熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用研究

目的研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用,为其凉开法治疗特点及临床推广应用提供实验数据。方法采用特异性基因敲除小鼠结合高脂饮食复制动脉粥样硬化动物模型,灌服熊胆粉水溶液,并以麝香通心滴丸全方水溶液及全方去熊胆粉水溶液为对照,通过HE染色、油红O染色及Masson’s Trichrome染色,观察对主动脉及主动脉根动脉粥样硬化斑块形成的干预作用。生化法测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平。结果与正常组对比,模型组斑块损伤面积显著增加(P<0.01),血清TG、TC和LDL均显著升高(P<0.01),HDL明显下降(P<0.01);与模型组对比,各给药组斑块损伤面积均显著减小(P<0.05),全方组作用优于去熊胆粉组。各给药组与模型组对比,血清TG、TC均显著下降(P<0.01),HDL明显上升(P<0.01),全方组作用优于去熊胆粉组,此外,熊胆粉组降低LDL作用显著(P<0.01)。结论熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化作用中具有突出的贡献,特别是在降低LDL作用中贡献显著。

基于血清药物化学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的机制

目的基于血清药物化学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的机制。方法采用HPLC-Q-TOF/MS联用技术分析麝香通心滴丸的入血成分。条件为Hydro-RP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,4μm);流动相0.4%甲酸乙腈-0.2%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.3 mL/min;进样量10μL。利用PharmMapper服务器、GeneCards数据库预测和筛选麝香通心滴丸入血成分治疗冠心病的作用靶点,String数据库绘制蛋白相互作用网络,Cytoscape软件构建成分-疾病-靶点网络图,借助David数据库对靶点进行GO分析和KEGG通路分析,使用Autodock Vina软件对入血成分和核心靶点进行分子对接。结果共得到8种入血成分,涉及134个交集靶点,可能通过ErbB signaling pathway、VEGF signaling pathway、PPAR signaling pathway等信号通路治疗冠心病,且分子对接显示入血成分与核心靶点结合性较好。结论麝香通心滴丸8种入血成分可能是其治疗冠心病的物质基础,可为深入阐明该制剂作用机制提供一定的依据。

基于HPLC特征图谱结合化学计量学的麝香通心滴丸质量研究

目的:建立麝香通心滴丸的特征图谱,为其质量标准提升提供理论基础。方法:采用SynergiTM Hydro-RP 80A C18(250 mm×4.6 mm,4μm)色谱柱,以含0.02%磷酸的乙腈-0.02%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;柱温为30℃;检测波长为220 nm;流速为1.3 mL/min,建立麝香通心滴丸特征图谱,采用HPLC-DAD-Q-TOF(MS/MS)法及对照品比对指认共有峰,利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)"、SPSS 25.0及SMICA-P 13.0软件,进行相似度评价、聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析。结果:建立了麝香通心滴丸的特征图谱,确立了10个共有峰。15批麝香通心滴丸指纹图谱与对照图谱的相似度均>0.900,聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析结果表明15批样品均可分为3类。结论:该方法简单准确,可用于麝香通心滴丸质量的综合评价。

熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用机制研究

目的研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化的作用机制,为麝香通心滴丸"凉开"法治疗动脉粥样硬化性疾病提供科学依据。方法采用ApoE^(-/-)基因敲除小鼠结合高脂饮食复制动脉粥样硬化动物模型,30只小鼠按体重用随机数字表法分为模型组(9只),麝香通心滴丸组(复方组,7只),麝香通心滴丸去熊胆粉组(拆方组,7只),熊胆粉组(7只);另取9只雄性同龄C57BL/6J小鼠设为正常对照组。复方组、拆方组和熊胆粉组分别给予对应药物(30、30、0.33 mg/kg)灌胃,模型和正常对照组予生理盐水灌胃,连续8周。E LISA法检测血清IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)及氧化性低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)含量;采用生化法测定血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。二氢乙啶(dihydroethidum,DHE)荧光探针探测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;Real-time PCR检测主动脉miR-20、miR-21、miR-126及miR-155表达。结果模型组小鼠主动脉荧光强度明显增强,复方组、拆方组和熊胆粉组荧光强度明显减弱,以复方组减弱的最为明显。与正常组比较,模型组小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、oxLDL和MDA均升高(P<0.01),GSH和SOD下降(P<0.01),主动脉miR-126、miR-21及miR-1 55表达上升(P<0.01),miR-20表达下降(P<0.01)。与模型组比较,复方组、拆方组和熊胆粉组血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、oxLDL及MDA下降(P<0.01),GSH和SOD上升(P<0.01),主动脉miR-126、miR-21、miR-155表达下调(P<0.01),复方组和熊胆粉组miR-20表达上调(P<O.01)。与复方组比较,拆方组和熊胆粉组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ水平升高(P<0.01);拆方组和熊胆粉组GSH和SOD下降(P<0.01),MDA和oxLDL上升(P<0.01);拆方组与熊胆粉组miR-20和miR-155表达下调(P<0.01)。结论麝香通心滴丸具有显著调节血清炎症因子、氧化应激因子的作用,其作用机制可能与其调控主动脉miR-126、miR-21、miR-1 55及miR-20的表达相关,熊胆粉在全方的调节作用中发挥了重要作用。

蟾酥原浆HPLC指纹图谱建立及8种成分含量测定

目的建立蟾酥原浆HPLC指纹图谱及原浆中8种成分含量测定方法,对不同产地蟾酥原浆进行成分含量差异比较,同时进行质量评价。方法以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长296 nm,体积流量1.2 m L/min,柱温30℃,进样量10μL;建立蟾酥原浆指纹图谱,测定8个成分含量,对结果进行聚类分析和主成分分析。结果 18批样品指纹图谱中有12个共有峰,各样品相似度有所差异,8个成分在各自范围内线性关系良好(r2≥0.999 5),精密度、重复性RSD<0.5%,在30 h内稳定性较好(RSD<0.7%),日蟾毒它灵、沙蟾毒精、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基回收率平均值分别为103.7%、103.0%、102.9%、103.0%、103.9%、100.3%、103.4%、103.2%,且RSD均小于1.2%,8个成分含量测定结果及聚类分析和主成分分析结果可知不同产地原浆质量有所差异。结论该方法简便可靠,为蟾酥原浆质量把控提供一定依据及参考。

GC同时测定麝香通心滴丸中龙脑、异龙脑和麝香酮的含量

目的建立同时测定麝香通心滴丸中龙脑、异龙脑及麝香酮含量的气相色谱法。方法采用HP-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm,0.25μm),检测器为FID检测器,检测器温度为250℃,进样口温度220℃。柱温以100℃为初始温度,保持2 min,以2℃·min-1升温至110℃,保持3 min,以50℃·min-1升温至205℃,保持7 min,以20℃·min-1升温至250℃,保持2 min;载气为氮气,流速为1 mL·min-1;进样方式为分流进样,分流比为10∶1;进样量为1μL,以萘为内标。结果龙脑、异龙脑、麝香酮的浓度分别在0.054 68~0.437 4 mg·mL-1(r=0.999 9),0.070 67~0.565 4 mg·mL-1(r=0.999 9),0.004 512~0.036 10 mg·mL-1(r=0.999 7)内线性良好;平均回收率分别为97.91%(RSD=2.05%),100.79%(RSD=2.78%),105.36%(RSD=3.78%)。结论该方法有效可靠,可用于麝香通心滴丸中龙脑、异龙脑和麝香酮的含量测定。