肠道菌群和黏膜免疫与心血管疾病关系研究新进展

心血管病是目前导致死亡的主要原因之一。引起心血管疾病的主要发生机制是免疫性炎症。肠道菌群与黏膜免疫相互作用,同心血管系统生理功能维持和疾病发生关系密切。肠道菌群失调会导致血管炎、高血压和动脉粥样硬化的发生及心衰的加重。深入了解肠道菌群、黏膜免疫和心血管疾病之间的相互作用机制,可为心血管疾病防治开创新思路。

蜱传人兽共患无形体科属病原体研究

无形体属的病原体不仅能造成动物的感染,还会对人进行感染甚至致病,嗜吞噬细胞无形体(A.phagocytophilum)引起的疾病被称为人粒细胞无形体病(Human Granulocytic Anaplasmosis,HGA)。HGA对中性粒细胞产生侵犯,致使感染者在临床表现出发热、血小板下降、白细胞下降以及多脏器功能损伤等症状,严重时可以致死。根据国内外已报道的文献,对立克次体目无形体属病原体的种类、分布、特征等方面的研究进展进行归纳综述。

RNA传感器蛋白催化酶PKR研究新进展

PKR(Protein Kinase Double-Stranded RNA-Dependent)是丝氨酸-苏氨酸催化酶,细胞浆中重要的RNA传感器(RNA sensor),能自身磷酸化,也可使真核细胞初始化因子2亚单位(subunit of eukaryotic initiation factor 2,e IF-2α)磷酸化。PKR结合病毒dsRNA通过激活PKR/e IF-2α信号通路,抑制病毒基因的翻译,降低病毒蛋白合成,有效减少病毒复制。PKR还可通过激活IκB(inhibitor of NF-κB)/转导核因子(NF-κB,nuclear factorκB)信号通路抑制病毒的转录。PKR与肿瘤的发生具有相关性,能作为治疗癌症的靶点。本文主要综述PKR的分子生物学性质、PKR分子的活化、PKR对IFN转录和转录后的调节、PKR的信号转导、PKR对非病毒病原体感染的调节、PKR对肿瘤细胞的调节等方面的最新进展。

RLRs家族中RIG-I和MDA-5的研究进展

非特异性固有免疫是预防病毒感染的第一道防线,Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)和维甲酸诱导基因I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是感知病毒RNA的两个主要受体家族。RLRs为存在于胞浆中的RNA解旋酶家族,可识别在病毒感染或复制期间进入到胞浆内的单链或双链RNA。目前研究RLRs家族比较多的成员有维甲酸诱导型基因I(retinoic acid-inducible gene I,RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene-5,MDA-5)及遗传学和生理学实验室蛋白2(laboratory of genetics and physiology 2,LGP2)。本文分别就RLRs家族中RIG-I和MDA-5结构、生物学作用及其信号传导中关键分子的研究进展作一概述。

通辽市家畜感染无形体属病原体的调查

目的调查内蒙古通辽地区绵羊和牛的无形体感染情况。方法采用PCR方法检测内蒙古通辽市扎鲁特旗及科左中旗散放76只绵羊和20头牛的血样本,扩增嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、中央无形体(A.centrale)和牛无形体(A.bovis)的16 S rRNA基因和羊无形体(A.capra)的gltA基因。结果76只绵羊血样本中37份扩增到嗜吞噬细胞无形体目的基因,阳性率为48.7%;76只绵羊血样本中16份扩增到中央无形体目的基因,阳性率为21.1%。所有绵羊的血样本均未扩增到羊无形体和牛无形体的目的基因,20头牛的血样本均未扩增到4种无形体的目的基因。结论通辽地区羊存在嗜吞噬细胞无形体和中央无形体感染,提示该地区存在无形体病的自然疫源地和可能存在人无形体病。

焦磷酸显色法检测PCR产物及酶活性（英文）

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学领域的一项具有划时代意义的技术,但定量PCR产物或测定能生成焦磷酸的酶活性仍需要新技术的发展。本文提供了一种PCR产物定性及定量检测方法(Color PCR kit)及其用途;该方法通过焦磷酸(pyrophosphate,PPi)显色测定PCR的副产物PPi。利用试剂盒中的试剂与PPi反应,最终生成物为甲暨(formazan),呈红色。根据显色现象(红色)判断PCR的阳性结果,由目测实现PCR的定性检测;或通过测定490 nm处的吸光度值定量检测PCR过程中生成的副产物PPi的含量,定量检测PCR产物的生成量;目测情况下Color PCR kit可检测到2.5 ng水平的PCR产物,用紫外分光光度计可检测到低限为1 pg;Color PCR kit法比琼脂糖凝胶电泳检测法(低限为4 ng)灵敏。Color PCR kit还可用于连接酶和转移酶活性的测定。

编码Ag85A基因突变体的设计与合成

自行设计和合成可转录mRNA不能翻译功能性蛋白分子的全长Ag85A编码基因突变体(Ag85A-M),克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,用于后续制备Ag85A-M疫苗,研究双股Ag85 DAN疫苗是否能通过RNA传感器提呈抗原信息,诱导固有和适应性免疫应答。设计Ag85A-M基因,将编码Ag85A基因(891 bp)中的第114位和230位的碱基C突变为G,使之含有TAG和TGA双重翻译终止子。合成Ag85A(M)全基因片段,利用普通PCR方法按照设计将Ag85A(M)全基因序列分别拆分成332 bp(A)、332 bp(B)、264 bp(C)三个小片段和488 bp(D)、423 bp(E)两个小片段进行扩增合成。构建pIRES2-EGFP-Ag85A(M)载体,将Ag85A(M)全长基因片段通过pIRES2-EGFP载体多克隆位点(multiple clone site, MCS)中双酶切位点EcoR I/BamH I插入载体,再经双酶切和基因测序鉴定,DC2.4中基因表达确认。结果显示,采用普通PCR法分段扩增合成获得与预先设计的长度一致的A、B、C、D和E小片段,合成的Ag85A-M的全部序列(891 bp)、突变位置和碱基正确。三片段拆分(A、B和C小片段)阳性克隆率平均值为87.67%,基因保真度为90.33%。二片段拆分(D和E小片段)阳性克隆率平均值为81.5%,基因保真度为23%。结果表明,本研究获得了可用于后续研究的含有114和230位点突变的全长Ag85A-M DNA片段,三片段基因拆分方法获得的332 bp及以下片段PCR法合成保真度显著高于二片段拆分方法获得的423 bp及以上片段。

1例提高免疫力治愈慢性布鲁菌病患者的临床观察

目的观察提高免疫力治疗慢性布鲁菌病(简称布病)病例效果,对其疗效进行分析与评价。方法对1例慢性布病患者采用蒙西药联合提高免疫力治疗,对比治疗前后患者的临床症状、血清学抗体、布鲁菌DNA、免疫功能水平。布鲁菌抗体检测采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RPBT);血细胞和血清中布鲁菌DNA采用PCR检测;外周血淋巴细胞亚群采用流式细胞进行分析检测;血清免疫球蛋白和补体成分采用免疫发光技术检测。结果治疗后患者背部冰冷、周身乏力、关节疼痛等临床症状消失;治疗后血清学抗体SAT 1∶50(++),RPBT(+),与治疗前相比无变化;治疗前布鲁菌DNA检测为细胞阳性和血清阴性,治疗后均为阴性;免疫功能检测治疗后γδT细胞为9.50%,较治疗前(14.00%)有所下降;单核细胞和调节性T细胞(Treg)治疗后分别为5.59%和7.33%,均较治疗前(3.35%和4.72%)有所升高;补体C3水平治疗前为0.79 g/L,治疗后为0.91 g/L,恢复到正常参考值范围(0.88~2.01 g/L)。结论慢性布病患者采用提高免疫力措施能提高临床治疗效果。