要牧区放牧绵羊存在弓形虫感染,应引起足够的重视,并制定相应的弓形虫病防治措施。

动物医学专业实践教学模式改革探讨

动物医学专业是实践性较强的学科,提高学生实践能力对促进大学生就业和培养应用型兽医人才具有重要意义。客观分析了动物医学专业实践教学存在的问题,并探讨了动物医学专业实践教学模式的改革措施,以期为高校的动物医学专业实践教学改革提供借鉴。

加强兽医寄生虫学标本室建设 提升寄生虫形态学教学水平

为了提升寄生虫形态学教学水平,充分利用内蒙古农业大学预防兽医学寄生虫教研室积累的大量寄生虫标本进行授课,通过加强兽医寄生虫标本室建设和兽医寄生虫学实验教学改革探索,提升标本管理水平及寄生虫标本服务教学的水平,以期为该课程的教学改革提供思路。

1例犬畸胎瘤的诊疗报告

2018年12月内蒙古农业大学动物医院接收一病犬,其外阴异常增大,生殖道口有淡红色液体流出,触诊阴门内有一肿瘤硬物,表面光滑,呈淡粉色,不规则形状,初步诊断为阴道肿瘤。手术切除后经组织病理学检查,证实为未成熟的畸胎瘤。

环氧二十碳三烯酸对肥胖大鼠白色脂肪棕色化的影响

为了研究环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids, EET)对肥胖大鼠白色脂肪棕色化的影响,试验将32只4周龄雄性SD大鼠随机分为对照组(n=8)和高脂组(n=24),高脂组大鼠连续饲喂高脂饲料15周,将建模成功的肥胖大鼠再随机分为模型对照组和EET组(11,12-EET组和14,15-EET组),每组8只。EET组大鼠每天按体重30μg/kg皮下分别注射11,12-EET和14,15-EET,对照组和模型对照组皮下注射同等剂量生理盐水,每周测量体重。10 d后采用ELISA、实时荧光定量PCR方法检测大鼠血脂含量、口服糖耐量及脂肪组织中棕色化相关指标解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors, VEGF)和过氧化物酶体增殖激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome prolifertor-activated receptor-γ coactivator-1α,PGC-1α)基因的相对表达量。结果表明:高脂饲料饲养15周后,高脂组体重显著高于对照组(P<0.05)。与模型对照组相比,11,12-EET组和14,15-EET组大鼠在口服葡萄糖2 h后,血糖浓度缓慢恢复至正常值;11,12-EET组和14,15-EET组大鼠血清三酰甘油(TG)含量显著降低(P<0.05);11,12-EET组大鼠腹股沟脂肪组织中UCP-1基因相对表达量显著升高(P<0.05),14,15-EET组大鼠肩胛骨脂肪组织中UCP-1基因相对表达量显著升高(P<0.05);14,15-EET组和11,12-EET组大鼠腹股沟和肩胛骨脂肪组织中VEGF基因相对表达量均显著降低(P<0.05);14,15-EET组和11,12-EET组大鼠肩胛骨脂肪组织中PGC-1α基因相对表达量显著降低(P<0.05),腹股沟脂肪组织中PGC-1α基因相对表达量显著升高(P<0.05)。说明EET可能通过改善糖脂代谢促进肥胖大鼠白色脂肪棕色化过程。

Nesfatin-1对饥饿小鼠氧化应激及自噬的影响

为了研究在急性禁食状态下Nesfatin-1对机体氧化应激及自噬的影响,试验构建小鼠饥饿模型,将50只小鼠随机均分为阴性对照组、禁食24 h组、禁食48 h组、Nesfatin-1+禁食24 h组、Nesfatin-1+禁食48 h组。禁食24,48 h组小鼠分别禁食24 h及48 h;Nesfatin-1+禁食24 h组及Nesfatin-1+禁食48 h组分别在禁食24,48 h基础上按每20 g体重腹腔注射1.25 nmol/g Nesfatin-1 0.26 mL;阴性对照组腹腔注射同等剂量PBS。对各组小鼠进行眼球采血,处死后解剖取脑、肝脏组织。采用化学荧光法测定各组小鼠肝脏氧化基因指标活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光强度,采用ELISA方法测定各组小鼠血清丙二醛(malonaldehyde,MDA)和Nesfatin-1含量,运用实时荧光定量PCR方法测定各组自噬相关基因Beclin-1、LC3、P62 mRNA相对表达量。结果表明:与阴性对照组相比,禁食24 h组及禁食48 h组小鼠ROS荧光强度、MDA含量极显著升高(P<0.01),脑组织Beclin-1、LC3 mRNA相对表达量显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01),P62 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01);在禁食24,48 h后,小鼠血清Nesfatin-1含量显著降低(P<0.05),使用Nesfatin-1干预后,其含量极显著升高(P<0.01);与禁食24 h组相比,Nesfatin-1+禁食24 h组小鼠的ROS、MDA含量和Beclin-1、LC3 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),P62 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与禁食48 h组相比,Nesfatin-1+禁食48 h组小鼠的ROS、MDA含量和Beclin-1、LC3 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),P62 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。说明急性禁食会使小鼠体内Nesfatin-1含量降低,氧化应激与自噬水平上调,Nesfatin-1能增强细胞活力,注射Nesfatin-1后可以降低小鼠体内的氧化应激水平,也能够降低小鼠在急性禁食状态下上调的自噬水平。

鸽圆环病毒Cap基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1×10^(2)~1×10^(7) copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1×10^(2) copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的100倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于2%;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床病死鸽肝脏样品检测结果显示,PiCV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),说明该方法具有良好的适用性。可应用于对PiCV的快速检测,为PiCV的及时防控提供有力技术支持。

基于CRISPR-Cas12a核酸检测研究进展

由病毒、细菌、真菌、寄生虫和其他病原微生物引起的疾病对人类健康构成极大威胁,如果能在疾病早期检测出来,就能够对传染性疾病起到关键的预防作用。近些年来,CRISPR-Cas系统在检测病原方面已被广泛应用,其中CRISPR-Cas12a弥补了Cas9的不能多点编辑的缺陷和Cas12a靶向DNA的特性,成为了热门的核酸检测工具。论文综述了Cas12a与Cas9的不同之处、Cas12a的发现、CRISPR-Cas12a的信号检测平台以及目前使用的检测方法。

蓝刺头黄酮对小鼠血清免疫指标和抗氧化指标的影响

试验旨在研究蓝刺头黄酮对小鼠免疫指标和抗氧化指标的影响。选取80只昆明小鼠,随机分为4组,每组20个重复,每个重复1只鼠。低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠分别灌服100、200、400 mg/kg蓝刺头黄酮溶液,空白对照组灌服等量蒸馏水。试验期30 d。结果显示,与对照组相比,各剂量组小鼠胸腺、脾脏指数均升高(P>0.05),高剂量组小鼠胸腺指数显著高于对照组(P<0.05)。高剂量组小鼠血清中免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)含量显著高于对照组(P<0.05),免疫球蛋白M(IgM)含量略高于对照组(P>0.05);中剂量组小鼠血清中IgA含量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,高剂量组、中剂量组小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)含量极显著降低(P<0.01),高剂量组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低(P<0.05),中剂量组小鼠血清IL-6含量显著降低(P<0.05)。高、中、低剂量组小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著高于对照组(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著高于对照组(P<0.01);高、低剂量组小鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于对照组(P<0.01),高剂量组小鼠血清丙二醛(MDA)含量极显著低于对照组(P<0.01)。研究表明,蓝刺头黄酮能够促进小鼠免疫器官发育,增强小鼠机体抗氧化能力,从而有效改善机体免疫功能,灌服400 mg/kg蓝刺头黄酮溶液效果最佳。

牛结节性皮肤病病毒L1R基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为了获得牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)L1R蛋白及其多克隆抗体,试验根据GenBank已公布的LSDV L1R蛋白的编码区合成序列,将合成序列插入原核表达质粒pET-32a,构建pET32a-L1R重组阳性质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。对诱导表达的重组蛋白采用镍离子亲和层析柱进行纯化,通过透析进行纯化蛋白的复性,用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定。将鉴定成功的蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价。结果表明:L1R蛋白在大肠杆菌中高效表达,在1 mmol/L IPTG、37℃、200 r/min条件下,主要以包涵体的形式表达且纯度较高,表达的蛋白质分子质量约为40 ku,与预期的蛋白质大小一致。纯化后的L1R重组蛋白能被His单克隆抗体及山羊痘阳性血清识别,反应原性良好。制备的小鼠抗LSDV L1R多克隆抗体效价可达1∶102400,免疫原性良好。说明试验成功在大肠杆菌中表达LSDV L1R重组蛋白,并制备获得多克隆抗体。

荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎的病理学观察和病原鉴定

为了探究1例荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎病例的病理变化并鉴定病原,本试验对1头24月龄病死荷斯坦育成母牛进行临床症状观察、尸体剖检和组织病理学观察,随后进行细菌分离培养,并通过抗酸染色和多位点PCR方法进行菌种鉴定。结果显示:发病牛临床表现共济失调、转圈、四肢及全身肌肉抽搐、眼球球结膜外突和角弓反张,病程数月;尸检可见脑底部表面、脑室内表面、肺脏、肾脏及后纵膈淋巴结表面和切面散在或密布大小不等的粟粒状黄白色结节;组织病理学观察结果显示,大脑、小脑、脑干、侧脑室和第四脑室的蛛网膜下腔内和局部脑实质内,以及肺脏、肾脏和后纵膈淋巴结内均有大小不等的典型结核性肉芽肿;将分离和纯培养的结核杆菌菌落制备涂片进行抗酸染色,可观察到散在或成簇红染的细长的分枝状小杆菌;分离菌株经结核分枝杆菌复合群(MtbC)的特异性多位点PCR鉴定为牛分枝杆菌。本试验在国内首次描述了由牛分枝杆菌引起荷斯坦育成母牛结核性脑膜脑炎病例的病理变化,为牛结核病的诊断和研究提供参考。

幼龄长颈鹿坏死杆菌病的诊断和病理学观察

坏死杆菌病是由厌氧的革兰阴性坏死杆菌引起的一种综合征性疾病,主要感染家养反刍动物 [1] 、野生反刍动物 [2-6] 和袋鼠 [7-10] ,偶尔感染人类。牛和羊是最易感染坏死杆菌的家畜。野生反刍动物的坏死杆菌病已报道于野生叉角羚( Antilocapra americana ) [2] 、苔原驯鹿( Rangifer tarandustarandus ) [3] 、黑尾鹿( Odocoileus hemionus columbianus ) [11] 、欧洲野牛(B ison bonasus ) [5] 和羊驼( Vicugna pacos ) [6] 。坏死杆菌病的主要疾病表现包括坏死性口炎、蹄皮炎、阴茎包皮炎、瘤胃炎、肝脓肿、静脉炎、支气管性肺炎,甚至引起脓毒败血症。

蒙古马马胃蝇三龄幼虫形态鉴定和种系发育关系分析

为了明确内蒙古自治区呼和浩特市和通辽市蒙古马马胃蝇蛆病病原种类和种系发育关系,本试验于2023年3月在呼和浩特市和通辽市屠宰场采集马胃蝇三龄幼虫120只,利用光学显微镜和扫描电子显微镜对其进行形态学鉴定;通过PCR方法扩增其线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因,并利用MEGA 6.0和DnaSP 5.0软件将COXⅠ基因序列与GenBank中胃蝇科、皮蝇科和狂蝇科昆虫COXⅠ基因序列进行比对分析,并构建系统发育树;同时对呼和浩特市和通辽市的马胃蝇三龄幼虫进行线粒体COXⅠ基因单倍型和遗传分化分析。结果显示,本试验采集的马胃蝇三龄幼虫体色呈粉红色、口脊末端平滑,形态特征与黑腹胃蝇三龄幼虫一致。系统发育分析结果显示,通辽市黑腹胃蝇TONGLIAO1、TONGLIAO2、TONGLIAO3和TONGLIAO4与呼和浩特市黑腹胃蝇HUHEHAOTE2处于同一分支,呼和浩特市黑腹胃蝇HUHEHAOTE1与GenBank数据库中胃蝇科黑腹胃蝇处于同一分支,2个地区的黑腹胃蝇均与胃蝇科鼻胃蝇、红尾胃蝇和肠胃蝇处于不同分支,与皮蝇科、狂蝇科和外群双翅目麻蝇科距离较远。马胃蝇三龄幼虫COXⅠ基因相似性比对结果与系统发育分析结果一致。呼和浩特市和通辽市黑腹胃蝇线粒体COXⅠ基因序列共含有5个单倍型,二者没有共享单倍型,遗传分化系数(Fst)值大于0.05,基因流(Nm)为4。结果表明,呼和浩特市和通辽市蒙古马马胃蝇蛆病病原为黑腹胃蝇,且亲缘关系较近,未出现遗传分化。

蓝刺头黄酮对小鼠血液生理、生化指标和脏器指数、组织病理学的影响

为了研究蓝刺头黄酮对昆明小鼠血液生理、生化指标及脏器指数的影响,评价蓝刺头黄酮的安全性,试验将80只昆明小鼠分为4组,每组20只,即高、中、低剂量组(分别按体重灌胃蓝刺头黄酮400 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg)和对照组(灌胃纯化水0.5 mL/只),连续用药30 d,试验结束时对小鼠进行眼球采血,测定血液生理、生化指标,处死各组小鼠,计算脏器指数并取肝脏、肾脏制备病理组织学切片,观察病理组织学变化。结果表明:高、中、低剂量组间血常规指标均无显著差异(P>0.05);高剂量组平均红细胞数显著高于对照组(P<0.05),高剂量组和中剂量组血红蛋白含量均显著高于对照组(P<0.05);各组血常规指标均在正常范围内。高、中、低剂量组间血液生化指标无显著差异(P>0.05);高剂量组总胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05),高剂量组和中剂量组天门冬氨酸氨基转移酶活性、三酰甘油含量均显著低于对照组(P<0.05)。高、中、低剂量组间脏器指数差异不显著(P>0.05),但高剂量组肝脏、肺脏和心脏指数显著高于对照组(P<0.05)。高、中、低剂量组肝脏、肾脏未发生明显病理组织学变化。说明蓝刺头黄酮对昆明小鼠无毒副作用,按体重灌胃蓝刺头黄酮400 mg/kg能够提高小鼠脏器指数,增加小鼠携氧能力,降低小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶活性和三酰甘油、总胆固醇含量。

蒙古马胃蝇蛆病的组织损伤研究与虫体鉴定

为了明确蒙古马马胃蝇蛆感染组织的病理变化及感染虫体种类,2021年12月份在内蒙古和林和呼伦贝尔屠宰场各收集到9例感染马胃蝇蛆的蒙古马病料,对感染马的咽部、胃部、十二指肠进行病理学观察,并且利用光学显微镜和扫描电镜对胃蝇第三龄幼虫进行形态学观察,同时选取胃蝇第三龄幼虫,通过PCR方法扩增线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ(COXⅡ)基因。利用MEGA6.0软件对胃蝇COXⅡ基因和GenBank数据库中胃蝇科的其他种类同源序列进行Clustal W比较,构建系统发育树。结果表明:感染马的病理变化主要为咽部、胃部、十二指肠黏膜出现不同程度的损伤和增生性炎变化,黏膜层水肿,炎性细胞浸润,上皮细胞空泡化。咽部出现虫体肉芽肿,胃部出现蝇蛆损伤的炎性寄生灶。和林蒙古马马胃蝇的第三龄幼虫口脊骨的页部、伪头小刺特征与黑腹胃蝇幼虫的形态一致。呼伦贝尔蒙古马马胃蝇的第三龄幼虫口脊骨、棘刺特征和肠胃蝇相似。系统发育树表明,和林蒙古马马胃蝇与GenBank数据库中黑腹胃蝇聚在一起,而呼伦贝尔蒙古马马胃蝇单独成为1个分支,与其他胃蝇的遗传距离很大。所以和林蒙古马马胃蝇鉴定为黑腹胃蝇,呼伦贝尔蒙古马马胃蝇是基因变异较大的胃蝇变种。

Ⅱ型牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定

为了解内蒙古呼和浩特部分地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况,本研究采用RTPCR技术从采集自内蒙古某屠宰场的32份牛肺脏样品中检测出两株BVDV,命名为BVDV-HT1704、BVDV-HT1723株。通过在MDBK细胞上传代、免疫荧光试验、5’-UTR基因序列测定及分子进化分析对检测出BVDV阳性的肺脏组织进行鉴定。结果显示:在MDBK细胞中盲传10代后没有病变产生;经IFA检测,在病毒感染的细胞浆内产生特异性荧光;序列同源性和系统进化分析表明该毒株属于BVDV-Ⅱa型,且两株分离株属于单一的分支。本研究首次在我国正常牛肺脏组织中分离到BVDV,为了解BVDV在内蒙古自治区的流行情况及地理分布提供依据,并为相关疫苗的研发奠定了基础。

布鲁氏杆菌S2株DUF2326基因克隆与生物信息学分析

为了分析布鲁氏杆菌猪种S2疫苗株DUF2326基因编码蛋白的结构、功能以及抗原表位,试验对DUF2326基因进行克隆、生物信息学分析及抗原表位预测。结果表明:DUF2326基因全长1653 bp,编码550个氨基酸,分子质量为61.775 ku,理论等电点为5.34,呈酸性,不稳定指数为35.17,该蛋白无跨膜区,不存在信号肽,α-螺旋为二级结构的主要成分(59.64%)。DUF2326蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,含有较多潜在的B细胞抗原表位。说明DUF2326蛋白具有良好的抗原性,具备成为鉴别布鲁氏杆菌病疫苗免疫和自然感染抗原的潜力。

BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

为了快速检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)和区分不同基因型的BVDV,试验根据GenBank中BVDV的3种基因型5′端非翻译区(UTR)设计2对特异性引物和3个探针,优化引物和探针浓度,建立BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。采集28份犊牛鼻拭子和40份粪便拭子样品,应用建立的方法进行检测,并与普通RT-PCR方法进行比较。结果表明:扩增体系经优化,BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3的最佳引物浓度分别为350,350,200 nmol/L,最佳探针浓度分别为400,550,350 nmol/L,试验建立的三重实时实光定量RT-PCR方法从多种致牛腹泻和呼吸系统疾病的病原中只检测到BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3;同时检测到的BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3的最低检出量分别为1.0×10^(1),1.0×10^(2),1.0×10^(1) copies/μL,而普通RT-PCR方法的最低检出量分别为1.0×10^(2),1.0×10^(5),1.0×10^(3) copies/μL;组内变异系数和组间变异系数均小于5.0%。应用该方法从采集的68份临床样品中检出17份BVDV-1阳性样品,而普通RT-PCR只检测出12份BVDV-1阳性样品。说明试验建立的BVDV基因分型三重实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高和稳定性好等优点,可用于BVDV的3种基因型的快速鉴别。

牛病毒性腹泻病毒E2基因生物信息学分析及可溶性表达

为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Opti-E2;转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌,经SDS-PAGE和Western blot分析,成功获得大小为43 kDa的BVDV E2基因的最佳可溶性蛋白,且该蛋白特异性较好。本试验E2蛋白的成功表达可为后续ELISA方法的建立和亚单位疫苗的开发奠定基础。