α-胞衬蛋白siRNA对人涎腺导管细胞的影响

目的观察α-胞衬(α-Fodrin)蛋白小干扰RNA(siRNA)对人涎腺导管(HSG)细胞的影响,探讨α-Fodrin siRNA治疗干燥综合征(SS)的作用。方法实验分对照组、空载体组、α-Fodrin siRNA1组及α-Fodrin siRNA2组,将成功构建的10μgα-Fodrin siRNA1和α-Fodrin siRNA2表达载体分别采用脂质体法转染HSG细胞,空载体组HSG细胞转染等剂量的pGFP-V-RS空载体。转染后24、48、72和96h观察细胞转染效率,实时荧光定量(RT)-PCR法检测4组HSG细胞中α-Fodrin mRNA的表达水平;细胞荧光免疫法检测4组细胞中α-Fodrin蛋白的表达水平;ELISA法检测4组细胞上清液中IFN-γ、IL-10的表达水平。结果转染后48hHSG细胞转染效率最高;转染后48hα-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组HSG细胞中α-Fodrin mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组(P<0.05),且α-Fodrin siRNA2组中α-Fodrin mRNA的表达水平低于α-Fodrin siRNA1组的表达水平(P<0.05);α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组细胞上清液中IL-10的水平明显升高,较对照组和空载体组差异有统计学意义(P<0.05),α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组比较差异无统计学意义(P>0.05);α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组细胞上清中IFN-γ的水平低于对照组和空载体组,但4组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSG细胞转染α-Fodrin siRNA载体后,α-Fodrin mRNA和蛋白的表达水平下降,同时细胞上清中IL-10的水平升高、IFN-γ水平下降,提示α-Fodrin siRNA可以减轻炎性反应,为SS的治疗提供实验依据。