微管蛋白基因(Tubulin)具有高度的保守性,常作为目标基因相对表达量研究时的内参基因。本研究旨在通过构建蓖麻(Ricinus communis L.) RcTUBβ1基因的原核表达载体pET32a(+)-RcTUBβ1并优化表达工艺以表达融合蛋白His-RcTUBβ1。以蓖麻...微管蛋白基因(Tubulin)具有高度的保守性,常作为目标基因相对表达量研究时的内参基因。本研究旨在通过构建蓖麻(Ricinus communis L.) RcTUBβ1基因的原核表达载体pET32a(+)-RcTUBβ1并优化表达工艺以表达融合蛋白His-RcTUBβ1。以蓖麻雌花为材料,通过RT-PCR技术,扩增得到含酶切位点Bam HⅠ和XhoⅠ的RcTUBβ1基因(GenBank Accession number:XM_02509734.3)的ORF序列,经双酶切构建原核表达载体pET32a(+)-RcTUBβ1,将pET32a(+)-RcTUBβ1转化到大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3)中诱导表达,并考察诱导时间、诱导温度、诱导IPTG浓度对表达的影响。结果表明,所获得的蓖麻RcTUBβ1 ORF序列与GenBank中的序列一致,长度为1 341 bp,未发生移码突变。IPTG可诱导产生分子量约为68 kDa的融合蛋白,最优表达条件为诱导温度28℃、诱导时间7 h和IPTG 0.5 mmol/L,融合蛋白主要以包涵体的形式存在。这为纯化融合蛋白以制备其抗体,用以研究RcTUBβ1的免疫组织化学分布及时空表达模式提供了基础。展开更多