解整合素金属酶结构域8调控软骨肉瘤的机制

目的:探讨解整合素金属酶结构域8(ADAM8)通过磷酸肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)/雷帕霉素哺乳动物靶点(mTOR)通路调控软骨肉瘤的作用机制。方法:取人软骨肉瘤细胞株(SW1353及HCS-2/8)及人正常软骨细胞(HC)(美国模式培养物集存库),通过免疫印迹法检测细胞中ADAM8及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白。根据随机数字表法将HCS-2/8细胞分为3组:阴性对照(NC)短发卡RNA(shRNA)组,转染NC shRNA;shADAM8组,转染ADAM8 shRNA;shADAM8+SC79组,转染ADAM8 shRNA 48 h后进行10.96 M Akt激动剂(SC79)给药。观察各组细胞PI3K/Akt/mTOR通路、增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。取20只BALB/c裸鼠,建立软骨肉瘤体内模型后根据随机数字表法分为NC shRNA组10只及ADAM8 shRNA组10只,验证ADAM8对Akt/mTOR通路的作用机制。通过独立样本t检验或单因素方差分析进行统计学分析。结果:免疫印迹结果表明,SW1353及HCS-2/8组ADAM8、p-PI3K、p-Akt、mTOR的表达均高于HC组(ADAM8:3.40±0.53及2.01±0.20比1.00,F=27.260,P<0.05;p-PI3K:0.52±0.07及0.53±0.04比0.21±0.05,F=22.120,P<0.05;p-Akt:0.58±0.05及0.61±0.08比0.14±0.04,F=38.540,P<0.05;mTOR:0.52±0.04及0.65±0.04比0.21±0.03,F=40.640,P<0.05)。sh-ADAM8组p-Akt及mTOR低于NC shRNA组(p-Akt:0.11±0.03比0.75±0.03,F=0.578,P<0.05;mTOR:0.11±0.02比0.79±0.07,F=69.600,P<0.05),差异均有统计学意义。sh-ADAM8组细胞增殖、细胞迁移率、侵袭细胞数均低于NC shRNA组(72 h时细胞活性:0.81±0.01比1.56±0.01,F=255.200,P<0.05);迁移:[(47.67±2.62)%比(78.67±1.70)%,F=131.400,P<0.05];侵袭:[(127.67±3.68)个/视野比(249.30±3.29)个/视野,F=819.000,P<0.05],而sh-ADAM8组细胞凋亡率高于NC shRNA组[(16.66±0.90)%比(4.34±0.61)%,F=158.300,P<0.05],差异均有统计学意义。SC79逆转shADAM8对软骨肉瘤细胞的调控作用。在体内模型中,sh-ADAM8组p-Akt及mTOR分别低于NC shRNA组(p-Akt:0.03±0.01比0.29±0.10,t=3.092,P<0.05;mTOR:0.03±0.01比0.24±0.08,t=3.622,P<0.05),差异有统计学意义,证实ADAM8在软骨肉瘤中靶向Akt/mTOR通路。结论:ADAM8通过Akt活化调控mTOR通路介导的软骨肉瘤细胞扩散及死亡。