诱导多功能干细胞在口腔医学的研究进展

体细胞在特定因子作用下可重编程为诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),因其不受伦理学等方面的限制,成为干细胞领域的一个研究热点。i PSCs在再生医学领域有着广泛的应用前景,因此学者们展开了其对人体各组织、器官再造的应用探索。近年来发现i PSCs在口腔再生医学领域具有极大的应用价值,本文对i PSCs在口腔医学中的研究进行综述。

维生素C对兔骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨维生素C（vitamin C,Vc）对兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成脂分化能力的影响。方法以兔BMSCs为实验对象,添加0~150μg/ml不同浓度的Vc处理后,进行成脂诱导,镜下观察诱导4 d、7 d、10 d、14 d、21 d的脂肪形成情况,并利用油红-O染色提取法检测其脂肪含量,实时荧光定量PCR（q PCR）法检测成脂相关转录因子PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA表达的变化。结果相比未添加Vc组,不同浓度的Vc均能增加BMSCs成脂量和成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达。其中50μg/ml Vc处理组OD值高达1.373±0.099,高于其他组（0.720±0.011、0.879±0.023、0.915±0.159、1.088±0.066、0.908±0.162）,差异有统计学意义（P〈0.01）,而该组PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达最高水平分别为5.82±0.24、5.41±0.42、5.14±0.54,与其他组差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 Vc可以促进MSCs的成脂分化且最佳浓度为50μg/ml。

牙周膜再生方法主要研究进展

由于牙周炎患者自身的牙周膜干细胞（periodental ligament stem cells,PDLSCs）再生能力降低[1],进而分化能力下降,因此增加牙周受损区域具有再生能力的细胞数量是解决问题的关键。

BPI-BD3融合抗菌肽修饰C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响

目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡萄球菌制造感染创面。造模后,随机均分为3组每组10只,T组尾静脉注射p Adxsi-BPIBD3转染后的C3H10T1/2细胞,C组注射未转染的C3H10T1/2细胞,N组注射等量PBS。通过大体观察、痂下细菌计数、测定创面残留面积、HE染色等来评价BPI-BD3修饰的C3H10T1/2的促愈效果。结果与其余两组相比,T组痂下菌量较少(P<0.05),且T组愈合较快,7、14d时,创面残留面积与其余两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与其余两组相比,T组炎症较轻、表皮生长较快。结论 BPI-BD3修饰的C3H10T1/2可以促进金黄色葡萄球菌所致的小鼠感染创面的愈合。

利用骨髓间充质干细胞膜片原位构建“三明治”样组织工程牙周膜的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSC细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4和12周取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察牙周膜的再生情况。结果相比单纯胶原膜组和空白对照组,实验组在牙根与牙槽骨间形成了清晰的软组织间隙,且有类Sharpey纤维存在,即形成了功能性牙周膜。结论细胞膜片-胶原膜-细胞膜片的"三明治"样夹层结构可较好地促进牙周膜再生。

人β-防御素3与杀菌/通透性增加蛋白重组腺病毒载体及其转染C3H10T1/2细胞的构建

目的构建人β-防御素3(h BD3)与杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的重组腺病毒载体p Adxsi-BPIBD3,并转染鼠胚胎间充质干细胞系(C3H10T1/2),观察融合蛋白的表达。方法酶切原始质粒,得到BPI-BD3片段,连接到p Shuttle-CMV得到p Shuttle-BPI-BD3,验证后将插入片段转移至p Adxsi载体构建重组腺病毒质粒,线性化后转染HEK293细胞,扩增纯化后,TCID50测定重组腺病毒滴液。p Adxsi-BPI-BD3及空载体p Adxsi(作为对照组)转染C3H10T1/2。RT-PCR、Western blot检测BPI-BD的表达;MTT法检测其对细胞增殖的影响。结果成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,纯化后病毒滴度达1.2×1010pfu/ml。p AdxsiBPI-BD3转染C3H10T1/2后,RT-PCR、Western blot结果显示,BPI-BD3融合蛋白表达成功。MTT结果显示,转染的C3H10T1/2生长无明显影响(P>0.05)。结论成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,且转染C3H10T1/2后可稳定表达BPI-BD3融合蛋白,为进一步研究应用抗菌肽BPI-BD3奠定基础。

兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究

目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(r BMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势。方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养r BMMSCs,采用简单制备方法构建r BMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察,MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况。结果:成功分离r BMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的r BMMSCs;RT-PCR结果显示,与r BMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn。结论:r BMMSCs细胞膜片相比普通培养的r BMMSCs,在组织工程应用中更具优势。

PAA-CS超吸水海绵应用于喂服华法林大鼠拔牙创模型的止血效果

目的探讨PAA-CS超吸水海绵应用于口腔拔牙创的优势。方法建立对照组(A组)SD大鼠拔牙创模型和华法林组(B组)SD大鼠凝血功能异常拔牙创模型,以纱布棉球做阴性对照对拔牙创进行止血,比较PAA-CS超吸水海绵与纱布棉球的止血效果。结果 B组凝血酶原时间(s)较A组显著延长[(19.73±2.74)vs(10.04±0.95),P<0.05],INR值增大(3.49 vs 1)。A、B两组中,PAA-CS超吸水海绵止血时间均少于纱布棉球,差异有统计学意义(P<0.05);A组止血后无继发出血;B组应用纱布棉球止血后有4只继发出血。结论成功建立了因喂服华法林而导致凝血功能异常的大鼠拔牙创模型,PAA-CS超吸水海绵的止血效果明显优于纱布棉球。

重组人BD3-BPI的内毒素中和活性及其在高盐环境中抗菌活性的稳定性

目的：验证重组人BD3-BPI（rhBD3-BPI）是否具有内毒素中和活性，研究其在高盐环境中是否能保持抗菌活性。方法：根据内毒素标准品绘制内毒素活性标准曲线，将100 μL梯度稀释的rhBD3-BPI-与100 μL 10EU／mL脂多糖（LPS）混匀，37℃水浴60min，同时设标准对照（只含10EU／mL LPS的标准品溶液），并以无热源水作为空白对照，采用基质显色法进行鲎试验测定LPS的活性；将6×10^8 CFU／mL的革兰阳性和阴性标准菌株及临床分离的多药耐药菌株接种于含1mg／mL rhBD3-BPI和0～250mmol／L不同浓度NaCl的液体细菌培养基中，37℃培养3h后用10mmol／L磷酸钠按1：1～1：1000的比例稀释，铺LB培养基平板，37℃过夜培养，观察各平板菌落生长情况，计数并计算杀菌率。结果：在5EU／mL的标准内毒素体系中，当rhBD3-BPI的浓度高于4μg／mL时即开始表现出一定的内毒素中和活性，当rhBD3-BPI的浓度分别为16、32 μg／mL时，其内毒素中和率分别为23％和88％，随后rhBD3-BPI对内毒素的中和活性趋于平稳，50 μg／mL的rhBD3-BPI对所有受检菌均表现出100％的杀伤效应。当NaCl浓度低于150mmol／L时，rhBD3-BPI对各受检菌的杀菌活性均未受明显影响；NaCI浓度升高至150-200mmol/L，rhBD3-BPI对各受检菌的杀菌活性有所下降，但其杀伤率仍在90％以上；当NaCl浓度高于200mmol／L时，盐浓度对rhBD3-BPI杀菌活性的影响才较为明显，但即使NaCl浓度达到250mmol／L，rhBD3-BPI的杀菌活性仍保持在85％以上。结论：rh-BD3-BPI具有内毒素中和活性，在高盐环境中具有良好的抗菌活性稳定性。