内蒙古大学实验动物研究中心简介

内蒙古大学实验动物研究中心简介内蒙古大学实验动物研究中心成立于１９８６年，是由旭日干博士归国后主持筹建，在内蒙古政府和科委等领导支持下建成的。是目前内蒙古自治区唯一的一所把实验动物科学与繁殖生物学新技术相结合的科研教学基地。一、研究中心的基本建设与设...

内蒙古大学牛、羊体外受精技术研究的发展历史及现状

内蒙古大学多年来在牛、羊体外受精技术的研究及应用方面取得了一系列研究成果,在此基础上相关研究领域得到了进一步发展,建成了哺乳动物生殖生物学及生物技术学科群,形成了自身的研究特色和优势.本文回顾、总结了该研究领域的创立过程、发展进程及现状,同时梳理了主要研究成果.

精子载体法转基因动物研究进展

精子作为基因的载体制作转基因动物 ,以其简单、高效和广泛适用等特点而吸引众多的研究小组在不同水平上进行研究 .本文就四个方面 :不同种动物精子与 DNA结合的研究 ;精子与 DNA结合的调控机制 ;与精子结合的 DNA的定位及去向 ;利用精子载体法制作转基因动物的研究 ,对他们的研究加以系统综述 .

蒙古绵羊ghrelin cDNA的克隆及序列分析

根据GenBank中报道的绵羊ghrelin序列设计一对特异性引物,以蒙古绵羊真胃组织中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出蒙古绵羊ghrelin的cDNA,并克隆到pTZ19载体中,经限制性内切酶谱和DNA序列测定,证实所克隆的蒙古绵羊ghrelin的cDNA为ghrelin的部分序列,因为用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊ghrelin序列进行对比,205个碱基中仅有1个碱基的差异,该差异不影响翻译后多肽的序列。该段cDNA包含由168个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码56个氨基酸残基的前原蒙古绵羊ghrelin。对蒙古绵羊ghrelin的研究将有助于进一步揭示其生理和病理功能,对反刍动物多种疾病过程的认识及防治策略具有深远意义。

实验小鼠寄生虫感染监测

对内蒙古大学实验动物研究中心的四个品系小鼠进行了寄生虫感染监测，结果检获６种寄生虫．分别为：四翼无刺线虫（Ａｓｐｉｃｕｌｕｒｉｓｔｅｔｒａｐｔｅｒａ）、隐藏管状线虫（Ｓｙｐｈａｃｉａｏｂｖｅｌａｔａ）、鼠蝇疥螨（Ｍｙｏｃｏｐｔｅｓｍｕｓｃｕｌｉｎｕｓ）、鼠肉螨（Ｍｙｏｂｉａｍｕｓｃｕｌｉ）、拟拉德弗螨（Ｒａｄｆｏｒｄｉａａｆｆｉｎｉｓ）、罗氏住毛螨（Ｔｒｉｃｈｏｅｃｉｕｓｒｏｍｂｏｕｔｓｉ），寄生虫的感染率为１００％．且所有被检小鼠均有两种以上的寄生虫感染，其感染强度也较高．就小鼠年龄、品系、性别等与寄生虫种类及感染的关系进行了讨论与分析，为防治寄生虫感染提供参考．

哺乳类动物精子的获能和顶体反应

介绍了在生殖过程中的2个重要的生理变化——获能和顶体反应，并综述了最近几年来在生殖生物学领域关于获能与顶体反应机制方面的最新成果。结果显示cAMP、Ca2＋、 咖啡因等因素对精子获能有促进作用，ZP3、Ca2＋、cAMP、肝素等因素对顶体反应有促进作用。所有研究成果表明，精子的获能和顶体反应与精子膜的生理变化有着密切关系。

动物克隆技术研究的新热点──转基因克隆动物

克隆动物技术和转基因动物技术是目前动物生物技术领域研究的两大热点，然而就目前的研究现状来看，无论是克隆技术还是转基因动物技术其推广应用都遇到了困难。转基因克隆动物技术将二者有机地结合起来，实现了高效率、低成本的转基因动物制作，因而成为当前动物生物技术领域研究的新热点，有望成为创建遗传工程动物的主导性技术。

Wistar-Imamichi大鼠的引种、保种与扩大繁殖的研究 Ⅰ.引种动物育成期生长发育情况及4日稳定性周期出现日龄的观察

着重观察了引种的Wistar—Imamichi大鼠育成期的生长发育情况及4日稳定性周期的出现日龄,并与日本动物繁殖研究所的原种作了比较。结果表明引种鼠的生长发育情况良好。雌鼠4～10周龄,雄鼠6～12周龄的每周平均增重量与原种的同期相比均无显著差异;雌鼠的4日稳定性周期出现於39～55日龄,其中70%(14/20)分布於40～50日龄之间。与原种相同时期的93.3%(14/15)相比无显著差异。

干细胞因子及其受体系统在哺乳动物生殖细胞发育过程中的作用

干细胞因子(Stemcellfactor,SCF)及其受体(c-kit)自1990年被发现以来,已经逐渐受到科学工作者的重视。现在,对干细胞因子及其受体的研究,特别是该系统在发育调控中的作用,已成为研究的热点。笔者就SCF、c-kit系统在哺乳动物生殖细胞发育中的作用及研究现状作以简要的综述。

绵羊小腔卵泡卵母细胞的分离及相关实验

用绵羊小腔卵泡及小腔卵泡卵母细胞进行了一系列实验,获得小腔卵泡及小腔卵泡卵母细胞生发泡的有效分离方法.结果显示,常规的卵母细胞脱水收缩方法、离心方法、其它卵母细胞的电融合方法均不适用于小腔卵泡卵母细胞.

核移植克隆哺乳动物的研究进展

对核移植的基本操作程序、细胞周期及受体卵质重编程序能力， 对核移植克隆哺乳动物效率的影响，以及哺乳动物体细胞克隆技术进展进行了系统综述。

精子载体法制作转基因动物的可行性

精子载体法转基因由于具有简便易行、对卵原核无损伤等特点,而成为最具诱惑力的转基因方法之一。近年来,已经通过该方法获得了多种转基因动物,从而对精子载体法制作转基因动物的可行性提供了证据。笔者对精子载体法的可行性、机制、提高转基因效率等方面作了简要综述。

关于哺乳类动物精子获能的研究进展

综述了实验动物、家畜、人类精子的获能处理和精子获能机制。

屠宰母牛卵巢卵母细胞体外受精与发育的研究

将从屠宰母牛卵巢采得的卵母细胞用含有LH或hCG的M199培养24～26小时,然后用经钙离子载体Ionophore A23187诱导获能的牛新鲜或冷冻精子进行授精处理。授精6～7小时后再用含有乳酸钠和EDTA的M199培养至48～60小时后观察受精及受精卵的发育情况。结果表明,卵子的受精率及受精卵的发育率与卵母细胞成熟用培养基、授精用精子(新鲜或冷冻)以及供卵牛的品种均有关系。将用含有hCG的M199培养成熟的卵子,以获能处理过的新鲜精子授精后,其受精率和受精卵子中单精子受精并发育为2～8细胞期胚的比率在蒙古牛为91.4％(265/200)和19.6％(52/265),在黑白花奶牛为69.7％(62/89)和4.8％(3/62)。

蔗糖、牛血清白蛋白和锌离子对白绒山羊精液冷冻效果的影响

在传统的甘油—卵黄—柠檬酸盐稀释液的基础上，Ｂ液内分别添加了３种浓度的蔗糖、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、锌离子进行分析比较。结果表明，添加蔗糖的保护液较传统的保护液能更有效地冻存精液，１００ｍＭ组精子活力显著提高（Ｐ＜０．０５）。ＢＳＡ和锌离子对精液冻存无显著影响（Ｐ＞０．０５），但都具有一定的保护作用。改良稀释液的精子活力比传统稀释液的提高３２．７％（Ｐ＜０．０１）。细管精液的冻存效果显著高于颗粒精液（Ｐ＜０．０５）。用最佳组合的细管精液对１２５只母羊进行人工授精，情期受胎率为６３．１％。

屠宰母牛卵巢卵母细胞的体外受精与早期发生

将采自屠宰母牛卵巢的未成熟卵子在含有促性腺激素和牛血清的TCM199或Ham'sF10内培养成熟后,再用以钙离子载体Ionophore A23187诱导获能的牛新鲜或冷冻精子进行授精处理,6～7小时后移入发育用培养液,即含有牛血清及丙酮酸钠的M199或Ham's F10内继续培养。在授精48小时及60～96小时后分别统计了培养卵子的受精率及受精卵的卵裂率。在部分实验中把发育为4～8细胞期的胚移入经假孕处理过的母兔输印管内培养4～5天或者在原发育培养液内继续培养5～8天之后观察了桑椹胚、囊胚的出现率。结果是培养卵子的受精率及受精卵的卵裂率分别达92.0～97.8％和62.5～67.6％,移入兔输卵管内和在体外条件下继续培养的卵子中分别有3.7～30.8％和4.3～31.0％(发育为外形正常的桑椹胚～囊胚期胚胎(包括扩张囊■及■化囊胚)。

脂质体介导外源基因体外转染牛胎儿成纤维细胞条件的优化

通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。

牛卵母细胞皮层颗粒荧光染色法质成熟鉴定

以皮层颗粒 (CG)单层分布于质膜下做为卵母细胞质成熟的指标 ,利用CG荧光染色法 ,研究了不同类型牛卵母细胞的质成熟情况。结果表明 :(1)采自直径大于 5mm、2～ 5mm和小于 2mm卵泡的卵母细胞 ,成熟培养前的质成熟率分别为 4 2 %、1 8%和 0 ,三者间无显著差异。但所有的大卵泡卵以及 95 2 %的中卵泡卵 ,CG已分布于皮层 ,而小卵泡卵中则有 51 7%的卵子 ,CG尚未迁移至皮质区 ,仍以簇的形式分布于细胞质的中间。经 2 4h成熟培养后 ,三类卵子的质成熟率分别达到 54 5%、2 8 6 %、和 7 1% ,三者间存在显著差异 (P <0 0 5)。小卵泡卵内的CG趋向于聚集成更大的簇 ,并向皮质区迁移。 (2 )根据卵丘细胞情况而分的四类卵母细胞 :A(带有 5层以上致密卵丘细胞 )、B(带有 3～ 5层致密卵丘细胞 )、C(裸卵或半裸卵 )和D(卵丘细胞已扩散成蜘蛛网状 ) ,成熟培养前的质成熟率分别为 4 3%、0、0和 2 8 0 % ,第四者显著高于前三者 (P <0 0 1)。成熟培养后 ,A、B类卵子的质成熟率 (2 3 1%和 10 8% )显著低于D类卵子 (88 2 % ) (P <0 0 1)。裸卵表现为完全缺乏CG或形态异常。 (3)采卵结果表明 ,大、中、小卵泡卵中 ,A类卵子所占的比例依次减少 (97 7%、56 3%和 18 4 % ) ,B类卵子依次增多 (2 3%、36 6 %和 52 0 % )。

山羊手术法胚胎移植对供受体母羊重复使用的影响

采用手术法对白绒山羊进行胚胎移植，探讨手术对供受体母羊重复使用的影响．结果：１９９１～１９９４年４年中，用于第１、２、３、４次超排（ＦＳＨ＋ＬＨ）的有效供体母羊数为９１只、４３只、７只和２只，手术取胚的胚胎回收率分别为７０．１％、８２．７％、７９．６％和６３．６％．供体母羊手术取胚后，在下１～２情期中发情时进行人工授精，用于第１、２、３、４次手术后人工授精的所有组合的供体母羊数为１３６只、５９只、１６只和３只，分娩率分别为５２．２％、３７．３％、４６．７％和６６．７％．用于第１、２、３、４次手术移植的受体母羊数为２４４只、８５只、４５只和９只，移胚后分娩率分别为６８．４％、６１．２％、６４．４％和３３．３％．经统计学检验表明：手术次数对供体母羊超排后的胚胎回收率及其术后１～２情期中人工授精的妊娠分娩率无影响．受体母羊第１、２、３次手术移胚的分娩率之间无差异，但显著高于第４次手术受体母羊的分娩率（Ｐ＜０．０５）．

绵羊体外成熟、体外受精卵的体外发育及移植后的产羔

体外成熟、体外受精后的绵羊卵在体外长期培养或在2～4细胞期和桑堪～囊胚期移植给受体母羊,观察了培养卵的发育和移植后的受胎率。方法是将采自屠宰场的绵羊卵巢在1～12小时内带回实验室,抽取卵母细胞。从中选取卵丘细胞层完整的卵子,在二氧化碳培养箱内,用含有10％NSS(或FCS)、hCG和E_2,并以Hepes缓冲的M199培养24～26小时。再用以IonophoreA23187诱导获能处理过的新鲜公羊精于进行体外受精.7～10小时后移入发育培养基,即含有10％FCS(或NSS)和丙酮酸钠的Hepes缓冲的M199内继续培养,受精后将部分发育为2～4细胞胚和桑堪～囊胚期胚手术移植给受体母羊。另一部分卵子则在受精后48～72小时的不同时间内统计其卵裂卵的出现率,并继续培养7～12天详细观察卵裂卵的发育情况。在受精后48～72小时卵裂卵的出现率,FCS和NSS组分别为39.6％145/366)和52.4％(182/347),前者显著低于后者;将61枚2～4细胞期胚和桑椹～囊胚期胚分别移植给20只受体母羊,有10只受胎。共产羔11只,受胎率为50％;在发育培养液内继续培养的482枚卵裂卵中有312枚(64.7％)发育为桑椹～囊胚期胚(其中包括部分孵化囊胚)。