高效液相色谱法测定苦檀子中β-谷甾醇的含量——基于正交试验优化的皂化反应法

目的:建立高相液相色谱法测定苦檀子中β-谷甾醇含量,并对提取方法进行优化。方法:采用C18反相色谱柱对β-谷甾醇含量进行测定,流动相为甲醇-乙腈(60∶40),检测波长210 nm,柱温箱温度40℃,流速1.2 mL/min;以皂化时间(1、2、3、4 h)、皂化温度(70、80、90、100℃)、皂化液加入体积(4、6、8、10 mL)为正交试验考察因素和水平,优选苦檀子的皂化方法。结果:β-谷甾醇在0.05~1μg范围内,质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(R2=0.9995),仪器检出限为0.027μg,精密度(RSD)为0.51%;由正交试验直观分析可知,各因素对提取工艺的影响顺序为皂化液加入体积>皂化时间>皂化温度;根据直观分析K值确定最佳制备工艺条件为:加入10 mL皂化液,皂化时间2 h,皂化温度80℃。测得苦檀子中β-谷甾醇含量为0.020%,方法平均回收率为118.8%。结论:基于正交试验确定的皂化反应法用HPLC测定苦檀子中β-谷甾醇含量,操作简便快速,可为苦檀子中β-谷甾醇含量测定提供依据。