山苦荬保肝活性部位筛选及其化学成分研究

目的:筛选山苦荬保肝活性部位并对其化学成分进行研究。方法:采用系统溶剂法,以70%乙醇对山苦荬药材进行提取,用不同溶剂对所得提取物进行萃取,分别得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位和剩余水部位。以对乙酰氨基酚诱导人肝细胞HL-7702复制肝损伤细胞模型,采用MTT法检测上述各部位(40μg/mL,均以生药量计)对损伤细胞的保护作用并筛选活性部位。采用硅胶柱、葡聚糖凝胶柱色谱等分离手段对活性部位进行分离纯化,根据理化性质和波谱(氢谱、碳谱)数据鉴定化合物结构。结果:经山苦荬不同萃取部位作用后,各药物组细胞的存活率均较模型组显著升高(P<0.01),其中正丁醇部位和水部位的活性最强(细胞存活率分别为49.3%、52.2%)。从正丁醇部位中共分离并鉴定出6个化合物,分别为苦荬菜木脂素A(Ⅰ)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(Ⅱ)、木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(Ⅲ)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)和木犀草素(Ⅵ)。结论:山苦荬正丁醇部位为该药材的保肝活性部位之一,其活性成分以黄酮类化合物为主。

协日嘎-4味散成分组成分析及6种成分含量测定

目的分析协日嘎-4味散成分组成,并测定黄柏碱、绿原酸、栀子苷、小檗碱、芦丁、姜黄素的含量。方法高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)定性分析采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.35 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。高效液相色谱串联三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)定量分析采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm);流动相甲醇-0.1%甲酸;体积流量0.25 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果共鉴定出65种成分,包括19种生物碱、13种有机酸、13种黄酮、7种姜黄素、6种环烯醚萜、4种脂肪酸、2种醛、1种氨基酸。6种成分在各自范围线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率96.44%~102.37%,RSD 2.05%~3.74%。结论本研究可为协日嘎-4味散的质量控制提供参考。

蒙药三子散醇提物化学成分的HPLC-Q-Exactive-MS快速分析与鉴定

目的系统研究三子散醇提物的化学组成,为阐明该方的药效物质基础提供参考。方法采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)技术进行分析。色谱条件:采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为40℃,进样量为10μL。质谱条件:采用电喷雾离子源,在正、负离子检测模式下检测。检测方式为Full MS/dd-MS^(2),Full MS分辨率为70000,dd-MS^(2)分辨率为17500,扫描范围为m/z 110~1200。通过与对照品、参考文献和自建数据库信息比对后对各离子峰进行鉴定。结果在蒙药三子散醇提物中共鉴定出化合物64个,包括9个黄酮类成分、13个环烯醚萜类成分、14个有机酸类成分、18个鞣质类成分、3个三萜类成分、3个氨基酸类成分和4个脂肪酸类成分。结论本研究发现蒙药三子散醇提物中主要含环烯醚萜类、鞣质类和黄酮类成分等,可能是三子散发挥药效的物质基础。

蒙药那如-3味的醇提工艺优化

目的:优化蒙药那如-3味的醇提工艺。方法:以苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、胡椒碱和没食子酸含量的综合评分为考察指标,料液比、乙醇体积分数、提取时间为考察因素,采用L9(34)正交实验设计优化蒙药那如-3味的醇提工艺。结果:最优醇提工艺为料液比1∶10(g/mL)、乙醇体积分数75%、提取时间1.5 h。经3次实验验证,那如-3味醇提物中上述8种成分的平均含量分别为1.69、1.48、14.69、0.28、0.05、0.08、26.01、17.33 mg/g(RSD为0-4.96%,n=3),平均综合评分为19.03分(RSD=1.42%,n=3)。结论:优化所得那如-3味醇提工艺稳定、可行。

基于HPLC-Q-Exactive MS的蒙药那如-3醇提物成分分析

目的:采用高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive MS)技术对蒙药那如-3醇提物成分进行分析,初步阐明其可能的药效物质基础。方法:色谱条件为Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,柱温为40℃,进样量为8μL。质谱分析采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式扫描,扫描范围m/z100~1 100;通过与对照品、参考文献和自建数据库信息比对后对各离子峰进行鉴定。结果:从蒙药那如-3醇提物中鉴定出91个成分,其中来源于制草乌的有39个,荜茇有14个,诃子有38个。结论:该研究全面、快速、准确地分析了蒙药那如-3醇提物的化学成分,为其药效物质基础和质量控制等研究奠定了基础。

HPLC-MS/MS法同时测定朱日亨滴丸醇提液中7种成分

目的建立HPLC-MS/MS法同时测定朱日亨滴丸(广枣、红花、栀子等)醇提液中没食子酸、羟基红花黄色素A、槲皮素、鞣花酸、西红花苷Ⅰ、山柰酚、栀子苷的含量。方法该药物的分析采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.25 mL/min;柱温35℃。采用电喷雾(ESI)离子源,在负离子模式下采集数据。结果7种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9993),平均加样回收率95.85%~104.20%,RSD 2.55%~5.90%。结论该方法简便、灵敏、高效,可用于朱日亨滴丸的质量控制。

诃子细粉混悬液对清醒Beagle犬心血管系统及体温的影响

目的观察单次灌胃给予诃子细粉混悬液后对清醒Beagle犬心血管系统及体温的影响。方法设溶媒对照组(0.5%CMC-Na)及诃子细粉混悬液低、中、高剂量组(0.08、0.36、1.6 g·kg^(-1)),选用6只Beagle犬,设4个给药周期,每两个给药周期间设7 d的洗脱期;使用植入式生理信号遥测系统(DSI),采集给药前1~2h及给药后24h清醒Beagle犬的心电、血压及体温参数。结果与溶媒对照组比较,诃子细粉混悬液低、中、高剂量组清醒Beagle犬心电、血压参数均未出现明显改变;低剂量组在给药后14h采集点体温出现具有统计学意义的降低(P <0.05),但与给药前比较差异无统计学意义,随后恢复正常;诃子细粉混悬液中、高剂量组与溶媒对照组比较差异无统计学意义。结论本实验条件下,诃子细粉混悬液在0.08~1.6 g·kg^(-1)给药剂量内对清醒Beagle犬心电、血压及体温无明显影响。

朱日很滴丸对动脉粥样硬化模型兔MMP-9表达量的影响

目的研究朱日很滴丸对动脉粥样硬化模型兔基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达量的影响。方法1.采用高脂饲料+牛血清白蛋白(250 mg·kg-1)对日本大耳白兔进行造模,第8周造模成功后,朱日很滴丸低、中和高剂量组分别灌胃朱日很滴丸溶液116,367和1160 mg·kg-1,普罗布考组灌胃普罗布考溶液26 mg·kg-1,每日1次,连续4周。实验期间,溶媒对照组给予普通饲料,其余组结予高脂饲料。实验结束后采集各组兔血清及主动脉,通过Elisa法和免疫组化法(IHC-P)测定朱日很滴丸对动脉粥样硬化模型兔血清和主动脉MMP-9表达量的影响;2.将氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共同孵育,建立内皮细胞损伤模型,加入朱日很滴丸含药血清进行干预。通过实时荧光定量PCR法(qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测朱日很滴丸含药血清对内皮细胞氧化损伤模型中MMP-9的mRNA水平和蛋白含量的影响。结果与模型组相比,朱日很滴丸低、中和高剂量组兔血清与主动脉斑块中MMP-9表达量均显著下降,经朱日很滴丸低、中和高剂量含药血清处理的细胞中MMP-9的mRNA水平和蛋白含量均显著下降。结论朱日很滴丸可降低动脉粥样硬化模型兔MMP-9的表达量,具有临床应用价值。

扎冲十三挥发油提取包合工艺优化试验

目的优选扎冲十三挥发油的提取及β-环糊精包合的最佳工艺。方法以挥发油的提取量为考察指标,采用正交试验优选挥发油提取工艺;以挥发油包合率、收得率为考察指标,优选β-环糊精包合工艺。结果最佳提取工艺:加5倍量的水,浸泡1 h,提取6 h;最佳包合工艺:采用超声波法,挥发油与β-环糊精的用量比为1∶10,挥发油与乙醇的用量比为1∶6,超声45 min。结论优选的挥发油提取与包合工艺稳定、可行。

苦苣菜药材细粉混悬液安全药理学研究

目的观察苦苣菜细粉混悬液对实验动物中枢神经系统和心血管系统的影响,为进一步临床研究和安全用药提供依据。方法ICR小鼠单次灌胃给予0.13,0.39,1.17 g·kg^(−1)苦苣菜细粉混悬液,SD大鼠单次灌胃给予0.09,0.27,0.81 g·kg^(−1)苦苣菜细粉混悬液,通过小鼠自主活动试验、协调催眠试验和大鼠转棒试验,考察苦苣菜细粉混悬液对中枢神经系统的影响。Beagle犬单次灌胃给予0.03,0.09,0.27 g·kg^(−1)苦苣菜细粉混悬液,通过检测清醒Beagle犬心电、血压和体温,考察苦苣菜细粉混悬液对心血管系统和体温的影响。结果苦苣菜细粉混悬液对实验动物自主活动行为、协调功能和戊巴比妥钠阈下睡眠剂量小鼠入睡率无明显影响;对Beagle比格犬的心电、血压、体温均无明显影响。结论本实验条件下,单次灌胃给予苦苣菜细粉混悬液对Beagle犬心血管系统和ICR小鼠、SD大鼠中枢神经系统无明显影响。

三脂清中7种成分的含量测定及醇提工艺优化

目的采用HPLC-MS/MS同时测定蒙药三脂清中胡椒碱、荜茇宁、柯里拉京、没食子酸、鞣花酸、槲皮素、芦丁的含量,并优化三脂清的醇提工艺。方法采用Shim-pack GIST-HP C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为0.25 mL·min^(-1),进样量2μL;质谱采用电喷雾离子源,正、负离子扫描切换,多重反应监测模式进行定量分析。采用L_(9)(3^(4))正交试验设计,以上述7种成分含量的综合评分为考察指标,以料液比、乙醇浓度、提取时间、提取次数为考察因素进行三脂清醇提工艺优化。结果三脂清中7种成分的峰面积和质量浓度在一定范围内均呈现良好的线性关系(r≥0.9991),仪器精密度、重复性、稳定性试验的RSD均<5%;加样回收率为99.54%~105.32%,RSD为1.39%~4.33%。最佳醇提工艺条件为料液比1∶8,乙醇浓度40%,提取时间0.5 h,提取3次。3次放大试验验证结果显示,上述7种成分的平均含量分别为9.852,0.587,16.247,3.657,8.663,0.119,0.104 mg·g^(-1)。结论建立的方法简便、灵敏、高效,可用于三脂清中多种主要活性成分的含量测定;优化所得的醇提取工艺稳定、可行。

ZnO@ZnFe2O4乳膏的制备工艺及皮肤用药安全性评价

目的研究ZnO@ZnFe2O4乳膏的制备工艺及皮肤用药的安全性。方法采用正交试验方法优选ZnO@ZnFe2O4乳膏的成型工艺;采用Buehler试验,观察豚鼠皮肤接触ZnO@ZnFe2O4乳膏后的过敏情况;将ZnO@ZnFe2O4乳膏单次或多次涂于新西兰兔完整及破损皮肤处,观察药物对皮肤的刺激情况;新西兰兔皮肤单次给药观察药物的急性毒性。结果 ZnO@ZnFe2O4乳膏的最佳工艺条件:乳化剂的用量为6%,乳化时间为20 min,搅拌速度为1 600 r·min^-1,乳化温度为80℃;采用最佳工艺制备的ZnO@ZnFe2O4乳膏对豚鼠皮肤未产生致敏反应,对兔皮肤未产生刺激性,对兔皮肤未引起急性毒性反应。结论 ZnO@ZnFe2O4乳膏经皮给药安全可靠。

朱日很滴丸含药血清对ox-LDL损伤的HUVEC转录因子Nrf2核转位的影响

目的:研究朱日很滴丸含药血清对经ox-LDL损伤的HUVEC的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:将氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,建立内皮细胞损伤模型,加入朱日很滴丸含药血清进行干预。MTS法检测朱日很滴丸含药血清对氧化损伤内皮细胞的活性影响;实时荧光定量PCR法(qPCR)和蛋白免疫印迹法(Westorn blot)检测朱日很滴丸含药血清对内皮细胞氧化损伤模型中Nrf2的mRNA水平和蛋白表达的影响;细胞免疫荧光法检测HUVEC中Nrf2蛋白的核转位情况。结果:与空白对照组比较,模型组、溶媒对照血清组细胞存活率明显降低,Nrf2 mRNA及蛋白表达明显下调,核质比明显降低。与溶媒对照血清组相比,朱日很滴丸各剂量20%含药血清组可提高氧化损伤的内皮细胞的活性,Nrf2的mRNA水平和蛋白表达明显上调,朱日很滴丸0.79 g/kg组20%含药血清,Nrf2蛋白的核、质比明显增加;20%含药血清各剂量组细胞核中Nrf2荧光强度明显增强,且有剂量依赖性。结论:朱日很滴丸可明显降低HUVEC的氧化应激损伤,其作用机制可能与促进转录因子Nrf2核转位有关。