猪LGALS1基因的原核表达及序列分析

目的原核表达猪源LGALS1并进行序列分析。方法提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,RT-PCR法扩增LGALS1的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-LGALS1并测序,应用生物分析软件对基因序列进行同源性比对及系统进化树分析;将构建正确的质粒pMD18-T-LGALS1亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-LGALS1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、Ni2+亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果PCR扩增获得了全长为408 bp的cDNA序列,与GenBank中登录的LGALS1编码区序列(NM001001867.1)相似性达99%,核苷酸序列同源性分析表明,克隆基因序列与猪源LGALS1同源性最高;质粒pET-30a-LGALS1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;表达的LGALS1相对分子质量约21000,经纯化后,可与LGALS1 Antibody发生反应,具有反应原性。结论成功表达了猪源LGALS1。