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基于头发蛋白质组学区分个人特质的方法学探究
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作者 吴晓淋 张涛 +2 位作者 徐平 张亚莉 张振鹏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第1期230-240,共11页
目的头发是一类重要的皮肤附属物,主要由角蛋白和角蛋白相关蛋白等组成。不同种族及性别样本的头发蛋白质组成和占比存在差异,且目前缺乏高效率提取头发蛋白的方法。本文探究基于定量头发蛋白质组学方法,旨在探索该方法区分不同个体的... 目的头发是一类重要的皮肤附属物,主要由角蛋白和角蛋白相关蛋白等组成。不同种族及性别样本的头发蛋白质组成和占比存在差异,且目前缺乏高效率提取头发蛋白的方法。本文探究基于定量头发蛋白质组学方法,旨在探索该方法区分不同个体的可能性。方法以3例头发样本,对样品处理方法和裂解缓冲液进行探究,发展一种名为PLEE(PTM lab for protein extraction from hair with high efficiency)的稳定、高效的头发蛋白质提取方法,对7例人发样本,以PLEE法进行提取,结合胶内消化方法进行蛋白质组学实验,产出蛋白质组学数据,分析个体间的头发蛋白质组成及占比。结果共鉴定274种蛋白质,共有的蛋白质107种,非共有蛋白质种类在57~119,部分样本存在独特鉴定蛋白。使用共鉴定107种蛋白质进行定量蛋白质组分析,通过聚类和主成分分析,可将各样本进行区分,且技术重复样本可聚在一起,表明流程的稳定性。另外,筛选出10个关键蛋白(KRT33A、KRTAP9-6、KRT83、KRTAP7-1、KRT32、BLMH、KRT38、KRTAP11-1、NPAS1、KRTAP4-3)在不同个体之间差异比较大且在同个体中蛋白质鉴定稳定。结论不同个体的头发蛋白质组成存在差异,筛选出的10个蛋白质有望作为区分个体特质的关键蛋白,在个体识别、刑侦方面具有重大的应用潜力。 展开更多
关键词 头发 蛋白质组学 个人特质 PLEE
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泛素化修饰组学技术及其在疾病研究中的应用
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作者 董继林 李衍常 徐平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期320-331,共12页
泛素化修饰作为真核细胞内主要的蛋白质翻译后修饰之一,通过泛素-蛋白酶体系统(UPS)介导了细胞内的蛋白质特异性降解,同时广泛参与并调控细胞内基因转录、信号传导、DNA损伤与修复、细胞周期调控、应激反应甚至个体的免疫应答等几乎所... 泛素化修饰作为真核细胞内主要的蛋白质翻译后修饰之一,通过泛素-蛋白酶体系统(UPS)介导了细胞内的蛋白质特异性降解,同时广泛参与并调控细胞内基因转录、信号传导、DNA损伤与修复、细胞周期调控、应激反应甚至个体的免疫应答等几乎所有的生命活动过程。泛素-蛋白酶体系统的精确调控构成了稳定而复杂的泛素化信号网络,而其失调通常会造成癌症、神经退行性疾病、代谢性疾病等多种疾病的发生发展。近年来,基于质谱(MS)的蛋白质组学逐渐成熟,并极大促进了泛素化修饰研究的深度与广度。依托于泛素化蛋白质/肽段富集技术的发展以及高通量、高覆盖度和高灵敏度的质谱检测技术平台,蛋白质泛素化修饰组学也得以快速发展,并逐渐应用于人类生理、病理状态的泛素化蛋白质组研究和疾病发生发展的机制探索。本文主要综述了泛素化修饰组学研究中的泛素化蛋白质/肽段富集方法、质谱鉴定技术、定量标记技术和数据处理方法,同时对泛素化修饰组学技术在疾病研究中的应用也进行了系统分析,理清了当前存在的问题与挑战,为泛素化修饰蛋白质的发现与鉴定提供参考,为相关疾病治疗靶点的筛选和药物研发提供思路。 展开更多
关键词 泛素化 泛素化修饰组学 泛素化蛋白质/肽段富集 质谱鉴定技术 疾病
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基于质谱的蛋白质组学方法新进展 被引量:15
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作者 季美超 付斌 张养军 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第5期862-877,I0008,共17页
蛋白质组学是后基因组时代的科研热点,其研究方向主要涵盖蛋白质表达谱、蛋白质翻译后修饰谱、蛋白质相互作用谱和单细胞蛋白质组等定性分析以及相对和绝对定量分析,现已广泛应用于生物、医药及病理研究中。由于质谱具有灵敏、准确、高... 蛋白质组学是后基因组时代的科研热点,其研究方向主要涵盖蛋白质表达谱、蛋白质翻译后修饰谱、蛋白质相互作用谱和单细胞蛋白质组等定性分析以及相对和绝对定量分析,现已广泛应用于生物、医药及病理研究中。由于质谱具有灵敏、准确、高通量等特点,是蛋白质组学研究必不可少的工具。本文综述了近年来基于质谱技术的蛋白质组鉴定及定量方法,并展望未来蛋白质组学研究的发展方向。 展开更多
关键词 蛋白质组学 质谱 鉴定 定量
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胰蛋白酶镜像酶LysargiNase的开发及其在蛋白质组学研究中的应用 被引量:4
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作者 张俊令 彭雪辉 +1 位作者 王富强 徐平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期741-748,共8页
蛋白质组学是系统鉴定、定量蛋白质及其翻译后修饰形式,并研究这些蛋白质生物学功能的学科。目前,基于质谱的鸟枪法蛋白质组学技术是蛋白质组学研究的主要手段之一,其技术流程是先将蛋白质组样品经位点特异性蛋白酶消化形成肽组,再进行... 蛋白质组学是系统鉴定、定量蛋白质及其翻译后修饰形式,并研究这些蛋白质生物学功能的学科。目前,基于质谱的鸟枪法蛋白质组学技术是蛋白质组学研究的主要手段之一,其技术流程是先将蛋白质组样品经位点特异性蛋白酶消化形成肽组,再进行高效液相色谱分离和质谱检测。而位点特异性蛋白酶对蛋白质样品的消化是质谱检测的前提和基础。随着蛋白质组学研究的深入,多种位点特异性蛋白酶被先后开发利用;而切割发生在相应氨基酸的N端,与传统的C端蛋白酶互为镜像的蛋白酶的鉴定、开发、特性研究和广泛使用更是为蛋白质组学研究提供了新的工具。文中对最近发现的胰蛋白酶的镜像酶——赖氨酸精氨酸N端蛋白酶(LysargiNase)的特点及其应用进行综述,为国内外学者更加广泛的使用创造条件。 展开更多
关键词 镜像酶 赖氨酸精氨酸N端蛋白酶 蛋白质组学 质谱
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基于非标记定量蛋白质组学的谷氨酰内切酶C活性研究 被引量:1
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作者 屈安姜 王富强 徐平 《军事医学》 CAS 北大核心 2020年第6期438-442,共5页
目的谷氨酰内切酶C(Glu C)可特异地切割蛋白谷氨酸或天冬氨酸残基羧基端结合的肽键,是蛋白质组学研究的重要工具酶,优质高效价廉的Glu C产品对蛋白质组学研究意义重大。在课题组前期成功制备重组表达Glu C基础上,应用非标记定量蛋白质... 目的谷氨酰内切酶C(Glu C)可特异地切割蛋白谷氨酸或天冬氨酸残基羧基端结合的肽键,是蛋白质组学研究的重要工具酶,优质高效价廉的Glu C产品对蛋白质组学研究意义重大。在课题组前期成功制备重组表达Glu C基础上,应用非标记定量蛋白质组学技术对实验室自制Glu C与市售商品化产品Glu C(Glu C-Com)的活性进行系统的评价比较。方法等量酵母全细胞蛋白裂解物(total cell lysates,TCL)分别用等量的实验室自制Glu C与Glu C-Com消化,酶解肽段经液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)检测,产生的数据经MaxQuant(v1.5.2.8)软件的非标记定量(LFQ)方法分析。结果Glu C消化样品后产生的易于质谱鉴定分析的肽段(7~35个氨基酸)的总体数目更多,且肽段的丰度范围分布更广;其二级谱图鉴定率、二级谱图数、肽段数量、蛋白鉴定数量等指标均比Glu CCom组高,且漏切率较低。结论应用基于质谱的非标记定量蛋白质组学技术可实现对Glu C的酶活性评价,数据显示实验室制备的Glu C具有较好的生物活性。 展开更多
关键词 谷氨酰内切酶C 质谱 非标记定量蛋白质组学
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糖基化蛋白质组学:结构、功能和研究方法 被引量:11
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作者 张勇 沈丙权 +2 位作者 秦伟捷 钱小红 应万涛 《生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期480-490,共11页
蛋白质糖基化修饰结构多样、分布广泛,以N-糖基化、O-Gal NAc糖基化和O-Glc NAc糖基化等不同修饰形式存在。糖修饰以各种方式广泛参与基本生物学过程,包括基因转录、蛋白质翻译、信号转导、细胞-细胞间以及宿主-病原体相互作用等。糖基... 蛋白质糖基化修饰结构多样、分布广泛,以N-糖基化、O-Gal NAc糖基化和O-Glc NAc糖基化等不同修饰形式存在。糖修饰以各种方式广泛参与基本生物学过程,包括基因转录、蛋白质翻译、信号转导、细胞-细胞间以及宿主-病原体相互作用等。糖基化修饰的异常变化与多种重要疾病的发生发展相关,包括免疫性疾病、肿瘤、先天性糖缺陷等。该文系统展示几种常见糖修饰的结构、参与的生理病理过程,以及最新的研究方法,尤其是糖修饰蛋白质或肽段的特异性富集方法和基于质谱的序列分析方法进展,以期丰富糖修饰蛋白质的研究手段,为糖蛋白质功能机制研究、疾病治疗靶标或候选标志物的发现提供新视角。 展开更多
关键词 糖基化修饰 亲和富集 质谱 肿瘤
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重组含糖识别结构域的人源半乳糖凝集素-3在糖蛋白/糖肽富集中的应用 被引量:3
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作者 赵洋 张勇 +3 位作者 王明超 孟波 应万涛 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1197-1205,共9页
植物凝集素是广泛使用的糖蛋白富集和识别材料,动物凝集素则较少被尝试用于糖蛋白富集。基于人源半乳糖凝集素-3的糖识别结构域(CRD),设计了两种重组凝集素:Gal3C(一个CRD)和Tetra-Gal3C(四重串联CRD)。通过将两种凝集素固定于链霉亲和... 植物凝集素是广泛使用的糖蛋白富集和识别材料,动物凝集素则较少被尝试用于糖蛋白富集。基于人源半乳糖凝集素-3的糖识别结构域(CRD),设计了两种重组凝集素:Gal3C(一个CRD)和Tetra-Gal3C(四重串联CRD)。通过将两种凝集素固定于链霉亲和素琼脂糖小球上,构造了富集糖蛋白的重组凝集素亲和柱。使用凝胶电泳、免疫印迹以及生物质谱技术对重组凝集素的生物特征及其糖蛋白富集能力进行了表征与评价,发现两种类型的重组凝集素对糖蛋白/糖肽都有良好的富集效果,并具有较高的特异性和灵敏度。相对于Gal3C而言,TetraGal3C由于具有四重串联的CRD结构域,表现出更高的糖蛋白/糖肽富集能力。该凝集素亲和柱成功用于人肝癌细胞系HepG2的糖蛋白富集,表明重组凝集素具有从复杂生物样本中选择性识别和富集糖蛋白/糖肽的能力。 展开更多
关键词 液相色谱-质谱 半乳糖凝集素-3 糖识别结构域 糖蛋白富集
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蛋白酶体翻译后修饰功能机制研究 被引量:5
8
作者 卢慧 李衍常 黄学石 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期710-719,共10页
蛋白酶体是真核细胞内介导蛋白质特异性降解的主要复合物,在蛋白质质量控制和细胞稳态维持中发挥关键作用。研究发现,蛋白酶体含量或功能的异常会导致癌症、神经退行性疾病等诸多人类恶性疾病。围绕蛋白酶体的活性调控,已经发展了多种... 蛋白酶体是真核细胞内介导蛋白质特异性降解的主要复合物,在蛋白质质量控制和细胞稳态维持中发挥关键作用。研究发现,蛋白酶体含量或功能的异常会导致癌症、神经退行性疾病等诸多人类恶性疾病。围绕蛋白酶体的活性调控,已经发展了多种靶向药物,加强对蛋白酶体活性精确调控机制的研究具有重要的学术价值与临床意义。蛋白酶体的含量、组装及其活性的调节受多层次的精细调控,本文简要介绍了蛋白酶体的组成亚基、结构特征、转录调控与组装机制,着重阐述磷酸化、泛素化和乙酰化等翻译后修饰对蛋白酶体的调控机制及其生物学意义,以期为深入揭示蛋白酶体调控机制带来新启发。 展开更多
关键词 蛋白酶体 转录 组装 翻译后修饰 功能与调控机制
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一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料结合质谱在蛋白质组学中的应用 被引量:3
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作者 周珊珊 刘佳玉 +1 位作者 张养军 钱小红 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期195-206,共12页
为了提高蛋白质组的覆盖率,色谱分离将发挥重要作用,而色谱固定相更是关键.为此,本文采用"硫醇-烯"点击化学的方法制备了一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料,期望通过其对多肽混合物的高效分离提高蛋白质质谱鉴定的覆盖率... 为了提高蛋白质组的覆盖率,色谱分离将发挥重要作用,而色谱固定相更是关键.为此,本文采用"硫醇-烯"点击化学的方法制备了一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料,期望通过其对多肽混合物的高效分离提高蛋白质质谱鉴定的覆盖率.为了对制备的混合物模式色谱填料的性能进行评价和应用,首先采用小分子混合物对制备的混合模式色谱填料进行表征,结果表明,这种填料具有反相和弱阳离子交换两种分离机制;再用这种混合模式色谱填料分离6条疏水性和理论等电点不同的标准肽段混合物,可将这6条肽段完全分离,而经典的C18反相色谱柱则不能将它们完全分离,说明对于疏水性质相似的肽段,可以根据其等电点的差异得到更好的分离,且由于在反相基团与基质间嵌合了具有亲水性质的基团,减弱了固定相的疏水性质,从而减弱了强疏水性肽段的不可逆吸附的作用.最后将这种固定相用于全蛋白酶切物的混合模式色谱离线分离结合反相色谱-串联质谱分析,对100μg Hep-G2细胞全蛋白酶切物进行分析,共鉴定到5924个蛋白,表明这种混合模式的色谱填料可用于蛋白质组的分离分析中. 展开更多
关键词 混合模式色谱 肽段分离 串联质谱 蛋白质组学
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重组可溶表达结核分枝杆菌新基因编码蛋白Rv2742的相互作用蛋白质组研究
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作者 王红 万李 +5 位作者 武舒佳 常蕾 万康林 张瑶 徐平 戴二黑 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第10期747-754,共8页
目的 Rv2742是基于蛋白质基因组学技术从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Rv,结核菌)中发现并验证的遗漏注释基因。该研究旨在筛选Rv2742在结核菌中的相互作用蛋白质,对Rv2742互作网络进行分析,为深入探索其在结核菌中所参... 目的 Rv2742是基于蛋白质基因组学技术从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Rv,结核菌)中发现并验证的遗漏注释基因。该研究旨在筛选Rv2742在结核菌中的相互作用蛋白质,对Rv2742互作网络进行分析,为深入探索其在结核菌中所参与的生物学功能提供理论基础。方法采用免疫亲和纯化质谱(IP-MS)筛选Rv2742在结核菌中的互作蛋白质。以pMAL-c2X和pMAL-c2X-Rv2742载体诱导表达、纯化获得的麦芽糖结合蛋白(MBP)和MBP-Rv2742融合蛋白为诱饵,分别取等摩尔蛋白与H37Rv非变性全细胞蛋白质裂解物进行孵育,收集2次生物学重复实验得到的与MBP和MBP-Rv2742诱饵结合的蛋白质复合物,10%SDS-PAGE凝胶电泳验证,通过液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析、筛选出Rv2742在结核菌中的互作蛋白质,对筛选到的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)和互作网络分析。结果共筛选到105个Rv2742的潜在互作蛋白质,其定位主要分布在细胞壁、细胞质膜和细胞外区域等细胞组分中,功能上主要参与低氧应激、宿主共生、运输、毒力因子分泌等生物学过程。结论结核菌中有105个蛋白质与Rv2742互作,生物学功能及互作网络分析发现Rv2742可能参与结核菌侵入人体后的致病过程。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 新编码基因 Rv2742 蛋白质组 质粒 相互作用蛋白质 MBP pull-down
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外泌体分离技术及其临床应用研究进展 被引量:17
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作者 高方园 焦丰龙 +2 位作者 张养军 秦伟捷 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1071-1083,共13页
外泌体是细胞通过胞吐过程分泌的一类粒径为30~200nm的囊泡,其组成包括脂质双分子层以及其内部包裹的细胞来源的蛋白质、核糖核苷酸(RNA)和脱氧核糖核苷酸(DNA)等生物分子。作为一种细胞间交流的重要方式,外泌体在一系列生理和病理过程... 外泌体是细胞通过胞吐过程分泌的一类粒径为30~200nm的囊泡,其组成包括脂质双分子层以及其内部包裹的细胞来源的蛋白质、核糖核苷酸(RNA)和脱氧核糖核苷酸(DNA)等生物分子。作为一种细胞间交流的重要方式,外泌体在一系列生理和病理过程中起着至关重要的作用。由于体液环境复杂,加之自身体积小、密度低,外泌体的富集与分离对于其后续分析和功能研究至关重要。该文介绍了外泌体的研究策略、表征手段及生物学功能和临床应用研究进展,特别对外泌体的提取方法进行了详细介绍,并加以系统评述。 展开更多
关键词 外泌体 临床应用 提取方法 综述
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基于生物质谱的蛋白质O-GalNAc糖基化修饰研究进展 被引量:3
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作者 赵新元 沈丙权 +1 位作者 秦伟捷 钱小红 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期113-123,共11页
糖基化是生物体内蛋白质最常见、最重要的翻译后修饰之一,普遍存在于细胞膜蛋白及分泌蛋白,执行重要的生物学功能.常见的蛋白糖基化修饰有N-糖基化及O-糖基化两种类型,而O-GalNAc是O-糖基化中重要的存在形式,在特定生物学进程、癌症发... 糖基化是生物体内蛋白质最常见、最重要的翻译后修饰之一,普遍存在于细胞膜蛋白及分泌蛋白,执行重要的生物学功能.常见的蛋白糖基化修饰有N-糖基化及O-糖基化两种类型,而O-GalNAc是O-糖基化中重要的存在形式,在特定生物学进程、癌症发生发展中起着重要作用,近年来受到广泛重视.得益于代谢标记、化学衍生化、高分辨和多种碎裂模式质谱技术以及基因编辑技术的高速发展,O-GalNAc的糖基化位点、糖型鉴定和生理功能研究取得一系列重大进展.本文综述了基于生物质谱技术的蛋白质O-GalNAc糖基化修饰研究进展. 展开更多
关键词 蛋白质 糖基化 质谱 基因编辑
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微量样本中N-糖组分析技术的发展与应用
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作者 孟波 李晓宇 +2 位作者 崔新玲 应万涛 钱小红 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1416-1422,共7页
针对糖组学分析面临的初始样本量需求较高的技术挑战,该研究发展了一种微量样本N-糖链制备技术(GPAT),通过在移液枪头(Tip)中分别装填C18和HILIC填料,实现了一站式原位蛋白消化、N-糖链释放和富集。与目前普遍采用的基于过滤辅助样品制... 针对糖组学分析面临的初始样本量需求较高的技术挑战,该研究发展了一种微量样本N-糖链制备技术(GPAT),通过在移液枪头(Tip)中分别装填C18和HILIC填料,实现了一站式原位蛋白消化、N-糖链释放和富集。与目前普遍采用的基于过滤辅助样品制备(FASP)技术的N-糖组分析策略相比,使用GPAT技术可以实现微量免疫球蛋白G(IgG)和人肝癌HepG2细胞提取蛋白的原位N-糖链的释放和富集,样本起始量减少90%,可以从10μg IgG和10μg的HepG2细胞蛋白中分别检测到20条和39条N-糖链。从6例健康人(3例男性,3例女性)尿液中提取的10μg尿蛋白中检测到49条N-糖链。该方法实现了微量复杂蛋白样本N-糖链简便、快速的定量分析策略,为进一步的糖组学方法推广应用奠定了基础。 展开更多
关键词 N-糖链 糖组学 尿蛋白 基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪
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小蛋白质鉴定研究进展 被引量:3
14
作者 何崔同 张瑶 徐平 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期278-286,共9页
小蛋白质是指可读框编码长度小于100个氨基酸的多肽.近年来研究发现,小蛋白质参与了细胞信号转导、代谢和生长等重要的生物学过程.然而,由于在基因组注释和生化检测上存在技术挑战,小蛋白质研究进展较为缓慢.小蛋白质高效鉴定技术的发... 小蛋白质是指可读框编码长度小于100个氨基酸的多肽.近年来研究发现,小蛋白质参与了细胞信号转导、代谢和生长等重要的生物学过程.然而,由于在基因组注释和生化检测上存在技术挑战,小蛋白质研究进展较为缓慢.小蛋白质高效鉴定技术的发展是功能研究的前提,也是完善基因组注释的必然要求.本文系统综述了小蛋白质鉴定的难点、原因和解决方法. 展开更多
关键词 蛋白质组学 小蛋白质 鉴定
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模拟失重条件下小鼠骨组织尿卟啉原Ⅲ合酶通过增加破骨细胞活性促进骨量流失
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作者 佟凡 刘明秋 +2 位作者 丁祎 吴正升 崔春萍 《军事医学》 CAS CSCD 2024年第3期166-171,共6页
目的 探究尿卟啉原Ⅲ合酶(UROS)对失重性骨丢失的影响。方法 将8只C57BL/6J雄性小鼠(9周龄)分为对照组和尾吊组(HLU),每组4只。小鼠尾吊28 d后,取小鼠后肢分别进行Micro CT和力学实验检测。利用旋转式细胞培养系统(RCCS)建立失重的破骨... 目的 探究尿卟啉原Ⅲ合酶(UROS)对失重性骨丢失的影响。方法 将8只C57BL/6J雄性小鼠(9周龄)分为对照组和尾吊组(HLU),每组4只。小鼠尾吊28 d后,取小鼠后肢分别进行Micro CT和力学实验检测。利用旋转式细胞培养系统(RCCS)建立失重的破骨细胞模型,通过实时定量PCR(qPCR)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色明确失重导致破骨细胞活性的变化,qPCR和Western印迹检测UROS表达水平变化;构建UROS敲除RAW264.7稳定株,通过qPCR和TRAP染色进一步明确UROS缺失后破骨细胞活性的变化。结果 小鼠尾吊后骨组织骨量流失明显,UROS的蛋白表达水平显著上调;破骨细胞失重处理后,UROS的蛋白表达水平上调,并且破骨分化基质金属蛋白酶9、抗酒石酸酸性磷酸酶等表达水平上调。敲低UROS后,破骨细胞分化相关标志物表达水平显著下调。结论 失重应激条件下,破骨细胞中UROS表达水平上调,进而导致破骨细胞活性增强,骨吸收大于骨形成,从而导致骨量流失。 展开更多
关键词 尿卟啉原Ⅲ合酶 小鼠 失重 破骨细胞 骨丢失
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去泛素化酶OTUD3调控PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的研究 被引量:1
16
作者 翟文静 袁林 +2 位作者 李洪昌 崔春萍 张令强 《军事医学》 CAS CSCD 2023年第4期282-288,共7页
目的 探索去泛素化酶含OTU结构域蛋白3(OTUD3)在乳腺癌中对抑癌蛋白PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的调控。方法 收集50例乳腺癌患者样本,提取癌与癌旁组织的RNA后进行逆转录,对PTEN C2结构域进行PCR扩增后测序分析,鉴定乳腺癌PTEN C2结... 目的 探索去泛素化酶含OTU结构域蛋白3(OTUD3)在乳腺癌中对抑癌蛋白PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的调控。方法 收集50例乳腺癌患者样本,提取癌与癌旁组织的RNA后进行逆转录,对PTEN C2结构域进行PCR扩增后测序分析,鉴定乳腺癌PTEN C2结构域的肿瘤相关突变。结合现有数据库中PTEN基因的突变位点信息,将PTEN突变体的编码序列扩增后插入哺乳动物表达载体pCMV-Myc中,构建含有PTEN C2结构域肿瘤相关突变体基因的质粒载体。将上述含PTEN点突变体或截短体基因的质粒载体分别与含OTUD3基因的质粒载体共转染MCF-7细胞,通过免疫共沉淀实验、半衰期实验、泛素化实验及Western印迹实验分别检测PTEN所有突变体与OTUD3结合能力、OTUD3对部分PTEN突变体蛋白稳定性的维持能力及去泛素化修饰能力。结果 从50例乳腺癌病例中鉴定出PTEN C2结构域有3种突变,即I224M、E307K与F341V,其中F341V是本研究在乳腺癌病例中首次鉴定出的PTEN突变体。△M199、F341V以及1-319丧失了与OTUD3结合的能力,从而失去了OTUD3对其的稳定作用。结论 在乳腺癌中,PTEN的一些突变体丧失了与OTUD3结合的能力,不能对其去泛素化修饰,使得蛋白稳定性降低。 展开更多
关键词 含OTU结构域蛋白3 乳腺癌 PTEN 肿瘤相关突变 泛素化 蛋白稳定性
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基于开放式搜索的有机磷化合物与人血清白蛋白加合物结构与位点鉴定方法研究
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作者 张香野 邢美宁 +1 位作者 栗梓仓 应万涛 《军事医学》 CAS CSCD 2023年第11期817-822,共6页
目的建立针对有机磷化合物(OP)新型加合物结构和位点的发现策略。方法采用串联测序结合开放式搜索的方式,对OP与人血清白蛋白(HSA)反应形成的加合物结构和修饰位点进行解析。结果建立了一种研究OP暴露后新型加合物结构及加合位点的新方... 目的建立针对有机磷化合物(OP)新型加合物结构和位点的发现策略。方法采用串联测序结合开放式搜索的方式,对OP与人血清白蛋白(HSA)反应形成的加合物结构和修饰位点进行解析。结果建立了一种研究OP暴露后新型加合物结构及加合位点的新方法,利用开放式搜索策略发现半胱氨酸(C)为OP及其水解产物结合的新位点,可产生127.1370的质量增加,对应的二级质谱特征离子m/z为128.1439。结论所建立的OP⁃HSA新型加合物结构及加合位点发现通用研究策略,可用于发现OP加合新位点和新底物,有助于从分子水平提升对OP急性、慢性毒性作用机制的认识。 展开更多
关键词 有机磷化合物 开放式搜索 蛋白质组学 质谱 蛋白加合物
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基于转录组的肝细胞癌分子分型研究进展 被引量:1
18
作者 赵洋 张勇 +3 位作者 燕蒙 王子叶 应万涛 钱小红 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第1期10-17,共8页
肝细胞癌是恶性程度极高的肿瘤之一,患者的发病率和死亡率都位居恶性肿瘤前列.虽然传统临床病理诊断和分级治疗策略得到了极大的发展,并显著改善了肝细胞癌患者的生存情况,但至今肝细胞癌患者的5年生存率仍然较低.基因测序技术的进步和... 肝细胞癌是恶性程度极高的肿瘤之一,患者的发病率和死亡率都位居恶性肿瘤前列.虽然传统临床病理诊断和分级治疗策略得到了极大的发展,并显著改善了肝细胞癌患者的生存情况,但至今肝细胞癌患者的5年生存率仍然较低.基因测序技术的进步和发展加速了肿瘤基因组学的研究,也帮助科学家认识了肿瘤的异质性及其发生、发展的分子机制.近20年,科学家基于转录组数据提出了许多与病理特征相关的肝细胞癌分子亚型,并对其生物学特性和分子特征进行了深入的挖掘.若能将转录组分子亚型与临床病理分级系统综合考虑,用于肝细胞癌病理诊断和分级治疗,将有望改善病人的生存情况,推进肝细胞癌病人的个体化医疗进程. 展开更多
关键词 肝细胞癌 转录组 分子亚型 生存率
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组织驻留嗜酸性粒细胞研究现状 被引量:1
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作者 付宗恒 杨晓明 于淼 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第22期3844-3848,共5页
嗜酸性粒细胞属于白细胞,源于骨髓中的造血干细胞。通过脱粒作用,释放阳离子蛋白,参与宿主防御寄生虫,并促进过敏反应。近年来研究发现,嗜酸性粒细胞能够分泌多种细胞因子,在不同组织参与维持稳态、加速组织再生等功能,并在癌症发生发... 嗜酸性粒细胞属于白细胞,源于骨髓中的造血干细胞。通过脱粒作用,释放阳离子蛋白,参与宿主防御寄生虫,并促进过敏反应。近年来研究发现,嗜酸性粒细胞能够分泌多种细胞因子,在不同组织参与维持稳态、加速组织再生等功能,并在癌症发生发展过程中起着重要作用。本文对组织中嗜酸性粒细胞的功能做一综述。 展开更多
关键词 嗜酸性粒细胞 组织再生 2型免疫
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人皮肤表皮干细胞外泌体的分离培养与鉴定 被引量:1
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作者 李碧优 马洁 +2 位作者 张启宇 章华兵 朱云平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第2期224-229,共6页
目的通过优化技术流程,探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法首先通过优化人源EPSCs的分离酶,运用改良的无血清培养液,添加10种因子刺激EPSCs生长,促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持E... 目的通过优化技术流程,探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法首先通过优化人源EPSCs的分离酶,运用改良的无血清培养液,添加10种因子刺激EPSCs生长,促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持EPSCs干性和增殖性,延缓EPSCs的分化和成熟。进一步优化差速离心的条件,高效高纯度提取人源的EPSCs-Exo。对人皮肤组织进行免疫荧光染色溯源EPSCs;对分离的EPSCs进行Western blot和免疫荧光染色检测其表面多个标志物;对EPSCs-Exo从形态、粒径大小、多个胞内和膜上标志物进行鉴定。结果人皮肤组织分层表达表皮细胞的标志物,EPSCs高表达整合素α6(integrin-α6)、整合素β1(integrin-β1)、P63蛋白(P63)、细胞角蛋白19(CK19)等标志物,EPSCs上清液超速离心后的透射电镜显示茶托状结构,粒径大小检测直径介于30~150 nm,蛋白印迹显示Tsg101、CD9、CD63(溶酶体相关膜蛋白3)呈阳性,Calnexin、GAPDH呈阴性。结论该研究成功在体外分离培养了人源EPSCs并获得人源EPSCs-Exo。 展开更多
关键词 外泌体 人表皮干细胞 超速离心 再生医学
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