奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌MrkD基因的原核表达及对乳腺上皮细胞黏附的研究

为探究奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌(K.pn)黏附素MrkD蛋白对K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞的影响以及黏附素抗血清对阻断K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞的效果,本研究利用PCR扩增了K.pn MrkD基因,构建重组质粒pColdI-MrkD,将其转化至大肠杆菌后诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot鉴定。结果显示,MrkD重组蛋白以可溶性形式表达,并具有较好的反应原性。将牛乳腺上皮细胞与1×10^(8)cfu/mL K.pn稀释液共同孵育后,利用间接免疫荧光试验检测K.pn对奶牛乳腺上皮细胞的黏附,结果显示K.pn可以黏附奶牛乳腺上皮细胞。利用K.pn稀释液孵育经不同浓度MrkD重组蛋白作用的奶牛乳腺上皮细胞后,通过对黏附细菌数的统计和分析,结果表明MrkD重组蛋白可以显著抑制K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞。利用MrkD重组蛋白抗血清和K.pn抗血清分别与K.pn作用后计数黏附的奶牛乳腺上皮细胞,结果显示,MrkD重组蛋白抗血清与K.pn抗血清均能有效阻断K.pn的黏附,且重组蛋白抗血清效果较好。本研究获得了MrkD重组蛋白,首次检测了其在K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞中的影响以及该重组蛋白抗血清在阻断K.pn黏附细胞中的作用,为探究阻断细菌黏附以及奶牛乳房炎亚单位疫苗的研究奠定基础。

牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定

本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-G,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。

乌拉特荒漠草原啮齿动物群落特征及物种空间生态位

2019年7~8月,在乌拉特前旗荒漠草原区设置9个样地,对啮齿动物群落结构和物种空间生态位进行研究,共布放有效铗日2700个,捕获啮齿动物六种。采用样地-捕获率系统聚类方法结合生境分析,将乌拉特荒漠草原啮齿类动物划分为3个群落(五趾跳鼠+子午沙鼠群落、小毛足鼠+子午沙鼠+三趾跳鼠群落、子午沙鼠+小毛足鼠群落),各群落多样性指数偏低、均匀性指数较高。子午沙鼠、三趾跳鼠和五趾跳鼠的空间生态位宽度指数较高。对每两种啮齿动物之间的生态位重叠进行分析,15个种对组合中有8个种对的生态位重叠度指数均较高。研究区域内子午沙鼠、三趾跳鼠和五趾跳鼠对栖息地不同的资源利用较为充分,短耳仓鼠对资源等级的利用方式单一;大部分鼠种对其所栖息的环境中的资源利用方式趋于一致,并存在一定的空间竞争。

羊传染性脓疱病临床诊断及防治

羊传染性脓疱病的发生与饲养管理有密切联系。羊群进食的粗饲料质量较差,适口性不足会导致羊口腔粘膜遭受到损伤,为该种病毒侵入提供条件。羊群感染该种疾病后,虽然不会出现严重的死亡现象,但会严重影响羊的正常采食,导致饲料利用率下降,饲料成本支出增加,给养殖户带来严重的经济损失。该文主要结合一起实际案例,介绍羊传染性脓疱病的临床诊断和治疗措施,以降低该病的发病率。