生物制品中猪细环病毒污染检测方法的建立和初步应用

目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、最低检测限等参数进行验证，并对试验样本对检测的干扰性进行分析。利用该方法对猪全血样品、生产用细胞及轮状病毒疫苗样品进行检测，通过建立TTSuV分型检测的PCR方法对阳性样品进行分型。结果荧光PCR法的特异性较好，与不同种属的细小病毒、猴SV40病毒及猪圆环病毒无明显的交叉反应，TTSuV1和TTSuV2荧光PCR分别在109～103拷贝／μl和109～102拷贝／μl范围内线性较好，R2值达到0．993以上，TTSuV1和TTSuV2的最低检测限分别为1×103拷贝／μl和1×102拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度CV值均小于7％，试验内病毒拷贝数的CV值小于25％，试验间CV值小于45％。细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。对20份猪全血样品进行检测，8份为阳性，其中1份为TTSuV1阳性，4份为TTSuV2阳性，3份为TTSuV1／2混合感染。 TTSuV1和TTSuV2型与标准株序列同源性分别为98％～99％和98％。对细胞样品和轮状病毒疫苗进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了TTSuV荧光PCR检测法，能够用于生物制品TTSuV污染的检测，进一步提高了生物制品的安全性。