血液安全与保障——军事医学科学院输血研究进展

"血液安全及保障"是个永恒的主题,军事医学科学院从建院之初到现在的60年间,开展了包括血液采集、检验,血液筛查、制备、储存、运输、输注及新型血源开辟等多个方面的研究.从20世纪50年代初的血浆代用品开始,先后在输血传播(病毒)传染病的检测、相关灭活方法与装置、临床输血安全、血液制品与代用品及其新型血液成分等方面均取得了良好的进展,形成了一系列理论、技术、产品、装置与标准,力求为形成整体、灵活、精确、高效、优质的安全血液供应链提供科技支撑.

系统管理原理在医学科研项目管理中的应用

医学科研项目管理的全过程是一个流程，即：前期管理一中期管理一后期管理，这三个阶段构成了一个复杂的管理系统，在这个系统的运行过程中应注意：第一，要明确医学科研项目管理的系统特征，即集合性、层次性、相关性；第二，按照系统的整体性原理把握正确的选题方向，搞好项目论证；第三，按照系统的动态性原理实施动态管理，做好课题实施过程的中期管理；第四，按照系统的综合性原理加强项目结题与产出成果管理的衔接。

异种输血——猕猴受输猪红细胞的初步研究

本研究的目的是改造猪红细胞(pRBC)表面抗原,使之与灵长类动物相容,以探讨异种输血的可能性。结合使用α半乳糖苷酶(AGL)酶解和甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰改造猪红细胞表面异种抗原,并输注给猕猴,观察pRBC在猕猴体内活存时间及安全性;使用免疫抑制剂(蛇毒因子CVF和地塞米松)延长pRBC在猕猴体内的存活时间;建立失血性贫血猕猴模型,观察输注pRBC治疗失血性贫血猕猴的可能性。结果表明:AGL酶解能够去除猪红细胞表面主要异种抗原(α-Gal抗原),减弱其与猕猴血清的凝集反应,酶解技术与mPEG修饰技术结合可以使猪红细胞与猕猴血清更为相容。异种输血试验表明,双修饰的pRBC在猕猴体内存活时间为12小时,使用免疫抑制剂后,可延长至40小时;pRBC在猕猴体内8小时的存活率为38%,在输注pRBC的8小时内,失血猕猴的血红蛋白和红细胞压积可维持在失血前的正常水平。结论:改造后的pRBC可安全地输注给猕猴,改善失血猕猴的贫血症状,提示用猪红细胞进行异种输血是可能的。

美军野战输血保障现状及特点分析

本文通过分析美军野战输血保障体系发展历程、体系组成与运转,总结美军野战输血保障计划的特点,以期为我军野战输血保障体系的发展和完善提供借鉴。

猪红细胞血型抗原修饰异种输血的研究进展

异种器官移植所取得的突破性进展为异种输血的研究带来了曙光。人与猪的红细胞的血清学和生物化学特性有许多相似之处 ,因此猪就成为实现异种输血最具可能性的红细胞供体。猪红细胞上存在异种抗原 ,包括αGal抗原和non αGal抗原。αGal抗原和人血清中天然存在的抗αGal抗体结合后引起的免疫排斥反应在抗体介导的凝集反应中起主要作用。但是non αGal抗原和人血清中天然存在的抗non αGal抗体结合引起的免疫排斥反应作用也不能低估。经特定修饰、改造以后的猪红细胞 。

转基因动物在输血医学中的应用

转基因动物技术是在动物整体水平研究和表达目的基因的生物技术 ,其基本特点是 :分子及细胞水平操作 ,组织及整体水平表达 ,是常规分子生物学理论和技术的拓展和延伸 ,也是现代生物高技术研究和开发的热点之一。本文简述了转基因动物在输血医学领域的应用及其发展前景 ,包括利用转基因动物生物反应器制备人血浆蛋白和人血红蛋白。

猪红细胞表面抗原化学修饰后应用于异种输血的初步体外研究

目的使化学修饰的猪红细胞(pRBC)呈现出与人红细胞(hRBC)相似的血清学特性,减弱或消除人体对pRBC的免疫排斥。方法采用双修饰法即rSα-GalE酶解法(100U/mL的rSα-GalE处理)修饰改造pRBC表面的Gal抗原,再用mPEG包裹法(3mmol/L的mPEG-BTC)修饰遮蔽pRBC的non-αGal表面抗原。结果修饰后的pRBC与人混合血浆的盐水交叉配血试验为阴性;修饰后pRBC的结构、功能等指标基本正常。结论经rSα-GalE和mPEG双修饰法修饰改造的pRBC呈现出与hRBC相似的血清学特性。

输血及细胞治疗的可视化评价技术研究

输血医学已正式成为我国临床医学二级学科,对输血医学科研能力和水平提出了更高的要求,输血医学科研工作已成为输血医学学科发展的内在动力。近年来我国输血科研工作取得了显著的成绩,但与其他学科相比,还有一定的差距。如何培育输血医学新的增长点是广大输血医学科研工作者需要思考的问题。当今生命科学研究从以免疫学、分子生物学为主导的经典科学向前沿学科、高新技术相交叉融合的方向拓展,可视医学、大数据、

干细胞与再生医学研究及其产业化前景

再生医学是在生命科学、材料科学、计算机技术等众多学科交融渗透的基础上发展起来的，这一新兴技术领域涵盖了干细胞与克隆技术、体细胞重编程技术、组织工程技术、组织器官代用品、异种器官移植等多项现代生物技术，其研究与应用将给因疾病、创伤、衰老或遗传因素所造成的组织器官缺损或功能障碍的修复及再生治疗带来希望。

基因工程α-半乳糖苷酶的制备及其性质研究

在获得可分泌表达α 半乳糖苷酶基因工程毕赤酵母菌株的基础上 ,尝试了基因工程α 半乳糖苷酶在 5L发酵罐中的表达以及从发酵液中纯化α 半乳糖苷酶的研究。在 4L无机盐培养基中接种 0 .4LpPIC9K Gal GS115培养物 ,最终得到 3 .5L发酵液。离心所得上清中总蛋白含量为 2 .1g L。根据发酵液中目的蛋白含量高、杂质少等特点 ,设计了如下的纯化流程 :离心→超滤→阳离子交换层析→脱盐→浓缩。纯化后电泳银染结果呈单一蛋白带 ,总回收率 41%。通过测定米氏常数等生化性质对重组酶进行鉴定后 ,完成了人B型红细胞的酶解实验。结果表明 ,从发酵液中纯化的α 半乳糖苷酶可将B型红细胞改造成O型红细胞。本研究同时在数量和质量上为α 半乳糖苷酶在众多领域的广泛应用奠定了基础。

氧化苦参碱大鼠肠道吸收机理及吸收部位的研究

目的探明氧化苦参碱在大鼠肠道各区段的吸收动力学特征、吸收部位及吸收机制,以期对药物长效缓释制剂的设计提供重要依据。方法采用大鼠在体肠灌流吸收实验,研究了氧化苦参碱的吸收部位和吸收动力学特征。结果氧化苦参碱在肠道的吸收呈现一级吸收动力学特征且吸收机制为被动转运。药物在小肠部位吸收良好,吸收速度按空肠、回肠、十二指肠、结肠的顺序依次下降,吸收速率常数依次为0.237、0.225、0.200和0.062h-1。结论氧化苦参碱的吸收窗比较长,适于制备缓释给药系统。

甲氧基聚乙二醇遮蔽红细胞表面抗原制备通用型血液的初步研究

目的 :探讨mPEG遮蔽红细胞表面抗原、制备通用型血液的可能性。方法 :使用mPEG修饰人红细胞 ,观察其对红细胞的影响。结果 :随着mPEG剂量的增高 ,红细胞的A、B和D抗原逐步减弱。在一定浓度下mPEG修饰不影响红细胞的形态、结构、功能及变形性 ,然而高浓度的mPEG修饰可能会使红细胞寿命缩短。结论 :尽管还有很多问题需要解决 。

成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞团的研究

体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向胰岛样细胞分化,从正常成人骨髓中分离MSC,在含10％胎牛血清的αMEM培养基中对其进行纯化和扩增,用bFGF,EGF等因子诱导MSC向nestin阳性的祖细胞(NIP)分化;用高糖无血清培养基和β细胞调节素、尼克酰胺等诱导NIP向胰岛样细胞分化,用RT-PCR法检测诱导前后nestin,ngn3,IPF-1,胰岛素,胰高血糖素基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样的细胞团;免疫组织化学法检测诱导前后nestin,胰岛素,胰高血糖素,生长抑素蛋白的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况。结果表明MSC经第一阶段的诱导后可分化成NIP,继续诱导6d后变圆的细胞逐渐增多,并聚集成团,双硫腙染色阳性,免疫组化实验证明经两阶段诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素,放免分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素,糖反应性较弱。以上结果表明成人骨髓间充质干细胞在体外可以被诱导分化为胰岛样细胞团,这将为解决糖尿病细胞治疗所面临的供者细胞不足、移植排斥反应等问题提供一个新的方案。

血液替代品基质聚合牛血红蛋白制备方法的研究

目的 建立合适的以聚合的牛血红蛋白 (Hb)为基质的血液替代品的制备方法。方法 用乙醇醛聚合牛Hb ,用电泳和HPLC检测聚合程度、超滤去除大于相对分子质量 (Mr) 10 0 0 0 0 0的大分子和小于 10 0 0 0 0的小分子 ,用生理溶液平衡后 ,检测其生物学活性和流体力学特性。结果 牛Hb被有效聚合、超滤后 ,Mr超过 5 0 0 0 0 0的组分还占 4.6 % ,32 0 0 0的占 7.3% ,6 40 0 0～5 0 0 0 0 0的组分占 88% ;牛Hb在聚合后氧亲和力、血氧饱和度和溶液的溶氧量基本保持不变 ,其溶液黏度低 ,近似牛顿液体。结论 牛Hb经乙醇醛聚合后 ,Mr分布、生物学活性和流体力学特性理想 。

新型冰冻红细胞洗涤机洗涤效果的研究

目的研制一种全自动、封闭式,体积小、重量轻,洗涤程序设计简单的新型冰冻红细胞洗涤机。方法全血采自健康献血者,ACD抗凝,离心获浓缩红细胞,加入甘油到终浓度为40%,-80℃保存。42℃条件下冻融红细胞,利用自行设计的透析式新型冰冻红细胞洗涤机,使用3种自动化洗涤程序洗涤红细胞,直至可输注。结果洗涤后红细胞形态正常,3种程序洗涤后红细胞的回收率(%)分别为69.73±8.36,85.09±6.03和88.43±4.72;红细胞血红蛋白的回收率(%)分别为45.30±2.66,70.80±3.76和81.26±5.55;洗后上清液中游离血红蛋白的含量(g/L)为0.20±0.08,0.14±0.03和0.25±0.13,采用单因素k水平方法对数据进行统计学分析,得出了最佳洗涤程序。结论该新型冰冻红细胞洗涤机采用优化的洗涤程序,洗涤后的冰冻红细胞达到了国家的质量标准。

纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究

目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0—1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性。结论纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性。

原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究

本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化。利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞。结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D600为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时。纯化后α-半乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg。该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞。结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶。

PEG修饰牛血红蛋白的计算机模拟研究

对αβ二聚牛血红蛋白晶体结构的分析和氨基酸残基溶剂可及表面积的计算表明 ,牛血红蛋白表面Lys上的氨基适合进行聚乙二醇 (PEG)修饰 ,对其修饰不会影响携氧能力 ,在此基础上设计了连接物连接PEG和牛血红蛋白。分子模拟研究结果显示PEG修饰牛血红蛋白产物是无免疫原性的。