提高医学院校“生物化学和分子生物学”理论课教学效果的几点体会

生物化学与分子生物学是重要的医学基础课,当今生物化学与分子生物学已成为生命科学领域最重要的前沿学科之一。生物化学与分子生物学同其他医学基础课有广泛的联系与交叉,对现代医学的发展起着重要的促进作用。所以,教好及学好生物化学与分子生物学,对于医学院校师生至关重要。本文着重探讨医学院校生物化学与分子生物学理论课教学的体会,讲课重点突出,注意归纳总结各章节的纵向、横向联系,采用有针对性的教学方法;加强与其他基础课及临床课的联系;加强多种教学手段的结合可以提高教学效果。

先天免疫系统与类风湿性关节炎

类风湿性关节炎由于滑膜慢性炎症导致关节僵硬、肿胀、疼痛及关节损毁等临床症状。这些炎症以先天免疫系统的成纤维细胞样的滑膜细胞,包括巨噬细胞、树突细胞、肥大细胞、NK细胞之间相互作用为特点,还有适应性免疫系统的T淋巴细胞及B淋巴细胞之间相互作用。先天免疫系统最显著的功能是对微生物病原体的初始识别,当遭遇外源性物质侵入机体时,首先由巨噬细胞和树突状细胞介导质膜绑定或细胞内模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)激活先天免疫系统,从而导致炎症细胞因子和趋化因子的产生。大量研究表明,类分湿关节炎发生阶段,先天免疫系统持续处于激活状态,导致大量炎症细胞因子的持续过表达,引起作用受体及信号通路的改变,促进RA的发展。本文就先天免疫系统中髓单核细胞的产生、作用受体、细胞因子的改变引起RA变化做一综述。

Survivin反义RNA/HSP70双基因对MCF-7细胞的影响

目的探讨survivin反义RNA/HSP70双基因转染对乳腺癌细胞系MCF-7的影响。方法将已成功获得的双基因载体(pIRES2-EGFP-survivin反义RNA/HSP70)用脂质体介导转染乳腺癌细胞系MCF-7,转染72h,收集各组细胞,用倒置荧光显微镜观察并证实转染是否成功;采用real-time PCR方法检测细胞内survivin基因mRNA水平的表达变化;用Western blotting检测细胞HSP70蛋白表达变化;应用Annexin-V-cy5/7AAD双染后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果转染双基因载体与转染空载体的乳腺癌细胞系MCF-7于倒置荧光显微镜下可见绿色荧光;将转染双基因载体的MCF-7细胞与转染空载体的MCF-7细胞和未转染的MCF-7细胞相比,survivin mRNA表达水平降低,并有效诱导细胞发生凋亡,而HSP70蛋白表达升高。结论 Survivin反义RNA与HSP70双基因转染成功;survivin反义RNA能干扰MCF-7内源survivin的表达,诱导细胞凋亡;HSP70能上调MCF-7细胞HSP70蛋白的表达。

Survivin反义RNA/HSP70双基因转染对HepG2细胞的影响

目的:探讨survivin反义RNA/HSP70双基因转染对肝癌细胞系HepG2的影响。方法:将已成功获得的双基因载体(pIRES2-EGFP-survivin反义RNA/HSP70)用脂质体介导转染肝癌细胞系HepG2,转染72小时,收集各组细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染后的细胞,通过RT-PCR、western-blot检测转染后细胞中survivinmRNA、survivin蛋白及HSP70蛋白表达的变化。结果:转染双基因载体与转染空载体的肝癌细胞系HepG2于倒置荧光显微镜下可见绿色荧光;转染双基因载体的HepG2细胞与转染空载体的HepG2细胞和未转染的HepG2细胞相比,survivin mRNA和survivin蛋白表达水平降低,而HSP70蛋白表达升高。结论:Sur-vivin反义RNA与HSP70双基因转染成功;survivin反义RNA能干扰HepG2内源survivin的表达,HSP70能上调HepG2细胞HSP70蛋白的表达。

肉苁蓉多糖对THP-1细胞吞噬作用的影响及其机理研究

将单核细胞株THP-1按照随机数字表随机分为观察组和对照组两组,正常的观察组给予肉苁蓉多糖培养液,根据肉苁蓉多糖浓度不同又分为10、50、100μg/L组,对照组不添加肉苁蓉多糖培养液,实验组中的不同浓度组、对照组,每组各24例.比较各组THP-1细胞吞噬率、吞噬指数以及细胞因子分泌水平,以此研究肉苁蓉多糖对THP-1细胞吞噬作用的影响并探讨其发生机理.结果显示,观察组中10、50、100μg/L组单核巨噬细胞吞噬率分别为(17.42±3.19)%、(23.32±3.82)%、(29.41±4.11)%,均高于对照组的(9.34±1.26)%,比较差异有统计学意义(F=162.63,P<0.01);10、50、100μg/L组单核巨噬细胞吞噬指数分别为(0.45±0.13)、(0.67±0.19)、(0.82±0.21),均高于对照组的(0.22±0.09),比较差异有统计学意义(F=62.60,P<0.01);10、50、100μg/L组IFN-γ分别为(4.21±1.11)、(7.38±1.86)、(9.51±2.10)mg/L,均高于对照组(0.79±0.06)mg/L,比较差异有统计学意义(F=152.74,P<0.01);10、50、100μg/L组IL-1分别为(24.11±4.15)、(74.60±11.21)、(103.61±19.65)mg/L,均高于对照组(10.21±1.39)mg/L,比较差异有统计学意义(F=343.15,P<0.01),各指标进一步采用Newman-Keals法进行两两比较均有统计学意义(P<0.01).由此认为,肉苁蓉多糖可能通过增强THP-1细胞吞噬能力和促细胞因子释放发挥免疫调节功能.

Survivin拮抗肽对体内血管生成的影响

肿瘤的侵袭、转移过程是多因素、多步骤的过程，一般涉及肿瘤细胞黏附、运动，细胞外基质降解，肿瘤新生血管生成等多个环节。抗肿瘤血管生成是目前抗肿瘤转移药物研究的重要靶环节之一。

CD71抗体靶向转移系统的构建及对细胞的生长抑制作用

目的:构建肝癌靶向性的Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统,并研究其在体外对肝癌细胞的生长抑制作用。方法:体外培养抗转铁蛋白受体(CD71)抗体的杂交瘤细胞株D2C5.6,诱导裸鼠产生腹水并纯化,以水溶性碳二亚胺介导CD71抗体与多聚左旋赖氨酸(PLL)的连接,再与Survivin反义RNA/HSP70双基因载体按比例混匀,得到-PLL-载体系统;转染人肝癌细胞株HepG2后,采用MTT法观察细胞的生长情况。结果:分析型酸性尿素凝胶电泳实验证实抗CD71抗体与PLL成功连接;MTT试验显示,Ab-PLL-Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统处理的HepG2细胞生长明显受到抑制。结论:CD71抗体介导的肝癌靶向转移系统已经成功构建,为肝癌的基因治疗提供了一定的实验基础。

CD23特异性配体对B细胞增殖及分化的影响

ＣＤ２３特异性配体（抗ＣＤ２３ＭｃＡｂ和ＩｇＥ免疫复合物）与表达ＣＤ２３分子的活化８细胞共育，然后分析其对Ｂ细胞增殖和分化的影响。结果表明：抗ＣＤ２３单抗及ＩｇＥ免疫复合物（ＩｇＥＩＣ）对Ｂ细胞增殖呈促进和抑制双向调节效应，即：在高浓度（ＣＤ２３单抗＞０。１６μｇ／ｍｌ，ＩｇＥＩＣ＞２．５μｇ／ｍｌ）时呈剂量依赖性抑制，而在某一适当浓度范围内ＣＤ２３ＭｃＡｂ在（０．００２５～０．０５μｇ／ｍｌ，ＩｇＥＩＣ在０．０８～０．３２μｇ／ｍｌ）呈促增殖效应。ＦＡＣＳ分析观察到促Ｂ细胞增殖浓度的ＣＤ２３单抗交联膜ＣＤ２３分子（ｍＣＤ２３）可促进Ｂ细胞表面免疫球蛋白（ｓＩｇ）的转型，即使ＩｇＭ＋／ＩｇＤ＋Ｂ细胞进一步向浆细胞（ＡＦＣ）或记忆细胞分化。ＣＤ２３ＭｃＡｂ对Ｂ细胞增殖、分化的调节有赖于Ｂ细胞ｍＣＤ２３的表达。其次，适当浓度的交联使ＣＤ２３ＭｃＡｂ与其所抗不同表位结合而传递阳性信号，促使Ｂ细胞Ｉｇ重链转型。这一发现表明ｍＣＤ２３在Ｂ细胞增殖、分化中起重要的调节作用。

Survivin拮抗肽对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响

目的 探讨Survivin拮抗肽对人胶质瘤U251细胞体外增殖的抑制作用及细胞周期的影响。方法 将U251细胞与不同浓度的Survivin拮抗肽进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度的Survivin拮抗肽对U251细胞的生长抑制率;采用流式细胞仪分析细胞周期与细胞凋亡。结果 浓度为5、10、20μg/ml的Survivin拮抗肽均能抑制U251细胞的生长,且抑制率与Survivin拮抗肽浓度及作用时间成正比(P<0.01)。20μg/ml Survivin拮抗肽作用U251细胞72h,抑制率达63.33%。流式细胞仪结果显示,终浓度为5、10、20μg/ml Survivin拮抗肽亦能促进U251细胞凋亡,且随作用浓度增大及作用时间延长凋亡率明显上升(P<0.01);20μg/ml Survivin拮抗肽作用U251细胞72h,凋亡率为31.29%。不同浓度的Survivin拮抗肽作用U251细胞72h,随作用浓度增大,G2/M期细胞构成比明显上升(P<0.01)。结论 Survivin拮抗肽对U251细胞增殖具有抑制作用和促进凋亡,其抗胶质瘤细胞增殖作用机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡,调控肿瘤细胞周期。

Survivin拮抗肽的筛选及鉴定

目的:筛选能与Survivin相结合的多肽,从中寻找拮抗剂,抑制Survivin的作用。方法:通过筛选噬菌体12肽库得到与Survivin相结合的多肽,以固相法合成这些多肽并用质谱仪进行鉴定;利用Wwestern blot和caspase-3活性检测从中筛选拮抗Survivin表达和功能的多肽。结果:用Survivin蛋白筛选噬菌体肽库,得到8条结合多肽;经体外实验验证,8条肽抑制Survivin蛋白的活性不一,其中3条有显著活性(P<0.05);而且这3条多肽能够增强caspase-3的活性。结论:以噬菌体随机肽库法筛选获得了有抑制Survivin功能的拮抗肽,此结果为抗肿瘤肽类药物的研制奠定了基础。

CD_(23)McAb抑制活化B细胞增殖机制的初步探讨

本研究用CD_(23)单克隆抗体(CD_(23)McAb)交联活化的人扁桃体B细胞,证明CD_(23)McAb对B细胞呈双向调节效应,即:高浓度区抑制B细胞增殖,低浓度区促进B细胞增殖。继而,用对B细胞有抑制效应浓度的CD_(23)McAb交联B细胞膜CD_(23)分子,通过研究抑制效应恢复条件,探讨了CD_(23)McAb产生抑制效应的作用机制。结果显示;去除CD_(23)McAb后,抑制作用不能恢复,用SAC再次活化,使B细胞恢复增殖状态,用促B细胞增殖浓度的CD_(23)M-cAb却无此作用。提示:过量CD_(23)McAb过度交联B细胞膜CD_(23)分子后,所产生的抑制B细胞增殖现象,可能是由于促使B细胞从细胞增殖周期进入非增殖状态的G_0期所致。

五味润僵汤对胶原诱导性关节炎大鼠的治疗

目的:探讨蒙药五味润僵汤对胶原诱导性关节炎大鼠治疗。方法:建立Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型,采用酶联免疫吸附实验检测各组血清中的IL-6、IL-10。结果:Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠有明显的局部关节肿胀,蒙药五味润僵汤能抑制血清中的IL-6,而上调IL-10水平。结论:蒙药五味润僵汤对胶原诱导性关节炎大鼠有明显疗效。

组织多肽特异性抗原细胞角蛋白19和癌胚抗原联合检测在肺癌诊断中的临床意义

目的 :评价组织多肽特异性抗原 (TPS)、CYFRA2 1- 1和癌胚抗原 (CEA)在各种病理类型肺癌中诊断的应用价值 ,通过联检观察它们在肺癌诊断中的敏感性和有效性。方法 :收集血清标本 12 7例 ,其中肺鳞癌 2 2例 ,腺癌 19例 ,小细胞肺癌 16例 ,不能分型肺癌组 13例 ,肺部良性疾病组 2 7例和正常对照 30例。采用酶联免疫吸附试验进行检测。结果 :TPS、CYFRA2 1- 1和CEA在肺癌各病理类型组的血清水平与正常对照组有差异 (P <0. 0 5 ) ,TPS和CEA在肺癌各病理类型组的血清水平高于良性病变组 (P <0 . 0 5 ) ,CYFRA2 1- 1在肺癌各病理类型组的血清含量与肺癌良性疾病组无差异 (P >0 . 0 5 )。TPS在肺癌组的灵敏度最高 ,为 85. 7% ,在肺部良性病变组的灵敏度为 2 9. 6 % ,TPS在肺癌各病理类型组的灵敏度无差异(P >0 .0 5 ) ,其特异性为 78 9%。CYFRA2 1- 1和CEA在肺癌的灵敏度分别为 2 7 .1%和 2 2 8% ,CYFRA2 1- 1在肺鳞癌中灵敏度最高 36 . 4 % ,CEA在肺腺癌中最高为 31 .6 %。TPS、NSE ,CYFRA2 1- 1和CEA三项联检 ,可明显提高肺癌诊断的灵敏度 ,但同时特异性有所下降。结论 :TPS在肺癌诊断上灵敏度较高 ,但特异性较差 ,不宜单独用于肺癌诊断。CYFRA2 1- 1和CEA在肺癌诊断上灵敏度较低 ,但特异性强 ,在肺癌诊?

急性白血病患者治疗前后骨髓中NK细胞活性和数量的对比研究

通过比较急性白血病患者治疗前后骨髓中NK细胞活性和数量的变化,探讨其在白血病治疗中的意义和白血病治疗的免疫学方法。用淋巴细胞分离液分离骨髓和外周血中单个核细胞,用MTT法测定NK细胞的活性,用流式细胞仪测定NK细胞的数量。结果显示:30例初发组白血病患者NK细胞活性[(13.52±5.82)%]和数量[(6.63±2.95)%]与缓解组NK细胞活性[(30.50±9.67)%]和数量[(13.57±4.48)%]相比均明显降低,两者存在统计学差异(P<0.01)。结论:急性白血病患者完全缓解后骨髓中NK细胞的活性和数量均明显提高。

HLA-DQA1等位基因与儿童过敏性紫癜的相关研究

目的 :研究过敏性紫癜 (AP)的发病机理是否有免疫遗传因素的参与。方法 :采用聚合酶链反应 -序列特异性引物分型技术 (PCR -SSP)对 70例内蒙古地区的儿童AP病人进行了HLA -DQA1等位基因型别分析 ,并与 90例正常儿童进行比较。结果 :发现病人HLA -DQA1 0 30 1等位基因频率较正常对照组明显升高 ,二者的频率分别为 2 7.9%和 10 .0 % ,经统计学检验差异有显著性 (p <0 .0 1,RR =5 .5 6 ,EF =0 .45 ) ;AP病人HLA -DQA1 0 30 2等位基因频率较正常对照组明显降低 ,二者的频率分别为 6 .4%和 17.2 % ,经统计学检验差异有显著性 (p <0 .0 1,RR =0 .2 8,EF =0 .2 6 )。 结论 :HLA -DQA1 0 30 1等位基因可能是AP易感基因 ;HLA -DQA1 0 30

蒙药那仁满都拉-11对鼠肿瘤细胞凋亡相关基因bcl-2的实验研究

目的:探讨那仁满都拉-11治疗肿瘤的分子机制。方法:利用Walker-256细胞株可成功地复制出肿瘤模型,用该蒙药治疗10d后取出瘤组织。用免疫组化方法测定凋亡相关基因bcl-2的蛋白表达情况。结果:与阴性对照组相比,治疗组bcl-2表达下调,且有显著性差异(P<0.05)。结论:那仁满都拉-11,有抑制肿瘤的作用,可能与bcl-2蛋白上调有关。

Walker-256腹水大鼠单个核细胞IFN-γ、IL-4基因表达研究

探讨Walker-256腹水型大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mono-nuclear cell PBMC)中Thl和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4基因表达水平,进一步了解恶性肿瘤机体免疫状态的变化。建立Walker-256腹水型大鼠模型,观察其生存状态。两周后分离PBMC,用RT-PCR法检测IL-4、IFN-γ的表达水平。结果表明,腹水大鼠IL-4基因表达水平较对照组升高(分别为0.48±0.06、0.33±0.04,p<0.05),而IFN-γ基因表达水平较对照组降低(分别为0.24±0.02、0.37±0.02,p<0.05)。结论为:腹水型肿瘤大鼠Th1/Th2平衡被打破,向Th2漂移,通过检测IL-4和IFN-γ基因表达可了解肿瘤机体免疫状态。

整合素与肿瘤侵袭和转移的研究进展

整合素(integrin)属于细胞黏附分子家族,研究发现整合素可以调节细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质(ECM)之间的黏附。然而不同整合素黏附作用也有明显不同,在肿瘤发生的不同阶段,整合素既可以抑制又可以促进肿瘤的侵袭和转移。本文就整合素的结构、分类、信号传导以及不同功能对肿瘤的侵袭和转移的影响做一综述。