马卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植技术

在马(Equus caballus)的繁殖和非繁殖季节,本研究探讨马扩展型(Ex)和紧凑型(Cp)卵丘-卵母细胞复合体(COCs)卵母细胞的孤雌激活效率。在繁殖季节,探讨马驹和成年马成纤维细胞核移植(SCNT)的成功率。孤雌激活实验结果显示,在繁殖季节,发育到2-细胞、4-细胞和桑椹胚的比例,扩展型(Ex)卵丘-卵母细胞复合体分别是52.8%(19/36)、38.9%(14/36)和5.6%(2/36),紧凑型(Cp)卵丘-卵母细胞复合体分别是47.9%(23/48)、33.3%(16/48)和6.2%(3/48)。在非繁殖季节,发育到2-细胞、4-细胞的比例,扩展型(Ex)分别是37.2%(16/43)和16.3%(7/43),紧凑型(Cp)的比例分别是35.1%(27/77)和11.7%(9/77),都没有获得桑椹胚。同一季节,扩展型(Ex)与紧凑型(Cp)胚胎发育的比率差异不显著(P>0.05),不同季节,两者差异显著(P<0.05)。体细胞核移植实验结果显示,以马驹成纤维细胞作为核供体细胞,胚胎发育到2-细胞、4~8细胞和桑椹胚的比例分别是41.5%(22/53)、33.9%(18/53)和15.1%(8/53),以成年马成纤维细胞作为核供体细胞,比例分别是38.9%(7/18)、22.2%(4/18),没有获得桑椹胚。综上所述,季节和卵丘-卵母细胞复合体(COCs)类型影响马卵母细胞孤雌激活的效率,不同核供体细胞影响克隆胚胎构建的成功率。

马非手术法胚胎移植技术体系的建立

我国处于传统马业向现代马业转变的重要阶段,针对我国马业发展的技术需求,本研究开展马发情、排卵鉴定与调控、人工授精、非手术法胚胎采集和胚胎移植等马胚胎移植技术体系的关键技术的研究,建立马非手术法胚胎移植技术体系。结果发现,B超检查法能够精准的判断母马发情与排卵情况;母马排卵第5天,肌肉注射0.2 mg PGF后的发情率为63.2%,母马卵泡直径≥30 mm;静脉注射1500 IU hCG,36~48 h排卵比例为84.3%;采用子宫角输精技术,母马情期受胎率为85.4%;选取乳酸钠林格注射液作为冲胚液,IMV胚胎保存液作为洗胚液,在马受孕后7~8 d进行胚胎采集(囊胚),成功率为72.8%,胚胎移植成功率为83.3%。结果表明,马非手术法胚胎移植技术体系的建立,可获得稳定的较高人工授精、胚胎移植成功率,可用于商业化、规模化推广应用。