电穿孔法转化大肠杆菌TG1的条件优化

研究了质粒pFab74X经电穿孔转化大肠杆菌TG1菌株的影响因素 ,并优化其转化条件。电场强度和脉冲时间的影响较为复杂 ,两者适当组合才可获得高转化效率。此外 ,采用对数生长早期的细菌 。

HIV-1整合酶的纯化及活性检测

含整合酶基因的重组质粒 pET p31在E coliBL2 1(DE3)中以包含体形式高效表达HIV 1整合酶 (p31蛋白 )。初步纯化的包含体用 8mol/L尿素变性溶解 ,经阳离子交换剂柱层析和分子筛柱层析纯化 ,并通过梯度透析的复性过程去除尿素 ,获得可溶性及高纯度 p31。测定证实 ,复性后的 p31蛋白呈现良好的 3′加工。

影响HIV—1整合酶活性因素的探讨

目的：探讨HIV－1整合酶活性的影响因素，优化其活性测定条件。方法 以同位素标记的寡核苷酸链为底物，体外模拟HIV－1病毒DNA整合过程，检测HIV－1整合酶的3'端加工，链转移和去整合活性，并考察HIV－1整合酶活性测定中，二价高子、酸碱度、温度和时间等的影响。结果 Mn^2+对整合酶活性的辅助作用，明显强于Mg^2+，而3'端加工反应对二价离子的依赖性较小。酸碱度对各种反应的影响较大，温度和时间影响较小。结论 整合酶活性检测的最佳反应条件为pH7.0-7.5,37℃，15mmol/L M^2+及反应时间1h。