活性污泥高质量RNA快速提取方法研究

通过比较RNA产量、纯度、降解程度、特定基因的扩增能力、微生物多样性等评价指标,考察和探讨了5种不同RNA提取方法对活性污泥总RNA提取效果的影响并最终建立了一种快速、有效的活性污泥RNA提取方法,即在TENP和PBS洗涤沉淀污泥的基础上,分别采用溶菌酶和TRIzol裂解活性污泥细菌、氯仿去除细菌裂解液中的蛋白和大部分DNA、异丙醇沉淀核酸和DNase I水解残留DNA后,最后进一步用离心柱纯化RNA.结果表明,这种方法可以有效提取高质量的菌群RNA,不仅提取的RNA总量多(每g污泥可提取169.6μg RNA)、纯度高、降解程度低、完整性好、具有丰富的生物多样性,而且可同时进行16SrRNA和amoA基因的RT-PCR扩增反应;与其它方法相比,性价比高,具有明显的优越性,适用于活性污泥RNA的大量提取,同时,T-RFLP结果证明RNA提取方法对分析样品的微生物种类和丰度分析结果影响较大,不同的RNA提取方法所获得的微生物群落基因多样性及其种类、丰度均不同.本研究建立了一种快速、有效的高质量RNA提取方法,将在监测活性污泥菌群动态变化、菌群代谢功能学、微生物群落芯片等研究上具有重要意义.

水环境中细菌浓集回收方法建立

目的合成新型载正电荷材料氢氧化镁铝,并组建浓集过滤系统和方法,回收水环境中的细菌。方法利用化学合成方法合成正电荷材料—氢氧化镁铝,通过研磨制成滤料,利用扫描电镜和能谱技术分析滤料的粒径、表面状态及成分,设计制作用于吸附浓集水中细菌的过滤装置,并建立水中细菌浓集、回收系统和方法。结果所制备的滤料为Mg∶Al=2.41∶1的二元混合金属氢氧化物,结构为片层状与理论一致;滤料颗粒直径250μm左右,比较均匀。建立的细菌浓集、回收系统和方法能够滤除>95%的水中细菌,细菌回收率>90%,处理水样可以达到15 L以上。结论合成的氢氧化镁铝及建立的浓集回收方法能够很好的回收水环境中细菌。