沙门氏菌主要流行血清型耐药性的研究进展

引起人畜共患疾病的沙门氏菌已经对多种抗生素产生了抗性,相应的抗性基因通常位于基因盒、转座子、质粒或SGI-1和SGI-2基因岛的变体中。非伤寒沙门氏菌分离株引起人的感染主要是由于摄入受污染的食物,在美国、欧洲和中国的沙门氏菌主要流行血清型是肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,而新出现的S.1,4,[5],12:i:-血清型的高耐药率引起世界范围的广泛关注。本文简述全世界范围内沙门氏菌的流行血清型的特征,并对沙门氏菌耐药性的发展趋势及其耐药性产生的分子机制进行综述。

副溶血性弧菌耐药基因的研究进展

副溶血性弧菌为水产品主要致病菌之一,水产业和农业中抗生素的过量使用导致副溶血性弧菌对所推荐使用的抗生素产生了抗性,并且在副溶血性弧菌中已经发现了质粒和整合子等基因移动元件,更增加了与其他细菌发生耐药基因相互交换和重组的几率。对副溶血性弧菌的耐药研究现状、耐药机制和耐药基因的水平转移进行综述。

东北虎豹国家公园野生动物大肠埃希菌毒力与耐药性研究

为了解东北虎豹国家公园野生动物大肠埃希菌毒力及耐药性特征,采集东北虎等野生动物粪便样品进行大肠埃希菌分离鉴定。测定生化指标和耐药表型、ERIC指纹图谱、系统进化分群,检测毒力基因及耐药基因。结果分离获得大肠埃希菌共40株,分属为35个ERIC指纹谱系,系统进化分群B2群(6/40)和D群(15/40)共占52.5%。25%(10/40)分离株检测到EAST1毒力基因。20%(8/40)分离株对四环素耐药,最小抑菌浓度32—128μg/mL。携带四环素耐药基因型为tetA和tetB。研究结果有助于进一步了解陆生野生动物大肠埃希菌携带毒力及耐药本底,为建立野生动物和人类耐药病原菌之间的流行病学关联提供数据支持。

淡水养殖鱼大肠埃希菌分离鉴定与耐药性研究

为获取长春地区鱼源大肠埃希菌的耐药性情况,采集市场及养殖场淡水鱼样品进行大肠埃希菌的分离鉴定。测定分离株对19种抗菌药物的耐药性,并检测9种耐药基因和25种毒力相关基因,测定ESBLs表型大肠埃希菌分离株的O抗原血清型。结果表明,322份样品分离获得36株大肠埃希菌,分离率为11.2%,其中18株为A群,其余为B1群。分离株对头孢类抗生素、青霉素类抗生素、四环素和复方新诺明耐药性相对较高,耐药率不低于22%。9株分离株检测到四环素耐药基因tet(A),13株ESBLs表型菌株检测到1群blaCTX-M基因。ESBLs表型菌株的血清型中O164为优势血清型。部分菌株检测到毒力相关基因,包括fimC(94.4%)、ompT(30.6%)和ucD(5.6%)。结果表明,获得了长春地区鱼源大肠埃希菌带菌及耐药性情况,为淡水养殖鱼细菌性疾病的防控提供了一定的参考。

新型冠状病毒猕猴感染实验生物安全管理

目前,全球爆发新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染人类事件,疫苗研制、防治药物筛选及感染机制研究迫在眉睫,而相关研究又离不开实验动物。本文以在动物生物安全三级实验室(animal bio-safety level 3 laboratory,ABSL-3)开展的SARS-CoV-2感染猕猴实验为例,结合工作实际,对生物安全管理工作中几个重要环节进行探讨,为正在或即将开展此项工作的同仁们提供参考。

布鲁菌骨关节病发病机制的研究进展

布鲁菌病是一种常见的细菌性人畜共患病,可以影响多种器官和组织,引起各种临床表现.骨关节是最常受累的部位,其中骶髂关节炎、脊柱炎和外周关节炎是最常见的骨关节病变.布鲁菌通过影响骨骼系统和免疫系统的各种细胞诱导骨损伤,使破骨细胞、骨细胞等细胞表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-17等细胞因子增加,增强破骨细胞的活性;在成骨细胞、骨细胞内增殖并引起凋亡,抑制成骨细胞矿物质和有机基质的沉积;布鲁菌感染后,单核巨噬细胞、中性粒细胞、T细胞和B细胞等炎性细胞也参与炎症反应,这些炎性细胞和骨骼系统分泌促炎细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶(MMPs)增加,增强炎症反应,促进细胞外基质的降解,最终打破骨稳态,加剧骨骼损伤.随着骨关节疾病分子机制研究的日趋深入,人们对布鲁菌引起骨关节慢性疾病的发病机制的认识将越来越成熟.

布鲁菌病骨关节炎的表现与治疗研究进展

布鲁菌病(brucellosis)是一种常见的由布鲁菌导致的全球性人畜共患疾病,其临床表现多种多样,部分患者表现出发热、出汗和骨骼肌肉疼痛等症状。布鲁菌病最常见的并发症是骨关节炎,包括脊柱炎、骶髂关节炎,以及骨髓炎、滑囊炎、腱鞘炎等外周关节炎。脊柱和骶髂关节是布鲁菌病骨节关炎最常见的受累部位,而骨髓炎、滑囊炎和腱鞘炎等外周关节炎的病症报道较少。早期正确的治疗对布鲁菌病骨关节炎患者至关重要,药物治疗和手术治疗是当前布鲁菌病骨关节炎治疗的2种手段。文中通过阐述布鲁菌病骨关节炎的临床表现及治疗,以期帮助临床医师加深对布鲁菌病的认识。

犬瘟热病毒RT-LAMP-LFD检测方法的建立与应用

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的方法,试验采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合的方法,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计一套标有生物素(biotin)的特异性引物,结合异硫氰酸(FITC)荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMPLFD检测方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,同时分析敏感性及特异性,最后检测临床应用情况。结果表明:试验成功构建CDV RT-LAMP-LFD方法,此方法的最佳反应条件为60℃反应60 min;最佳的反应体系为镁离子浓度12 mmol/L,甜菜碱浓度0. 2 mmol/L,Bst DNA聚合酶活性8 U,AMV酶活性5 U,外引物与环引物比例1∶2;最低检测下限为1×10~2个拷贝/m L,能够特异地检测出CDV的存在,犬细小病毒(CPV)等其他病毒均为阴性,可以检测出病犬口鼻腔黏液中的CDV。说明试验建立的CDV RT-LAMP-LFD检测方法特异性强,敏感性高,操作简单,可广泛应用。

野生水鸟感染霍乱弧菌和沙门菌等病原菌的分离和鉴定

目的从死亡的野生水鸟标本中分离、鉴定病原菌,评估迁徙鸟类传播人兽共患病原菌的风险。方法采集的组织标本涂布营养琼脂平板,分别在需氧和厌氧的条件下培养。分离的菌株使用Phoenix100全自动微生物鉴定仪和16s rRNA测序的方法鉴定细菌种属,随后通过PCR的方法检测病原菌携带主要毒力基因的情况。结果从骨顶鸡、鸬鹚和红嘴鸥等鸟类的组织标本中分离鉴定出霍乱弧菌、沙门菌和产气荚膜梭菌等多种肠道感染相关的病原细菌。霍乱弧菌经PCR鉴定不属于O1和O139血清群,无霍乱毒素和毒素相关菌毛的编码基因,但是有溶血素的编码基因。结论检测的死亡鸟类个体存在多病原细菌的感染。

野生黑斑蛙皮肤抗菌肽快速分离、纯化方法的建立

抗菌肽（AMPs）也被称为抗微生物肽,是分子质量比较小,可以抗细菌、病毒及原虫等微生物的一类小肽[1-3],其来源广泛,且具有耐热、耐酸碱及对微生物重复使用不产生耐药性等特点[4-5]。由于其特殊的性质和生物学活性,已成为新型抗菌药物的研究热点。将抗菌肽从成分复杂的样品中分离出来是困扰此类药物研究的关键问题之一。

仔猪腹泻奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了对吉林省某规模化养猪场腹泻仔猪肛拭子样品进行病原菌分离鉴定,试验对样品进行细菌分离培养,革兰氏染色、镜检,生化反应及动物回归试验,选取生物过滤后分离获得的部分分离菌利用BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定/药敏系统检测细菌鉴定仪对分离菌株进行药物敏感性检测,同时利用ERIC(enterobacterial repetitive intergenic consensus)-PCR指纹图谱和融合试验对分离菌株进行流行病学分型检测。结果表明:根据细菌分离培养及染色镜检结果初步分离得到14株奇异变形杆菌。在14株奇异变形杆菌中,选取生物过滤后分离获得的7株奇异变形杆菌进行生化反应和药敏试验。在45种生化反应中,有7种生化反应结果为可变量,生化反应结果与奇异变形杆菌一致率为84. 4%。7株分离菌对氨苄西林、磺胺甲基异口恶唑和环丙沙星的耐药率均达到85. 7%,而对哌拉西林和左氧氟沙星的耐药率均达到42. 9%,具有较高的耐药性。将分离获得的14株奇异变形杆菌培养物腹腔注射Balb/c小鼠,全部小鼠于12 h内死亡,表明14株分离菌均具有高致病性。14株分离菌的ERIC-PCR指纹图谱的鉴定结果与融合试验的结果一致。说明融合试验也可用于检测奇异变形杆菌分离株的同源性,同时本试验分离株的耐药情况严重。

布鲁氏菌RPA-SYBR Green Ⅰ快速检测方法的建立与应用

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的布鲁氏菌检测方法,试验将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)方法与SYBR GreenⅠ结合,根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1对特异性引物和1条标有biotin、dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,建立一种可以检测布鲁氏菌的RPA-SYBR-GreenⅠ方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,并分析敏感性和特异性,并用该方法和ELISA方法对临床样品进行检测。结果表明:试验成功构建出布鲁氏菌RPA-SYBR-GreenⅠ检测方法。该方法的最佳反应条件为手掌中孵育12 min,闭合手掌即可启动RPA扩增;引物与探针的最佳比例为2.5∶1;最低检测限为1×10^(1)cfu/mL,能够特异地检测出布鲁氏菌;对临床样品的检测结果与ELISA方法一致。说明试验建立的布鲁氏菌RPA-SYBR-GreenⅠ检测方法特异性强,敏感性高,检测速度快,操作简单。

西尼罗病毒E蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

利用PCR技术扩增西尼罗病毒(WNV)E蛋白基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-WNV-E,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导目的蛋白表达,对诱导条件进行优化,利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,纯化后的蛋白经SDS-PAGE与Westernblot鉴定正确后,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行间接免疫荧光鉴定。结果显示:WNV E蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式被成功表达,蛋白最佳诱导条件为37℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5 h,经间接免疫荧光鉴定多克隆抗体能特异性识别WNV E蛋白。本研究成功表达并纯化了WNV E蛋白,证明该蛋白具有良好的免疫原性,为WNV抗原、抗体检测方法的建立和新型疫苗的研发及相关研究奠定了基础。

埃博拉病毒病抗原反向间接血凝检测方法的建立

为建立埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)抗原快速检测方法,本研究利用纯化后的埃博拉病毒样颗粒(EBOVVLPs)免疫马匹制备阳性血清,采用饱和硫酸铵沉淀法初纯血清中的IgG,后经过Protien G柱亲和层析法精纯IgG,利用精纯后的IgG致敏醛化的绵羊红细胞,建立反向间接血凝抗原检测方法,并对该方法进行最佳反应条件的优化。将该方法用于不同批次制得的已知病毒滴度埃博拉假病毒血凝效价检测,检测结果显示:病毒滴度的高低与血凝效价检测结果呈现良好的相关性。本研究成功建立埃博拉病毒抗原反向间接血凝检测方法,该方法简单、方便、快捷,无需特殊的仪器设备,1h内便可报告检测结果,在普通实验室中便可进行操作。此外,该方法也适用于埃博拉病毒感染及疫病暴发后临床样品的定性分析。

埃博拉病毒抗体间接血凝检测方法的建立

以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒中和试验检测结果相比较。结果显示,该方法可特异性检测EBOV抗体,与马尔堡病毒、裂谷热病毒等的阳性血清均不发生反应;与假病毒中和试验测得的抗体效价增长规律相一致。结果表明,本试验成功建立了EBOV抗体间接血凝检测方法,该方法安全、简便、快捷,为EBOV疫苗免疫后的效果评价提供了又一新的检测方法。

狂犬病病毒(RABV)感染小鼠原代神经元细胞对Bif-1蛋白表达的影响

建立狂犬病病毒(rabies virus,RABV)CVS-11株感染小鼠原代神经元细胞模型,探究RABV感染小鼠原代神经元细胞对Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白表达的影响。分离并培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,通过间接免疫荧光鉴定RABV感染效率。将RABV以MOI=0.1剂量接种原代神经元细胞,使用直接免疫荧光、Western blot、RT-PCR等方法检测RABV在原代神经元细胞中的复制情况。利用Western blot检测RABV感染原代神经元细胞后Bif-1蛋白的表达情况。结果成功分离了小鼠大脑皮质原代神经元细胞;直接免疫荧光、Western blot、RT-PCR结果显示,RABV CVS-11株可感染原代神经元细胞;Western blot结果表明RABV感染后,原代神经元细胞中Bif-1蛋白水平早期出现短期上升后降低,且整体低于正常水平。RABV CVS-11感染原代神经元细胞后,Bif-1蛋白水平发生改变,为进一步探索Bif-1蛋白在RABV致病中的作用及其分子机制奠定基础。

重组蓖麻毒素A链的表达及半乳糖修饰

目的表达重组蓖麻毒素A链(ricin toxin A,RTA),并进行半乳糖糖基化修饰。方法将重组质粒pET-28a-RTA转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白RTA,通过镍离子亲和层析柱纯化包涵体,并复性。采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]/N,N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)法对重组RTA进行半乳糖糖基化修饰,并对偶联反应温度(20、25、30和37℃)和半乳糖与RTA的投料比(100∶1、500∶1、1 000∶1、1 500∶1和2 000∶1)进行优化。结果 RTA蛋白相对分子质量约34 000,主要以包涵体形式表达,纯化复性后纯度大于90%。最适偶联反应温度为25℃,半乳糖与RTA最适投料比为1 000∶1。结论成功表达了RTA蛋白,并通过EDC/NHS法实现了半乳糖与RTA的偶联。

布鲁氏菌RPA-LFD快速检测方法的建立与应用

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断布病的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与胶体金侧向流试纸条技术(lateral flow dipstick,LFD)相结合。根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,通过对反应条件、体系的优化,以及对敏感性、特异性以及模拟样本的分析,最后进行临床应用,建立一种可以检测布鲁氏菌的RPA-LFD方法。结果显示,成功建立了布鲁氏菌RPA-LFD检测方法,最佳反应条件为闭合手掌中孵育12 min;引物与探针的最佳比为3.5∶1;RPA-LFD方法的最低检测限为5.89 CFU/m L,能够特异地检测出布鲁氏菌,检测大肠杆菌等其他细菌结果均为阴性;用RPA-LFD方法检测模拟样本和临床样品的结果与ELISA方法一致。上述结果表明,本研究建立的布鲁氏菌RPA-LFD检测方法特异性强、灵敏性高、操作简单,可广泛应用于临床检测。

脊柱化脓性感染动物模型的建立及应用进展

手术部位感染是脊柱手术后常见且非常严重的并发症,严重影响患者的身体健康。尽管手术操作无菌细致,及时给予适当的全身抗生素,但手术部位感染率仍然很高[1-2]。据报道,我国脊柱手术感染的风险从0.5%~7.8%不等[3-4]。糖尿病、肥胖、高血压等疾病显著增加脊柱术后感染,感染后治疗的费用可达10多万美元[5],大大增加了患者的经济负担。

低剂量蓖麻毒素吸入诱导的小鼠肺损伤及修复

目的分析雾化吸入低剂量蓖麻毒素(ricin toxin,RT)对小鼠肺组织损伤修复的影响。方法采用改良寇氏法检测小鼠雾化吸入不同剂量RT(1. 312、2. 2、3. 704、6. 2、10. 44μg/kg)的LC(50),确定RT雾化染毒剂量。小鼠雾化吸入1/30 LC(50)剂量RT后,分别在第0. 5、1、2、3、4、5、6、7天,分离肺组织,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,免疫组化方法检测肺组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果小鼠雾化吸入RT的LC(50)为(4. 95±0. 14)μg/kg;雾化染毒后,小鼠肺组织损伤程度及MMP-2、MMP-9蛋白的表达趋势一致。第1、2天时,肺组织血管周围弥漫性水肿,MMP-2、MMP-9蛋白的表达高于空白对照组,差异有统计学意义(P <0. 05);第3、4天时,肺泡结构完全破坏,第3天MMP-2蛋白的表达达到最高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P <0. 01),第4天MMP-9蛋白的表达达到最高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P <0. 01);至第7天时,肺损伤程度基本恢复至正常状态,MMP-2、MMP-9蛋白的表达也呈下降趋势。结论雾化吸入1/30 LC(50)剂量RT后,可引起小鼠肺组织损伤,且损伤可在7 d内修复。