HPLC/ICP-MS在环境样品的痕量元素形态分析中的应用

综述了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(HPLC/ICP-MS)的最新进展和工作特点,介绍了该技术在环境样品分析中的应用概况、接口类型和应用同位素稀释技术进行元素形态分析等。

广防己配伍黄芪肾毒性的代谢组学研究

[目的]利用代谢组学技术研究大鼠口服广防己及其配伍黄芪水煎液后尿液代谢图谱的变化,探讨黄芪配伍广防己对肾脏的减毒作用。[方法]雄性wistar鼠24只随机分为正常对照组、广防己组、广芪组,每组8只。广防己组按8.1g/kg,广芪组按9.1g/kg灌胃给药,正常对照组灌服等体积蒸馏水。连续给药4w后,收集大鼠24h尿液,测定尿液1H-NMR谱;取血做BUN、SCr检测;取肾脏行组织病理学检查。[结果]给药4w时,广防己组BUN、SCr显著升高(P<0.01),肾组织呈现明显的病理改变;广芪组SCr水平较广防己组明显降低(P<0.05),肾组织病变范围及程度较广防己组轻。尿代谢图谱经主成分分析表明,广防己组尿中柠檬酸、2-酮戊二酸、马尿酸盐、葡萄糖含量降低;TMAO、肌酸.肌酐含量升高。广芪组上述代谢物的变化呈不同程度地减小。[结论]广防己给药4w可造成肾功能的明显损害,配伍黄芪有一定的对抗其损伤的作用。

电感耦合等离子体质谱法测定人血浆中20种微量元素

建立了人血浆样品中微量元素的ICP-MS测定方法。分析了100名健康成人和50名健康儿童血浆样品的20种微量元素,给出了参考值范围。该方法检出限为0.0001-1.60μg/L;精密度（RSD）介于0.78%-4.27%;多数元素回收率在100%±10%之内。方法简便（正常人血浆经超纯水,硝酸,TritonX-100,正丁醇稀释后直接测定其中的微量元素）,快速,样品用量少（血浆0.2mL）,可作为人体内多种微量元素的监测方法,同时为人血浆中微量元素正常值范围的确定提供了参考依据。

HPM对大鼠大脑结构及其神经递质的影响

目的探讨S波段高功率微波(HPM)辐射对大鼠皮层形态结构及其氨基酸类神经递质的影响。方法采用2～90mW/cm2S波段高功率微波辐照Wistar大鼠,通过苏素素—伊红染色(HE)、甲苯胺蓝染色和电镜观察大脑皮层的形态结构改变;采用高效液相色谱仪检测10和50mW/cm2照后6h和1d大脑皮层中4种氨基酸(谷氨酸、天门冬氨酸、γ氨基丁酸和甘氨酸)含量的变化。结果平均功率密度10,50和90mW/cm2S波段高功率微波可引起大脑皮层神经元固缩、深染,尼氏体减少;突触结构模糊,囊泡堆积;髓鞘融合、解离等。10和50mW/cm2组照后6h大脑皮层上述4种氨基酸含量均显著增高(P<0.01);而照后1d仅见γ氨基丁酸和甘氨酸含量仍较高(P<0.01)。结论S波段高功率微波辐射可引起大鼠大脑皮层神经元尼氏体、突触结构和髓鞘等损伤及氨基酸类神经递质代谢紊乱。

液相色谱-质谱联用方法用于严重急性呼吸系统综合症冠状病毒结构蛋白质的研究

通过高效液相反相色谱、毛细管反相色谱 -串联质谱联用方法对SARS病毒攻击细胞的研究 ,鉴定出了N、S和M 3种SARS结构蛋白质 ,并准确测定了N蛋白质的分子量。由分子量结果和生物信息学推断的N蛋白质的理论分子量比较 ,可以确定N蛋白质不存在常见的磷酸化修饰和糖基化修饰或含量很低。进一步的研究表明 :N蛋白质可能存在降解现象 ,其降解机理尚需探索。另外 ,通过对样品直接酶切后进行两维毛细管分离和串联质谱鉴定与对样品先进行分离 ,然后再进行毛细管反相分离 串联质谱鉴定方法比较 ,表明两种方法在蛋白质组学研究中各具优缺点 。

蛇足石杉碱丙的结构鉴定

目的 研究石杉科植物蛇足石杉Huperziaserrata (Thunb .)Trev .的生物碱成分。方法 采用各种色谱技术进行分离纯化 ,经光谱数据分析鉴定其结构。结果 从蛇足石杉中分离得到一个生物碱单体。结论 该化合物为一具三环结构的新的lycodine型生物碱 ,命名为蛇足石杉碱丙 (huperzinineC)。

青蒿素的红外光谱定量测定

青蒿素的红外光谱定量测定军事医学科学院仪器分析中心北京１００８５０刘炳玉，田惠君，崔进，宋占军青蒿素是从中药黄花蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）中提取出的有效化合物。具有抗疟［１］、抗血吸虫、抗病毒与增强机体免疫等作用。文献报道青蒿素的检测方法...

采用活体成像技术监测肿瘤生长及转移模型的建立

目的采用活体成像技术监测稳定高表达荧光素酶报告基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长及转移情况,为肿瘤治疗的药物研发提供新的有用工具。方法采用lipofectamine2000介导的基因转染方法,将pcDNA3·1/Luc载体转染小鼠高转移乳腺癌细胞株4T1、EMT-6及结肠癌细胞株CT26,经G418抗性筛选及有限稀释法获得可稳定高表达荧光素酶的单克隆细胞;MTT法测定各转染细胞对不同化疗药物的抗性,并采用活体成像的方法检测各转染细胞在小鼠体内的成瘤和转移。结果获得了可稳定高表达荧光素酶基因的单克隆细胞株,该单克隆细胞株具有与亲本细胞系相同的对化疗药物的敏感性;将单克隆细胞株植入小鼠皮下,可采用活体成像技术准确监测肿瘤细胞体内生长及转移。结论采用活体成像技术构建的肿瘤动物模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。

蛇足石杉新碱的结构鉴定

目的 研究石杉科植物蛇足石杉Huperziaserrata (Thunb .)Trev .的生物碱成分。方法 用各种色谱技术进行分离纯化 ,经衍生物制备和光谱数据分析鉴定其结构。结果和结论 从蛇足石杉中分离得到一新的faucettimane型生物碱 ,命名为蛇足石杉新碱 (neohuperzinine)。

微丝相关新蛋白hHBRK1相互作用蛋白质的鉴定

为了鉴定hHBRK1的相互作用蛋白,通过DNA重组构建重组表达质粒pGEXhHBRK1,并以谷胱甘肽Sepharose4B亲合层析法,获得纯化的重组融合蛋白GSThHBRK1.以小鼠心肌组织为研究对象,采用GSTpulldown技术结合Western印迹法,证实hHBRK1与小鼠心肌肌钙蛋白TEa亚型(EacTnT)相互作用.结果提示,hHBRK1与EacTnT结合,可能参与心肌微丝的聚合,为小鼠cTnT众多的剪接体,提供了一种可能的功能定位.

正电子发射扫描仪和回旋加速器装置环境影响评价

本文以CTI公司生产的RDS 111型回旋加速器和配套的PET装置为例 ,依据其放射性源项特点 ,评价了该装置正常和非正常运行状况下对环境的影响。

HER-2/neu配体结合区2蛋白的甘露糖化修饰

目的 :建立一种蛋白质甘露糖化修饰的方法。方法 :用离子交换层析和钴亲和层析法 ,纯化重组HER 2 /neu配体结合区2 (LBD2 )蛋白 ,并将纯化后的LBD2蛋白进行甘露糖化修饰。新合成的LBD2拟糖蛋白经质谱法检测后 ,用间苯二酚 硫酸法进一步鉴定。结果 :纯化后LBD2蛋白的纯度可达 90 %。新合成的LBD2拟糖蛋白在质谱图上呈现相应于甘露糖修饰后蛋白质分子量的预期峰形。经间苯二酚 硫酸法检测 ,结合于LBD2蛋白上的化学基团为糖分子。结论 :获得了LBD2拟糖蛋白 。

凋亡相关蛋白(eIF-5A)——双向电泳分离、编码基因克隆和表达、多抗制备

蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在E.coli中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白.

CUEDC2与雌激素受体β相互作用并抑制其转录活性

目的:探索未知功能蛋白CUEDC2对雌激素受体(ER)β转录活性的调控,为进一步阐明CUEDC2在乳腺癌发生发展中的作用提供线索。方法:运用双荧光报告系统检测雌激素受体的转录激活活性,运用GST pull-down技术检测CUEDC2与ERβ的相互作用,同时外源过表达CUEDC2及ERβ,通过Western印迹检测CUEDC2对ERβ表达水平的影响。结果与结论:CUEDC2能够与ERβ相互作用并抑制ERβ的转录活性,但其对ERβ的表达水平没有影响。

细胞凋亡研究中的一些热点问题

本文评述了当前细胞凋亡研究中存在的普遍问题和主要热点领域 ,并重点论述了半胱天冬酶 - 3( caspase- 3)和 Bcl- 2之间的相互关系 ,对细胞凋亡调控研究的现状以及以凋亡机制中关键性蛋白为靶标的新药设计等热点领域最新进展 .

荧光素酶标记的BEL-7405细胞体内外成像及肿瘤动物模型建立

目的筛选表达荧光素酶(luciferase)基因的人单克隆肝癌细胞系,用活体成像技术(bioluminescentimaging)在细胞及整体动物水平检测其发光能力,为监测肿瘤生长和转移建立一种新的肿瘤动物模型。方法构建表达荧光素酶基因的真核表达载体并将其转入肝癌细胞(BEL-7405),用G418筛选稳定表达荧光素酶的单细胞克隆,在体外用活体成像技术评价其稳定发光能力。BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体内观察肿瘤的生长及转移情况。结果在肝癌细胞中获得稳定表达荧光素酶的克隆,利用活体成像技术可检测到细胞克隆发光。将稳定表达荧光素酶的克隆皮下接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长过程,肿瘤发光随着观察时间的延长而增强,但是没有观察到肿瘤转移的现象。结论本研究筛选得到了稳定表达荧光素酶的肿瘤单克隆细胞系,结合活体成像技术,建立了一套新的能够用于活体内监测肿瘤生长的研究方法。

带CT影像融合的双探头符合线路ECT环境影响评价

目的 评价ECT显像采用的18F等核素标记的药物对周围环境和人员的影响。方法 设定职业照射剂量约束目标值为 5mSv/a ,公众照射的剂量约束目标值为 5 0 μSv/a。通过分析环境放射性污染源项 ,估算工作人员和公众的受照剂量 ,来评价装置的屏蔽设计的可行性和ECT扫描操作程序的合理性。结果 从事不同工种的工作人员(注射、摆位、控制 )的年受照剂量介于 0 1～ 1 5mSv ,公众的年受照剂量不会超出 3 μSv。 结论 屏蔽设计合理 ,操作程序可行。

甘油醛-3-磷酸脱氢酶与人脑胶质瘤的相关性研究

目的探讨甘油醛-3-磷酸脱氢酶在神经胶质瘤中的表达及其临床意义。方法选择1999年11月-2004年1月手术切除,经病理证实的胶质瘤标本51例(胶质瘤组)、脑膜瘤9例(脑膜瘤组)、垂体瘤5例(垂体瘤组)。根据WHO2000年分级标准,胶质瘤组Ⅱ级胶质瘤16例(星形细胞瘤13例、少突胶质细胞瘤1例、室管膜瘤1例、混合性星形-少突胶质细胞瘤1例);Ⅲ级胶质瘤17例(间变性星形细胞瘤9例、间变性少突胶质细胞瘤7例、间变性室管膜瘤1例);Ⅳ级胶质瘤18例(均为胶质母细胞瘤)。脑膜瘤组为Ⅰ级脑膜瘤6例(纤维型脑膜瘤),Ⅱ级脑膜瘤3例(非典型性脑膜瘤)。垂体瘤组中垂体生长激素/催乳素细胞腺瘤1例,垂体催乳素细胞腺瘤1例,垂体多激素细胞腺瘤3例。采用免疫组化方法检测脑肿瘤组织中甘油-3-磷酸脱氢酶的表达程度。结果(1)胶质瘤Ⅱ～Ⅳ级标本免疫组化染色均呈阳性反应,脑膜瘤、垂体瘤和正常对照组则为阴性反应。(2)不同病理分级的胶质瘤标本中甘油醛-3-磷酸脱氢酶表达水平各异,其中胶质瘤Ⅱ级者甘油醛-3-磷酸脱氢酶阳性细胞检出率为12.8%,Ⅲ级22.9%,Ⅳ级44.5%,三者间差异具有显著性意义(P<0.05);而且甘油醛-3-磷酸脱氢酶阳性细胞检出率与胶质瘤的病理分级呈线性正相关(r=0.606,P<0.05)。结论甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白表达水平的增高在胶?

NMR谱在确定克罗烷二萜立体构型中的运用

１９－去甲基克罗烷（１９－Ｎｏｒ－ｎｅｏｃｌｅｒｏｄａｎｅ）二萜的化学结构较为复杂，含有多个手性碳。本文对此类化合物进行了系统的核磁共振（ＮＭＲ）谱研究，首次提出运用Ｈ－６、Ｈ－１０及Ｃ－６，Ｃ－１０的化学位移（δ）值推测这类二萜化合物的绝对构型，并从理论上对此实验结果进行了论证。运用这一方法，推证了两个新化合物庐山香科素丁（ｔｅｕｐｅｒｎｉｎＤ１）和穗花香科素（ｔｅｕｐｏｎｉｎ２）的立体构型，与圆二色散（ＣＤ）光谱法及Ｘ射线单晶衍射法所得结果完全一致。