人型结核杆菌全染色体DNA探针鉴别结核杆菌和其它分枝杆菌的研究

诊断结核病和其他分枝杆菌病的许多细菌免疫学传统方法敏感性低,而且烦琐费时。随着分子生物学和基因工程技术的发展,DNA 探针已成为结核病快速诊断和分枝杆菌分类、鉴定的一种敏感方法。目前全染色体 DNA 探针已能够鉴别非同源性和同源性低的菌种。本文介绍在不同杂交温度下应用 DNA 斑点杂交技术鉴别人型结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis)

人型结核杆菌克隆DNA探针的制备及其应用的研究

用限制性内切酶ＰｓｔⅠ消化人型结核杆菌Ｈ３７ＲｖＤＮＡ，与质粒ｐＵＣ１９ＤＮＡ连接后转化大肠杆菌，经同位素３２Ｐ标记的人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ全染色体ＤＮＡ探针筛选出６个阳性克隆（ＭＴ１～６），其中克隆ＤＮＡ片段ＭＴ２（４．２Ｋｂ）、ＭＴ４（３．５Ｋｂ）和ＭＴ５（３．０Ｋｂ）标记成探针，检测了２２种分支杆菌标准株和１５株人型结核杆菌临床分离株以及２种非分支杆菌，其杂交结果完全相同，与人型结核杆菌及其临床分离株杂交阳性，与牛型结核杆菌、卡介苗、堪萨斯分支杆菌、鸟分支杆菌、胃分支杆菌、龟分支杆菌和戈登分支杆菌ＤＮＡ有交叉杂交，与其它１２种分支杆菌以及大肠杆菌、星状诺卡氏菌不杂交。克隆ＤＮＡ探针可能成为分支杆菌分类、鉴定的一种新工具。