基于非靶向代谢组学研究三氧化二砷对白血病K562细胞的毒性机制

目的:研究三氧化二砷(As_(2)O_(3))对白血病K562细胞代谢的影响。方法:利用CCK-8法检测As_(2)O_(3)对K562细胞活力的影响;采用超高效液相色谱-质谱技术对As_(2)O_(3)孵育后细胞中的代谢物进行鉴定,筛选出差异代谢物,并进行KEGG富集分析。结果:CCK-8结果显示,As_(2)O_(3)可剂量依赖性地降低K562细胞存活率。非靶向代谢组学检测结果表明,As_(2)O_(3)可导致K562细胞内多种代谢物含量发生显著变化。KEGG富集分析表明,差异代谢物主要富集在谷胱甘肽代谢、铁死亡、亚油酸代谢、牛磺酸代谢、癌症中的胆碱代谢、嘌呤代谢等通路。结论:As_(2)O_(3)可显著降低K562细胞存活率,这可能与影响细胞多种代谢稳态,进而导致细胞增殖抑制、诱导细胞凋亡等有关。此外,As_(2)O_(3)是否会诱导K562细胞发生铁死亡值得深入研究。

三氧化二砷在白血病治疗中的研究进展

白血病是一类起源于造血系统并具有高度异质性的恶性克隆性疾病。三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO,As_(2)O_(3))是治疗急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)和其他类型白血病的重要药物。ATO治疗APL效果最为显著,可通过多种机制发挥作用,包括诱导细胞凋亡和自噬、抑制细胞生长等,同时ATO联合其他药物治疗白血病也取得了很大的研究进展。然而,虽然ATO治疗白血病有很好的疗效,但其具有全身细胞毒性作用,近年来研究学者致力于采用纳米技术靶向递送ATO和其他药物以降低其毒性作用的研究已取得一定的成果。

茶多酚对体外存储红细胞的影响

目的:研究茶多酚(Tea Polyphenols,TP)对体外存储红细胞的影响。方法:将红细胞悬液分为对照组和茶多酚-红细胞保存液组(TP-MAP组),将对照组加入等体积保存液和红细胞悬液,TP-MAP组加入不同浓度梯度的茶多酚保存液和红细胞悬液,总体积与对照组相等,室温下保存。每组红细胞与保存液共同作用2 h后,各取反应液10 mL,利用血红蛋白释放实验(Hemoglobin release test,HRT)比较血红蛋白的释放差异,测定了红细胞溶血率。结果:TP-MAP组的Hb释放量明显低于对照组(P<0.05),但红细胞溶血率没有改变(P>0.05)。结论:茶多酚能减弱Hb再释放,减轻红细胞氧化损伤程度,且实验中使用的茶多酚浓度对红细胞没有毒性。

双靶点抗乳腺癌融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin真核表达载体的设计构建

目的:构建双靶点抗乳腺癌融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin的真核表达载体。方法:以质粒pET22b(+)Del1-9-G129R-hPRL为模板,PCR扩增首尾端带有HindⅢ和BamHI识别序列的目的基因Del1-9-G129R-hPRL,用于融合基因合成,同时扩增首尾端带有HindⅢ和KpnI的单基因作为对照。提取人肝脏总RNA,利用RT-PCR技术扩增两端带有BamHI、KpnI以及HindⅢ、KpnI识别序列的目的DNA片段Endostatin,分别用于融合基因合成和单基因对照。采用重叠延伸PCR技术,将以上二单基因作为模板,扩增首尾端带有HindⅢ和KpnI识别序列的融合蛋白Del1-9-G129R-endostatin基因片段。目的基因插入T载体测序正确后,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。结果:DNA测序结果显示融合蛋白cDNA序列与GenBank中完全一致。结论:成功构建融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-Del1-9-G129R-endostatin,为下一步在体外细胞水平研究融合蛋白生物学活性做好准备。

微信公众平台支持下混合教学模式的探讨

利用微信公众平台的操作便利、利于师生互动、推送内容生动等优势,将其作为传统教学的辅助工具,建立课堂教学与网络授课相结合的混合教学模式,并调查分析其在教学应用中的可行性与不足点,为互联网时代高校教育的创新发展提供新思路。

红细胞抗氧化损伤研究进展

1 RBCs氧化损伤的来源,ROS是RBCs发生氧化损伤的主要原因,是分子氧发生还原反应时直接或间接产生的一系列产物,以自由基(如O^-2、·OH和H 2O 2)或其他高活性中间产物形式存在。红细胞循环于血液,其氧化损伤一方面来源于红细胞内Hb发生自氧化产生的ROS,其中铁是自由基反应的有效催化剂;另一方面是体内白细胞等有核细胞进行有氧呼吸时产生并释放到血液中ROS。

茶多酚对红细胞膜氧化损伤保护作用的研究

目的:观察茶多酚(Tea polyphenols,TP)在红细胞氧化损伤过程中的保护作用。方法:用终浓度为0 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL的TP与红细胞悬液作用3 h后,利用血红蛋白释放试验(Hemoglobin release test,HRT)比较TP对红细胞Hb再释放的影响,并测定溶血率的变化。结果:与未加TP处理的对照组相比,TP可以使红细胞HRT的Hb再释放含量降低(P<0.05),红细胞溶血率变化不明显(P>0.05)。结论:茶多酚可以降低红细胞氧化损伤,实验采用浓度范围的茶多酚对红细胞膜没有明显的破坏作用。

糖尿病患者红细胞内蛋白质糖基化修饰的研究进展

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病,主要由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损,或两者兼有引起。生物体内超过一半的蛋白质都会发生糖基化修饰。长期存在的高血糖会导致各种组织,特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害和功能障碍,其机制可能与高血糖导致的蛋白质糖基化产物增多有关。红细胞存在于循环血液中,增高的血糖可以使红细胞表面及红细胞内的蛋白质进行糖基化修饰,从而影响红细胞功能,导致微循环障碍,可能成为引起糖尿病微血管并发症的重要机制之一。

肾病对红细胞影响的研究进展

肾病包括急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)、肾病综合征(Nephrotic syndrome)、糖尿病肾病(diabetic nephropathy)、慢性肾脏疾病和终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)等。其中,糖尿病肾病属于继发性肾病综合征,终末期肾病是5期慢性肾病。由于肾具有强大的代偿能力,因此,病情非常隐匿,当出现临床症状时,往往就会非常严重,甚至危及生命。肾受损后会引起体液成分的改变,而循环红细胞(Red blood cell,RBC)游走于全身,能够最先感受到内环境的改变。

糖尿病患者体内红细胞衰亡机制的研究进展

红细胞通过启动自杀性程序导致细胞死亡的过程与其他有核细胞的凋亡(apoptosis)类似但不完全相同,所以Lang等人[1]提出"红细胞衰亡"(eryptosis)的概念,将红细胞特别的死亡过程与其他细胞区别开来。由于成熟红细胞不含细胞核与线粒体等结构,因此不能够像其他细胞那样在凋亡时观察到核与线粒体的变化,但红细胞在衰亡过程中有其独特特征,例如:细胞体积变小、胞膜产生囊泡、胞内某些蛋白酶的活化、膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻[2,3]等。

miRNA-152在损伤足细胞中异常表达的研究

目的以阿霉素(Adriamycin,ADR)诱导的足细胞损伤模型,来研究miRNA-152在损伤足细胞中的表达,为阐明miRNA-152异常表达导致肾足细胞损伤的机制研究奠定基础。方法将0.00μg/mL,0.05μg/mL,0.10μg/mL,0.20μg/mL,0.40μg/mL,0.80μg/mL浓度的ADR加入已分化培养6 d的足细胞中,诱导培养24 h后,通过足细胞骨架免疫荧光染色和Synaptopodin表达检测,鉴定足细胞的损伤;然后采用Real-time PCR法检测miRNA-152和14-3-3β的表达,分析miRNA-152和14-3-3β的表达关系。结果分化培养6 d的足细胞在加入ADR 24 h后,鬼笔环肽免疫荧光染色结果显示,ADR诱导培养的足细胞中肌动蛋白应力纤维减少,且细胞骨架排列失调;Real-time PCR检测结果表明,ADR诱导培养的足细胞中,Synaptopodin的表达下降。在损伤足细胞中,Real-time PCR法检测结果表明,miRNA-152的表达上调,14-3-3β的表达则下降。结论在损伤足细胞中,miRNA-152表达上调,而14-3-3β的表达则下降,提示了miRNA-152可能直接下调了14-3-3β的表达,进而导致足细胞损伤。

EMILIN1基因多态性与蒙古族原发性高血压相关性研究

目的 探讨蒙古族人群中EMILIN1基因的3个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点与原发性高血压的关系.方法 在内蒙古自治区蒙古族人群中选取201例原发性高血压患者和202名血压正常者进行病例对照研究,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法检测rs3754734、rs2011616和rs2304682这3个SNP位点的等位基因和基因型分布,并构建单倍型.结果 在这3个SNP位点中,rs2304682位点的基因频率和基因型频率在高血压组和对照组间差异有统计学意义（P＜0.05）,并且在rs3754734和rs2304682这2个SNP位点构建的单倍型中,G-C和G-G单倍型在高血压组和对照组之间差异有统计学意义（P＜0.05）.在舒张压偏高组和舒张压正常组间,rs2304682位点的基因型和等位基因分布差异有统计学意义（P＜0.05）,而在收缩压偏高组和收缩压正常组间,各个SNP的基因型和等位基因分布差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 在蒙古族人群中,EMILIN1基因rs2304682多态性位点以及rs3754734和rs2304682这2个SNP位点构建的G-G单倍型可能与原发性高血压的易感相关联,rs2304682的多态性与蒙古族原发性高血压的舒张压的高低可能有关联.

类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽表位表达与Thl7／调节性T细胞的失衡和滑膜炎症的相关性分析

目的分析类风湿关节炎（RA）患者滑膜抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体表位的表达情况与Thl7／调节性T细胞的失衡、滑膜炎症和临床表现的相关性。方法抗CCP抗体单链抗体（ScFv）通过噬菌体蛋白展示技术构建。以6xHisoTag免疫组织化学法检测39例RA患者和35例对照组关节滑膜抗CCP抗体的表达情况。流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMCs）中Thl7闹节性T细胞的百分比，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测Thl7／调节性T细胞相关细胞因子。RA滑膜病理及临床病情活动性评分纳入分析。主要采用，检验、单因素方差分析进行统计学处理。结果①抗CCP抗体表位在RA组与对照组表达率分别为76．9％和11．4％，差异有统计学意义X^2=31．9，P〈0．01）；②滑膜抗CCP抗体表位表达阳性的RA组患者外周血Thl7细胞，Thl7／i）~节性T细胞比值，Thl7相关细胞因子白细胞介素（IL）－6，IL．17a，IL．23，肿瘤坏死因子（TNF）α，调节性T细胞相关细胞因子转化生长因子（TGF）-β_1，以及外周血和滑液中抗CCP抗体水平均高于滑膜抗CCP抗体表位表达阴性的RA组；③滑膜抗CCP抗体表达阳性RA患者病情活动性DAS28以及病理滑膜细胞增生、淋巴细胞聚集和弥漫性淋巴细胞浸润评分高于抗CCP抗体表达阴性的RA患者。结论抗CCP抗体表位表达与Thl7／调节性T细胞的失衡和滑膜炎症存在密切联系，可能在RA发病机制中发挥作用。

类风湿关节炎患者滑膜CCP表位表达与HLA—DRB1等位基因、PADI4单核苷酸多态性的相关性分析

目的分析类风湿关节炎（RA）患者滑膜环瓜氨酸肽（CCP）表位表达情况与HIA—DRB1共同表位（SE）等位基因、肽酰基精氨酸脱亚氨酶4（PADI4）基因单核苷酸多态性（SNPs）的相关性。方法对象为2008年10月至2011年12月对内蒙古医学院附属医院风湿免疫科和骨科的53例RA患者和42例对照组患者（外伤者26例，骨关节炎16例）。抗CCP单链抗体（ScFv）通过噬菌体蛋白展示技术构建。以6×His·Tag免疫组化法检测RA关节滑膜的CCP表达情况。PADI4基因SNP通过逆转录合成cDNA测序，杂合子TA载体克隆测序。序列特异性引物PCR（SSP—PCR）法检测HLA—DRB1等位基因型。结果CCP表位在RA组与对照组表达率分别为77．4％和9．5％，差异有统计学意义（P〈0．01）。RA组2个PADI4SNP基因型（PADI4_89G^＋和PADI4_104T^＋）的频率与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。携带这2个少见基因型者较常见基因型发生RA的危险性为3．67和2．53倍。携带SE^＋等位基因型者较SE^-者发生RA的危险性为5．57倍。RA滑膜CCP表位表达仅与SE^＋等位基因型和PADI4_89G^＋、PADI4_104T^＋以及两者同时阳性相关。血清CCP滴度与SE^＋、PADI4_104T^＋G^＋，SE^＋／PADI4_89G^＋和SE^＋／PADI4_104T^＋等基因型相关。结论RA患者滑膜CCP表位表达和抗CCP抗体的产生与特定的SE等位基因型和PADI4基因SNP密切相关。

双靶点抗乳腺癌Del1-9-G129R-T3融合蛋白真核表达载体的构建及体外抗肿瘤活性实验

目的:构建融合蛋白Del1-9-G129R-T3真核表达载体,研究融合蛋白相对于人催乳素受体拮抗剂Del1-9-G129R和肿瘤抑素(tumstatin)活性多肽T3对乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉内皮细胞HUVEC抑制增殖与促进凋亡作用的差异。方法:以质粒pET22b(+)Del1-9-G129R-T3为模板,PCR扩增目的片段Del1-9-G129R-T3和Del1-9-G129R,链接至pCDNA3.1(-)/Myc-His A真核表达载体。T3片段由上海生工合成并以直接退火的方式链接载体。qRT-PCR和Western Blot分别检测目的基因在mRNA和蛋白水平的相对表达。CCK8细胞增殖实验和流式细胞术分别测定MDA-MB-231和HUVEC细胞的增殖与凋亡。结果:重组质粒转染MDA-MB-231和HUVEC细胞后,qRT-PCR和Western Blot检测目的基因在细胞内有较高的相对表达。CCK8和流式分析显示,融合蛋白Del1-9-G129R-T3对MDA-MB-231细胞抑制增殖和促进凋亡作用比对照Del1-9-G129R和T3肽效果更显著,而且对MDA-MB-231细胞作用明显高于HUVEC细胞。结论:Del1-9-G129R-T3相比Del1-9-G129R和T3,对乳腺癌细胞的抑制增殖和促进凋亡效果更佳。MDA-MB-231细胞相比HUVEC细胞,融合蛋白作用更明显。

人催乳素受体拮抗剂G129R-hPRL在乳腺肿瘤治疗中的研究进展

目的介绍特异性人催乳素(PRL)受体拮抗剂G129R-hPRL在乳腺肿瘤治疗中的研究进展。方法查阅近年来国内外相关文献进行总结和归纳,对G129R-hPRL的功能、作用机制、优缺点、改进措施以及在乳腺肿瘤治疗中的应用和今后的发展方向进行综述。结果 G129R-hPRL通过竞争性拮抗内源性PRL的作用进而抑制乳腺癌细胞增殖,介导癌细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤效应。以G129R-hPRL为基础的多功能融合蛋白、以及与其他抗肿瘤成分联合应用显示出更强的肿瘤抑制效力。结论 G129R-hPRL有望成为一种治疗以及预防乳腺癌的理想药物。