医学免疫实验教学的学生创新人格培养探究

在医学教育教学工作的过程中,医学实验教学具有至关重要的作用。通过开展实验教学能够从侧面有效反映出学校的综合教学水平以及学校的教学质量。通过实验教学,能够有效提高学生的实践能力,并且可以使学生在学习理论知识的过程中充分的联系实践,进而巩固自己的理论知识。有效提高学生的动手能力以及学生的创新思维能力。本文主要针对医学免疫实验教学以及培养学生创新人格的重要性进行相关探讨。

蒙药森登-4对CIA大鼠CTLA-4/B7-1介导免疫炎症的初步研究

目的:研究森登-4对CIA大鼠CTLA-4/B7-1介导的免疫炎症的影响。方法:首先建立Wistar大鼠CIA模型,分为6组,观察大鼠关节HE病理改变,采用酶联免疫吸附分析法检测大鼠血清中IL-6、TGF-β、s CTLA-4、B7-1的水平,利用免疫组化法检测踝关节CTLA-4、B7-1的IOD值,评估CTLA-4、B7-1的表达情况。结果:各治疗组踝关节HE病理改变较模型组减轻。模型组IL-6和sCTLA-4水平较正常组显著升高(P<0.05);而模型组TGF-β和B7-1(sCD80)水平较正常组却显著降低(P<0.05)。经过3疗程治疗,各药物治疗组比模型组IL-6和sCTLA-4水平降低(P<0.05),其中降低最明显的是森登-4高剂量组和甲氨蝶呤组,而各药物治疗组TGF-β和B7-1(sCD80)的水平较模型组则升高(P<0.05),森登-4高剂量组和甲氨喋呤组升高尤为显著。3疗程结束后,对比CTLA-4 IOD值发现模型组较正常组显著降低(P<0.05);各治疗组CTLA-4 IOD值相比于模型组则显著升高(P<0.05),表达显著升高的是甲氨蝶呤组和森登-4高剂量组。与正常组相比,模型组的CD80 IOD值显著提升(P<0.05);与模型组相比,药物治疗组CD80 IOD值显著降低(P<0.05),森登-4高剂量组和甲氨蝶呤组降低最明显。结论:森登-4可能通过介导CTLA-4/B7-1相关免疫抑制反应缓解CIA大鼠关节炎反应,且与森登-4的剂量相关。

SCR7对三阴性乳腺癌顺铂化疗的增敏作用研究

目的:探讨SCR7对三阴性乳腺癌顺铂化疗的增敏作用。方法:选用三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞分为空白对照组、10μmol/L顺铂对照组和联合组(10μmol/L顺铂+10、20和40μmol/L SCR7),采用CCK-8法检测细胞活性并计算细胞增殖抑制率;取对数期TNBC MDA-MB-231细胞构建三阴性乳腺癌移植瘤小鼠模型,建模成功后荷瘤裸鼠随机分为对照组、SCR7组,顺铂组、SCR7+顺铂组;饲养24 d后,观察比较各组荷瘤鼠肿瘤质量、瘤体体积的变化,计算肿瘤抑制率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察瘤体组织细胞形态学变化;原位末端标记法(in situ end labeling,TUNEL)检测乳腺癌肿瘤组织的凋亡;采用Western blot检测X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)、多聚(ADP核糖)聚合酶1[poly(adp ribose) polymerase 1,PARP1]蛋白表达。结果:联合组细胞增殖抑制率均高于对照组(P<0.05),且随SCR7质量浓度增大呈逐渐升高趋势(P<0.05)。体内动物实验发现:相较于对照组,SCR7组、顺铂组、SCR7+顺铂组中的乳腺癌肿瘤体积、瘤重减小(P<0.05),其肿瘤抑制率分别是32%、40%、81%;SCR7+顺铂组较顺铂组减少更明显(P<0.05),且小鼠体质量与SCR7组、顺铂组相比无明显差异(P>0.05);HE染色观察干预组肿瘤组织均呈现明显形态学改变,其中SCR7+顺铂组肿瘤细胞退变变化最明显;TUNEL染色显示SCR7+顺铂组肿瘤细胞凋亡最为严重,可见大量红色细胞凋亡;Western blot检测发现,SCR7+顺铂组XRCC1、PARP1蛋白表达均明显低于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SCR7在体内外对三阴乳腺癌顺铂化疗均有增敏作用。

SLE病人T淋巴细胞亚群功能紊乱的研究

目的:对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)病人外周血T淋巴细胞表型CD 3+CD4+CD 8+进行检测,了解T细胞亚群在SLE的变化,同时测定主要由T辅助细胞(Th细胞)分泌的细胞因子:血清白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的水平,以探讨细胞因子的异常表达在SLE病人疾病中的作用。方法:用流式细胞仪分析SLE病人和健康对照组外周血T淋巴细胞表面抗原;采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SLE病人和健康对照组血清中IL-2和IL-6水平。结果:SLE病人CD 3+CD 4+细胞较正常对照组明显降低(P<0.01),CD 3+CD 8+细胞较正常对照组增加(P<0.05);SLE病人组CD 4+T/CD 8+T<1,CD 4+T细胞与CD 8+T细胞计数明显倒置,正常对照组CD 4+T/CD 8+T>1。SLE病人血清IL-2水平较正常对照组明显降低(P<0.01),血清IL-6水平较正常对照组增高(P<0.05)。结论:T细胞亚群水平及Th1/Th2平衡向Th2细胞占优势漂移对于SLE的发病及病情活动度的衡量有着重要的意义。

亚太地区抑癌基因p16及runx3甲基化与肝癌易感性关系的Meta分析

目的：应用Meta分析的方法评价亚太地区抑癌基Np16及runx3甲基化与肝癌易感性的关系。方法：检索1978。2014年在Medline、Pubmed数据库以及1994～2014年CNKI、中国生物医学文献数据库、万方和维普数据库收录的所有有关p16及runx3甲基化与肝癌研究的文献，并用Review Manager软件进行统计分析。结果：纳入国内外标准的文献共21篇，研究runx3基因的有8篇，研究p16基因的有13篇。数据合并结果显示，p16、runx3病例组与对照组甲基化的比值比（OR）分别为17．24和6．33，95％C1分别为（7．54-39．40）和（3．79-10．58）；经统计学分析差异都具统计学意义（P〈0．05）。结论：p16及runx3甲基化与肝癌发生有密切关系。

Cyclin E干扰RNA对人卵巢癌HO-8910细胞蛋白质组表达的影响

目的使用RNA干扰技术阻断人卵巢癌HO-8910细胞中Cyclin E的表达,分析Cyclin E表达受抑制后产生的一些效应,采用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质,探讨Cyclin E在人卵巢癌细胞增殖中的作用,以期为人卵巢癌发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法构建质粒表达载体pU6-Cyclin E-siRNA,同时设立阴性对照组和空白对照组。采用脂质体转染法稳定转染卵巢癌HO-8910细胞,G418筛选阳性克隆细胞;噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长曲线的改变;RT-PCR法比较转染前后Cyclin E mRNA的表达量的变化;双向凝胶电泳-图像分析-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后蛋白质组表达的变化,鉴定差异显著的蛋白点。结果 1)成功构建了Cyclin E干扰RNA的重组质粒并获得稳定转染组细胞HO-8910-Cyclin E siRNA。2)稳定转染组HO-8910-Cyclin E siRNA细胞与阴性对照组HO-8910-neo细胞和空白对照组相比,细胞生长速度减慢,Cyclin E mRNA表达水平降低。3)通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到稳定转染组低表达蛋白5个,经数据库搜索分别是锌指蛋白ZFP-36、波形蛋白、肿瘤拒绝抗原gp96、未知蛋白、DNA校正蛋白酶Ⅱ。结论Cyclin E干扰RNA干扰后卵巢癌HO-8910细胞Cyclin E基因的表达明显降低,细胞增殖能力减弱。差异表达的蛋白质参与细胞的增殖、细胞信号转导调节,并与肿瘤的发生、发展、诊断密切相关。

鼠诺如病毒感染免疫研究进展

人诺如病毒（Norovirus,NoV）是杯状病毒家族的成员,可引起以恶心、呕吐、腹痛和腹泻为主要临床症状的急性胃肠炎.NoV全球流行,可感染所有年龄阶段的人群,造成了严重的疾病负担.由于缺乏合适的小动物模型,人类对NoV的感染免疫和致病机理还缺乏了解.鼠诺如病毒（Murine norovirus,MNV）最初在免疫缺陷的小鼠中分离得到,在小鼠中可感染和流行,为研究NoV感染引发的宿主肠道免疫机制提供了替代模型.本研究从固有免疫和适应性免疫两方面来阐述.

我国鼠诺如病毒的分离培养及其基因组序列分析

目的分离我国鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)(命名SH1603),并进行基因组序列测定和分析。方法利用RAW264.7细胞分离MNV SH1603,参考国外已发表的MNV4(DQ223043)基因组序列设计引物,经重叠的反转录PCR扩增全基因组,利用生物信息学软件对全基因组序列进行分析。结果 MNV SH1603引起RAW264.7细胞病变,其基因组全长7 238个核苷酸,包括4个开放阅读框(open reading frames,ORF),预测的ORF1、ORF2、ORF3、ORF4编码蛋白大小分别为186 000、58 000、22 000和23 000,其中ORF1和ORF2之间有14个核苷酸重叠,ORF2和ORF3之间有1个核苷酸重叠,ORF4包含在ORF2中。NCBI Blast比对发现,SH1603基因组与MNV4同源性最高(94%)。衣壳蛋白区的进化分析发现,SH1603与MNV4(DQ223043)和Berlin0606(EF531291)亲缘关系最近。衣壳蛋白区氨基酸比对发现,SH1603与MNV4比较,有4个位点突变,分别为aa211S→A、aa358I→V、aa404E→L、aa534V→A。结论已分离到1株MNV,与国外报道的MNV4具有高度的进化亲源关系,为我国进一步研究MNV流行和致病机制奠定了基础。

人A组和B组鼻病毒3C蛋白表达、纯化及酶切活性验证

目的在大肠埃希菌中表达人A组和B组鼻病毒(rhinovirus,RV)3C蛋白,纯化后检测其酶切活性。方法分别将A组鼻病毒RV1B和B组鼻病毒RV6的3C蛋白编码基因克隆至原核表达载体p ET-30a中,构建重组原核表达质粒p ET-30a-1B-3C和p ET-30a-6-3C,转化至E.coli BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱纯化。利用具有3C蛋白酶切位点的15VP1-6P蛋白,分析不同温度(4和37℃)下3C蛋白的酶切活性。结果原核表达的目的蛋白为带His标签的可溶性蛋白,RV1B-3C蛋白相对分子质量约25 000,RV6-3C蛋白相对分子质量约23 000,纯度可达约70%。RV1B-3C和RV6-3C蛋白对15VP1-6P蛋白均具有酶切作用,而且在4和37℃均有酶切活性。结论在大肠埃希菌中成功表达了具有酶切活性的A组和B组鼻病毒3C蛋白,为进一步研究鼻病毒的致病机制奠定了基础。

聚肌苷酸胞苷酸在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活干扰素β荧光素酶报告基因系统实验条件的优化

目的优化不同长度聚肌苷酸胞苷酸[polyinosinic acid:polycytidylic acid,poly(I∶C)]在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活Ⅰ型干扰素(IFNβ)荧光素酶报告基因系统的实验条件。方法将质粒IFN-β-luc分别转染HEK293T及BEAS-2B细胞后,HEK293T细胞转染不同浓度(0.25、0.5、1.0、1.5和2.0μg/孔)的高分子量(HMW)poly(I∶C)和低分子量(LMW)poly(I∶C),检测其对HEK293T细胞中IFNβ启动子激活的影响;BEAS-2B细胞直接加入不同浓度(0.1、1.0、10.0、20.0和50.0μg/孔)及转染不同浓度(同HEK293T细胞)的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C),检测其对BEAS-2B细胞中IFNβ启动子激活的影响。结果 poly(I∶C)转染HEK293T细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.5μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)转染24 h。poly(I∶C)直接加入BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:50μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)作用6 h;poly(I∶C)转染BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.25μg/孔的HMW poly(I∶C)转染12 h,0.5μg/孔的LMW poly(I∶C)转染12 h。结论成功优化了poly(I∶C)在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活IFNβ启动子的实验条件,为poly(I∶C)激活免疫反应机制的研究提供了实验依据。

新型水包油佐剂SP01的安全性评价

目的通过动物实验评价新型水包油佐剂SP01的安全性。方法通过昆明小鼠安全药理试验、昆明小鼠急性毒性试验、Hartley豚鼠过敏反应试验、溶血性试验、日本大白兔局部刺激性试验、SD大鼠长期毒性试验及BALB/c小鼠致突变、致畸、致瘤试验,对水包油佐剂SP01的安全性进行全面评价。结果水包油佐剂SP01对昆明小鼠的自主活动无明显影响;急性毒性试验中可观察到水包油佐剂SP01组昆明小鼠给药后无死亡,体重明显增加,且各组织器官无病理变化;水包油佐剂SP01注射豚鼠未见任何过敏反应及症状;溶血性试验结果显示,水包油佐剂SP01在体外对兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚;将水包油佐剂SP01经日本大白兔耳缘静脉注射连续刺激5 d后,佐剂组与氯化钠注射液组家兔耳缘静脉给药部位肉眼观察均无明显变化,病理切片显微镜观察均未见炎性浸润、血管周围组织出血及坏死等刺激现象;将水包油佐剂SP01经肌肉连续注射大鼠1个月,佐剂组大鼠体重明显增加,精神状态、食欲、睡眠情况与氯化钠注射液组无明显差异,停药后连续观察3个月,大鼠精神状态、食欲、睡眠情况均良好;将水包油佐剂SP01连续经BALB/c小鼠腿部肌肉注射14 d后,其肌肉组织病理切片显示,与氯化钠注射液组小鼠的肌肉组织无明显差异。结论水包油佐剂SP01对实验动物无急性毒性、过敏反应、局部性刺激、长期毒性及致突变、致畸、致瘤作用,是安全、可应用的油类佐剂,本研究为该系列水包油佐剂的临床应用提供了实验依据。