马鹿X/Y精子分离及人工授精技术研究

对马鹿X/Y精子进行分离、冷冻保存和人工授精,探讨马鹿鲜精保存运输、精子分离以及性控冻精的受胎及后代性别控制准确率。结果表明:①马鹿鲜精中加入三联抗生素、18℃恒温保存最有利于精子活力的保持。②马鹿鲜精死精率与X/Y精子分离速度有明显相关性,死精率越低,分离速度越快。③来自同一马鹿供体的3组样品分离精子解冻后活力(0.61 vs 0.60 vs 0.65)及4h时活力(0.30vs0.30vs0.32)无显著差异(P>0.05)。④应用马鹿性控冻精对80只发情母鹿进行子宫角深部输精,有55只母鹿妊娠期满产下仔鹿,情期受胎率67.5%,均为雄性,性别控制准确率100%。结论:分离马鹿X/Y精子的冷冻保存、人工授精,在技术上已达到产业化应用水平,通过进一步改善后,可以大规模推广应用。

同期发情技术在规模化奶牛养殖中的应用

使用律胎素和CIDR+PG对规模化奶牛场产后80天以上不发情母牛进行同期发情处理,结果:1、用药前未对不发情母牛卵巢等状态进行直肠检查,用律胎素和CIDR+PG处理,发情率分别为47.9%和50.0%,二者之间差异不显著(P>0.05),人工授精情期受胎率分别为56.5%和52.9%,二者之间差异不显著(P>0.05),总受胎率27.1%和26.5%,二者之间差异不显著(P>0.05);2、同期发情处理前先对不发情母牛卵巢等状态进行直肠检查,再使用律胎素和CIDR+PG,发情率分别为88.9%和91.7%,二者之间差异不显著(P>0.05),人工授精情期受胎率分别为50.0%和54.5%,二者之间差异不显著(P>0.05),总受胎率分别为44.4%和50.0%,二者之间差异不显著(P>0.05)。3、用律胎素和CIDR+PG组合对已知和未知卵巢状态的不发情奶牛进行处理,其发情率分别为89.7%和48.8%,二者之间差异极显著(P<0.01),情期受胎率分别为51.4%和52.5%,二者之间差异不显著(P>0.05),总受胎率分别为46.2%和25.6%,二者之间差异极显著(P<0.01)。表明:欲使产后80天以上不发情奶牛达到理想的同期发情和受胎效果,在实施同期发情处理方案以前,应先对不发情母牛的卵巢等状态进行直肠检查,针对卵巢的不同发育状态,选择不同的药物和采取不同的方法。

白绒山羊性控胚胎生产及移植应用研究初探

应用X性控冷冻精液对超排供体白绒山羊进行人工授精,生产性控胚胎并进行鲜胚移植。结果发现,①用性控冻精和鲜精输精的供体母羊,平均卵子回收数分别为13.3和12.5枚,其中性控冻精组受精卵比例为29.6%(55/186),极显著低于鲜精组94.0%(281/299)的比例(P<0.01);②性控胚胎和普通胚胎移植受体母羊产羔率分别为42.2%和58.1%,二者差异极显著(P<0.01);③性控胚胎移植受体母羊所产羔羊雌性所占百分数为100%,极显著高于普通胚胎移植(P<0.01)。表明通过白绒山羊X、Y精子分离、人工授精生产性控胚胎,同时结合胚胎移植技术,可以达到按照生产实际中的意愿得到性别控制子代白绒山羊的目的。

奶牛性控冻精应用研究

应用奶牛性控冻精进行人工授精,探讨其情期受胎率、母犊率与常规冻精的差别,以及其不同年龄与配母牛、不同输精时间、不同输精部位与情期受胎率之间的关系,为大规模推广应用提供科学依据。结果:1、奶牛性控冻精人工授精的情期受胎率为56.6%(3020/5335),与普通冻精的情期受胎率59.1%(1328/2246)相比差异不显著(P>0.05),奶牛性控冻精的母犊率为93%(1922/2067),极显著高于普通冻精48.8%(63/129)的母犊率(P<0.001);2、应用性控冻精,青年牛的情期受胎率为69.0%(2333/3382),显著高于经产牛49.2%(961/1953)的情期受胎率(P<0.05);与配母牛发情开始后18～24h输精,其情期受胎率为56.8%(2255/3970),显著高于发情开始后8～12h输精46.1%(629/1365)的情期受胎率(P<0.01);单侧子宫角深部输精,情期受胎率为56.6%(2886/5099),显著高于双侧子宫角输精45.3%(107/236)的情期受胎率(P<0.05)。结果表明:1、性控冻精与普通冻精的情期受胎率无差异,可以规模化推广;2、性控冻精输精母牛情期受胎率的高低与母牛的经产与否、输精时间和输精部位有直接相关性。

奶牛X性控冻精体外受精应用研究

为了研究不同种公牛的常规冻精和分离冻精进行了体外受精试验,分别记录其原核形成率、卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数,旨在比较不同种公牛的分离冻精和常规冻精受精和胚胎发育能力上的差异。结果表明:3头种公牛的常规冻精和性控冻精在受精后的原核形成率和1号种公牛的卵裂率差异显著(P<0.05),但囊胚率和囊胚细胞数均无显著差异(P>0.05);且2号种公牛分离冻精的原核形成率和卵裂率显著高于1号种公牛(P<0.05),与3号种公牛无显著性差异(P>0.05)。

不同种公牛X/Y精子分离效果及对体外受精能力的影响

本研究首先对比了3头种公牛的X/Y精子分离效果,并通过常规冻精和性控冻精的活力检测,来评价流式细胞仪分离及冷冻处理对不同种公牛精子分离效果的影响。应用体外受精试验,探讨了不同种公牛个体的常规冻精和分离冻精的受精和胚胎发育能力。试验结果表明,不同种公牛个体间除分离准确率外,精子的分离速率(4.1×103/svs4.5×103/svs5.3×103/s,P<0.05)和死精率(19.3%vs14.5%vs11.0%,P<0.05)都存在显著差异。三头种公牛的性控冻精在体外培养过程中,精子活力的下降速率要显著快于常规冷冻精液组,不同种公牛个体的分离冻精组在4小时的精子活力也有显著差异(1号种公牛9.1%vs2号种公牛22.1%、3号种公牛21.5%,P<0.05)。此外,常规冻精和性控冻精在受精后的卵裂率和囊胚率存在显著差异(1号种公牛:64.0%vs41.6%,26.9%vs19.3%;2号种公牛:67.3%vs52.3%,29.2%vs26.5%;3号种公牛:60.3%vs43.1%,27.3%vs29.9%)。上述结果表明,不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离冷冻处理的耐受性存在显著差异,造成其解冻后活力和存活时间不同程度的下降;但在体外受精试验中,3头种公牛的分离精子仍具有正常的受精能力,并能支持胚胎发育到囊胚阶段。综上结果表明,选择适宜的种公牛和降低分离及冷冻处理对精子的损伤,对于提高精子的分离效率、分离精液的品质和体外受精效率都有着重要的意义。

分离和冷冻处理对牛性控精液线粒体膜电位的影响

采用JC-1染色结合流式细胞仪和激光共聚焦显微镜,分别对4组牛精液样品(鲜精、分离精液、普通冻精和分离冻精)的线粒体膜电位进行检测,研究分离和冷冻处理对牛精子线粒体膜电位的影响。结果表明:分离处理对A和B种公牛的精子线粒体膜电位影响不显著(P>0.05),但对C种公牛影响显著(P<0.05);而冷冻处理后,A、B和C种公牛的线粒体膜电位均显著变化(P<0.05);且鲜精时线粒体膜电位无显著差异的A和B种公牛,分离后线粒体膜电位出现显著差异(P<0.05)。当精液从采集到处理的间隔时间在24h以内时,分离处理后精子线粒体膜电位无显著性变化(P>0.05),但同样时间间隔内冷冻处理后,精子线粒体膜电位显著变化(P<0.05)。实验表明和分离处理相比,冷冻处理对精子线粒体膜电位的影响更为显著,且不同种公牛对分离和冷冻处理的耐受性不同。