整合素-β1、PKC与胶质瘤细胞骨架结构改变及侵袭性的实验研究

目的:探讨整合素β1(β1-integrin)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)与细胞骨架结构改变的关系及其对人脑胶质瘤细胞的生物学行为的影响和作用机制。方法:以U251胶质母细胞瘤细胞为研究模型,应用抗Inβ1抗体抑制内源性Inβ1作用,应用PKC激活剂PMA、PKC抑制剂Calphostin C干扰PKC的功能,通过细胞黏附实验、迁移实验和体外侵袭实验,检测及PKC对人恶性胶质瘤细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响。通过免疫荧光化学染色结合激光共聚焦显微镜和扫描电镜方法,观察细胞微丝F-actin和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等骨架蛋白数量、分布和细胞表面伪足情况,比较整合素β1、PKC对微丝、GFAP等骨架蛋白的影响。结果:PKC激活剂PMA增加U251MG细胞在FN上的黏附能力(P<0.05),但PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体对细胞黏附能力无明显影响。PKC激活剂PMA增加U251MG细胞在FN的运动、迁移能力(P<0.01),PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体减弱U251MG细胞在FN上的运动、迁移能力(P<0.01)。PMA可促进U251MG细胞的体外侵袭能力(P<0.01),Calphostin C及抗整合素β1抗体可减弱此作用(P<0.01)。U251MG细胞内可见散在的微丝结构,在PKC激活剂PMA处理的细胞内,难以见到清晰的细胞微丝骨架,并常见大量絮团状的F-actin小体,但对GFAP的表达和结构并无影响。PKC抑制剂Calphostin C使微丝沿细胞膜成簇状排列,而抗整合素β1抗体可使细胞内F-actin微丝形成束状纤维(应力纤维),粗壮而密集,且GFAP表达增强。扫描电镜观察显示,加入PMA后,U251细胞表面的伪足数量明显增加,而PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体处理的细胞内,伪足数量明显减少,甚至消失。结论:整合素β1与FN协同作用,可改变U251MG细胞微丝骨架结构、数量和排列分布,以及细胞表面伪足结构和数量,从而影响肿瘤细胞的运动、迁移及体外侵袭能力,激活PKC信号通路是其作用途径之一。PKC参与了FN介导的细胞黏附作用,但整合素β1受体与FN介导的细胞黏附关系不密切。PKC参与了整合素β1受体与FN相互作用所介导的细胞运动迁移及体外侵袭作用。

通心降脂滴丸对犬冠脉结扎后心肌组织保护作用研究

目的观察通心降脂滴丸对犬冠脉结扎后冠脉血流量及心肌组织病理学改变的影响,探讨其对犬冠脉结扎后心肌组织的保护作用。方法取健康比格犬25只,♀♂兼用。按体重随机分为5组,每组5只,分别为假手术组、缺血模型组、阳性对照组(复方丹参片)、通心降脂滴丸低剂量组和高剂量组,于手术前1周开始给药,每日给药1次。高剂量组给予通心降脂滴丸0.503 g·kg-1,低剂量组给予通心降脂滴丸0.182g·kg-1,阳性对照组给予复方丹参片0.38 4 g·kg-1,假手术组和缺血模型组给予等容积的生理盐水;第8日进行手术,分离冠状动脉左前降支根部,放置Triton超声多普勒血流探头,测定冠状动脉血流量(CBF),术后将心脏取出,用10%的甲醛固定,HE染色法染色,分析实验结果。结果通心降脂滴丸低剂量组在给药后60、90、120 min时能增加冠脉血流量,与缺血模型组比较冠脉血流量变化百分率差异均有统计学意义(P<0.05)。通心降脂滴丸高剂量组在给药后30、60、90、120 min时能增加冠脉血流量,与缺血模型组比较冠脉血流量变化百分率差异均有统计学意义(P<0.05)。与缺血模型组相比,通心降脂滴丸高剂量组和阳性对照组心肌细胞损伤程度较低,主要表现为灶状水肿或轻度弥漫水肿,未发现炎细胞。结论通心降脂滴丸对犬冠脉结扎所致心肌缺血具有一定的保护作用。

人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中端粒相关因子的表达

背景:端粒相关蛋白直接影响端粒的功能,调节端粒DNA的长度,与细胞的衰老和癌变密切相关。目的:通过观察正常细胞复制性衰老过程中端粒相关因子的变化来找寻细胞正常衰老过程中的关键调控分子。方法:在构建好的细胞复制性衰老模型基础上,利用RT-PCR与westernblot方法在分子与蛋白水平检测端粒相关因子的表达变化,主要检测人胚肺成纤维细胞在复制性衰老过程中端粒相关因子人端粒结合蛋白1、端锚聚合酶1、端粒酶RNA、端粒末端保护蛋白1以及P53的表达情况。结果与结论:结果显示,随着细胞的衰老,人端粒结合蛋白1的转录水平未发生改变,而人端粒结合蛋白1的蛋白表达水平有逐渐升高而后快速降低的过程;端锚聚合酶1的mRNA水平及蛋白表达水平未发生变化;端粒末端保护蛋白1随着人胚肺成纤维细胞的衰老表达水平逐渐降低;端粒酶RNA组分随着细胞的衰老呈递增趋势;P53的蛋白表达未发生变化。综上认为,人端粒结合蛋白1、端粒末端保护蛋白1及端粒酶RNA在细胞的复制性衰老过程中起重要作用。

骨髓造血微环境的研究进展

造血干细胞(HSCs)的微环境(Niche)是一类特化的结构,HSCs驻留在其内并受其调控。HSCs Niche主要由基质细胞和非细胞成分组成。目前,根据位置和功能不同可将HSCs Niche分为骨内膜HSCs Niche和血管HSCs Niche。研究表明骨内膜表面的细胞参与形成Niche,但不能肯定这些细胞确实参与构成了Niche,还是通过分泌HSCs相关细胞因子或生物大分子在骨内膜附近参与Niche的调控。血管及血管周围同样也可能具有Niche,因为大量的HSCs驻留其中。但随着研究的深入,科学家发现骨髓中可能存在非骨内膜Niche或脉管Niche的其他HSCs Niche。