军事医学科学院免疫学研究的发展历程

军事医学科学院的免疫学科经历新、老几代科学家艰苦创业、锲而不舍、开拓创新、奋力拼搏,已走过60年的风雨历程.伴随中国社会、政治及经济领域的发展,军事医学科学院免疫学科的发展由建院初期的抗感染免疫已经向多学科广泛交叉、渗透的方向拓展,形成了分子免疫学、免疫药理学、中药免疫学、化学免疫学、肿瘤免疫学、免疫遗传学、移植免疫学、输血免疫学等多种免疫学相关学科.目前,新一代科学家继承老一代科学家的光荣传统,正瞄准国际前沿,为取得更大的科研成就、为中国科学事业的发展而努力奋斗.

北京地区儿童生活方式、免疫状态及ORMDL3基因SNPs与哮喘发生的相关性研究

目的分析ORMDL3基因的SNP rs7216389,rs7216558在中国北京地区儿童中的基因型频率,并调查其与儿童哮喘间的相关性。综合ORMDL3基因相关SNPs、儿童生活方式、IL-4、总IgE和特异性IgE所反映的免疫状态进行与儿童哮喘的相关性分析。方法采用病例-对照研究的方法,通过《国际儿童哮喘及过敏研究(ISSAC)问卷》收集生活方式信息;对聚合酶链式反应(PCR)产物进行序列分析得到SNPs的基因型;酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-4水平;免疫测定法测得儿童总IgE水平;放射性过敏原吸附试验法(RAST)检测特异性IgE水平。使用多元Logistics回归分析ORMDL3基因相关SNPs、生活方式、免疫状态与儿童哮喘的相关性。结果共收集到北京地区220名哮喘患儿及208名对照儿童的血液样本及相关信息。ORMDL3基因SNPs(rs7216389,rs7216558)在病例与对照组中无差异(P>0.05)。哮喘家族史与过敏性哮喘相关(P<0.05),而哮喘家族史、患儿年龄、采暖方式、家庭吸烟习惯、总IgE水平与非过敏性儿童哮喘显著相关(P<0.05)。结论在北京地区,ORMDL3基因SNPs(rs7216389,rs7216558)与儿童哮喘非显著相关。遗传因素与过敏性哮喘显著相关;而在非过敏性哮喘患儿中生活方式及免疫应激状态与哮喘相关,反映了除遗传因素以外,生活方式、免疫状态也对儿童哮喘具有重要影响。

以BMSCs为基础构建组织工程骨修复种植区骨量不足的实验研究

目的评价以骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)为基础构建组织工程骨修复种植体周围骨缺损的成骨效果。方法在3只犬双侧下颌前磨牙区各植入2颗种植体,分为对照组和实验组,每组6颗种值体;在种植体远中制备骨缺损,对照组每侧骨缺损区随机植入富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)和实验组成骨诱导培养BMSCs复合PRP。分别于移植后1、3个月取材,行大体、影像学及组织学观察。结果 1个月后,实验组可见较多的骨基质,较少的胶原纤维。实验组骨密度值大于对照组(101±8.99)vs(93±9.81),差异有统计学意义(P<0.05)。3个月后,实验组可见较多的哈弗系统,实验组与对照组骨密度值变化不大(100.75±12.05)vs(105±11.58),差异无统计学意义。结论以BMSCs为基础的组织工程骨能在种植体周围较好地成骨。

治疗性抗体的基础研究

抗体的靶向性提供了一个改进治疗制剂选择性的方法 .由于大部分抗原均可诱生抗体 ,因此抗体应用的潜力是巨大的 .临床上正用于治疗肿瘤 ,病毒感染 ,自身免疫病 ,中毒性休克 ,再狭窄 ,Rh溶血症和抗移植排斥等 .但单克隆抗体的临床应用受一定限制 ,主要障碍是诱导产生人抗鼠抗体(HAMA反应 ) ,肿瘤参入量低 ,亲和力低和半衰期短等 .然而 ,利用分子生物学技术能克服这些障碍 。

2011年第二届亚太地区高原医学会议在西宁召开

第二届亚太地区高原医学会议于2011年8月20日至23日在青海西宁隆重召开，来自中国、美国、印度、日本、尼泊尔、巴基斯坦、澳大利亚、韩国、瑞士等国家的高原医学领域的专家代表共计200余人参加了本次大会。

第六届国际高原医学与低氧生理学大会记事

今年8月，第六届国际高原医学与低氧生理学大会在我国青藏高原的西宁和拉萨成功举办。这是该学科的大会首次在中国召开，是首次由青海和西藏有关单位联合承办国际会议，也是首次“在真正的高原讨论高原问题”(国际高原医学会主席Peter语)。由于本次会议内容丰富，地点特殊，参会人数达300余人，其中外宾167人。

干细胞基础研究的新进展（上）

本文综述了有关“干细胞基础研究的新进展”。内容新颖，可读性强，有很大参考价值。由于篇幅有限，分别在本刊第五、六期登载。

干细胞基础研究的新进展（下）

本文综述了有关“干细胞基础研究的新进展”。内容新颖，可读性强，有很大参考价值。由于篇幅有限，分别在本刊第五、六期登载。

蓖麻毒素A链与底物作用的结构基础及其解毒剂的研究进展

蓖麻毒素是从植物蓖麻籽中分离得到的一种Ⅱ型核糖体失活蛋白,其A链(RTA)为效应链,具有N-糖苷酶活性,通过催化28SrRNA在S/R结构域第4324位脱去一个保守的腺嘌呤,使核糖体60S亚基失活,从而阻断蛋白质合成途径,引起细胞死亡。RTA因其高细胞毒性,常常用于制备免疫毒素药物,尤其在恶性肿瘤的生物治疗上具有诱人的应用前景;或可能被用作恐怖袭击的生物战剂。本文对RTA与底物相互作用的结构信息及其解毒剂进行综述。

hIL-6与其受体作用的结构基础及拮抗剂的研究进展

通过对大量的分子生物学实验及晶体衍射结果的分析 ,从分子水平揭示人白细胞介素 6(hIL 6 )与其受体相互作用的结构模式及结合表位 .hIL 6属于促红细胞生成素受体超家族 ,首先和hIL 6受体α低亲和力结合 ,两者形成的复合物再与hIL 6受体 β(gp130 )的胞外区相互作用形成高亲和力三聚体 ,但是hIL 6不能单独和gp130结合 ,需要借助于hIL 6受体α的桥梁作用才能将二者联系起来进而促进六聚体的形成 .hIL 6是一种能够介导细胞表面信号转导 ,调节机体免疫及造血干细胞增殖和分化的细胞因子 ,许多疾病的发病机理及发展进程都和hIL 6过表达有关 .基于对hIL 6与其受体相互作用方式的探究 ,为hIL 6小分子拮抗剂的药物设计提供了理论模型 ,在此基础上已研究开发了许多不同种类的hIL 6新型分子拮抗剂 ,其中部分拮抗剂已应用于临床指导 .

人骨髓间质干细胞体外扩增和向成骨细胞分化的实验研究

骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcell,MSCs)是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞 ,在体外不仅可分化为间质类细胞 ,而且可以分化为非间质细胞。本研究探讨人骨髓间质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向成骨细胞诱导分化的条件。利用密度为 1.0 73g/ml的Percoll分离骨髓的单个核细胞 ,以含 10 %胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs ,细胞纯度可达 95 %左右。取第二代和第三代的MSCs ,以含有不同浓度的抗坏血酸、β 磷酸甘油、地塞米松的诱导培养基向成骨细胞诱导 ,诱导后的细胞呈现典型的成骨细胞样改变 ,免疫组化技术显示其I型胶原染色阳性 ,ALP染色阳性 ,表明MSCs在体外具有向成骨细胞分化的潜力。

玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化的初步研究

目的 :研究玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化。方法 :用双向电泳 (2DE)分析正常组、内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS ;静脉注射 )组、玄参 (灌胃给药 )组、LPS(静脉注射 ) +玄参 (灌胃给药 )组之间的血清蛋白质组表达差异。结果 :①LPS致内毒素血症大鼠的血清在 2DE胶上 16个蛋白点 (xPr)出现非常明显的含量变化 ,与正常组比较 ,LPS组的xPr16 ,xPr19的点容量值均极显著降低 ,xPr1,xPr2 ,xPr3,xPr4 ,xPr5 ,xPr6 ,xPr7,xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr18,xPr2 3的点容量值均极显著增高。②LPS +玄参组与LPS组比较 ,LPS引起增高的xPr1,xPr6 ,xPr7,xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr18,xPr2 3的点容量值均显著降低。玄参在xPr1,xPr8,xPr11,xPr12 ,xPr18均表现对LPS显著的交互作用。LPS +玄参组与正常组比较 ,其中xPr8,xPr9,xPr11,xPr12 ,xPr14 ,xPr2 3蛋白点已被明显调节到正常状态 ,但是xPr18的点容量值显著低于正常组 ,xPr1,xPr6 ,xPr7的点容量值仍显著高于正常组。③玄参与LPS两因素对xPr5 ,xPr10 ,xPr19,xPr2 0 ,xPr2 1,xPr2 2均有明显的交互作用。④在玄参组 ,xPr13,xPr2 0 ,xPr2 1,xPr2 2的点容量值均比正常组显著增高 ,xPr10 ,xPr15的点容量值均比正常组显著降低 ,这

肿瘤坏死因子基因克隆表达及其抗瘤活性的研究

本文根据已发表的肿瘤坏死因子(TNF)氨基酸序列和核苷酸序列,用大肠杆菌偏性密码人工合成全基因,并在大肠杆菌中表达,表达量占总菌体蛋白的22～33%,均为可溶性TNF·菌体裂解液经抗TNF 单抗亲和柱纯化后得到SDS—PAGE 上分子量为17KD 的单带蛋白,比活性1～4×10~7u/mg。体外细胞毒试验表明:部分人肿瘤细胞系例如HL-60、Molt-4、OVCAR-3等对TNF 很敏感;部分肿瘤细胞例如KG_1、H7402等对TNF 呈中等敏感;也有部分肿瘤细胞对TNF 不敏感。从白血病患者周血来的原代白血病细胞对TNF 也呈现不同敏感性。TNF 与各种化疗药物,如阿霉素(AD)、更生霉素(KSM)等,或某些细胞因子,如γ-干扰素(IFN-γ)等联合应用时,对肿瘤细胞的杀伤有协同作用。裸鼠移植瘤模型上也观察到不论瘤内局部注射还是腹腔注射,均能明显抑制肿瘤生长,如果TNF 与化疗药物合用则抑瘤效果更好。

CD3AK细胞过继免疫治疗的实验研究

目的: 分析抗CD3分子的单克隆抗体 (mAb)yCD3的免疫学特性和生物学活性, 观察其激活的免疫活性细胞CD3AK体外及动物体内的抑瘤作用。方法: 用流式细胞术(FCM)测定yCD3的特异性, 以及CD3AK细胞的免疫表型和产生细胞因子的情况。用 3H -TdR法测定yCD3对淋巴细胞转化的作用; 乳酸脱氢酶法 (LDH)测定CD3AK细胞的体外细胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型, 观察静脉注射CD3AK细胞后肿瘤生长的情况、转移灶数量和小鼠存活天数。结果: yCD3与T细胞呈特异性反应, 5μgyCD3可竞争抑制 70%的标准抗CD3抗体与细胞表面CD3分子的结合。yCD3刺激外周血淋巴细胞增殖的有效浓度为 8μg/L, 并与IL- 2、抗CD28抗体有协同作用。活化的CD3AK细胞中CD3+、CD8+和CD25+细胞增多; 产生IL- 2和IFN γ的CD3+细胞均有不同程度的增加, 在抗CD28抗体协同刺激下分别增加 3. 29和 2. 47倍。当效靶细胞比为 80∶1时, CD3AK细胞对体外肿瘤细胞杀伤的百分率为 57. 54%。分组观察荷瘤动物, CD3AK细胞治疗组的抑瘤率为 33. 17%, 对小鼠肿瘤肺转移的抑制率为39. 70%, 与LAK细胞联合治疗的疗效更显著。结论: yCD3可活化T细胞, 诱导的CD3AK细胞在体外及动物体内显示抑制肿瘤的作用, 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗中具有重要意义。

银屑病患者血清TNFα浓度及其在皮损中的表达研究

目的:评价TNF- α及其受体在寻常型银屑病血清中水平及组织中的分布及其在病理机制中的作用。方法:应用双抗体夹心ELISA方法及免疫组化检查检测16例寻常型银屑病患者及10例正常人血清中TNF -α浓度和皮肤标本中TNF -α及其受体的分布。结果:正常人与银屑病患者血清TNF -α的浓度分别为: ( 1. 823±4. 133 )pg/ml和(83. 643±110. 104)pg/ml,P=0. 02849。16例患者Z12抗体及抗p55受体抗体组化结果均为阳性,其广泛表达于表皮全层及真皮浅层; 10例正常人中Z12抗体阳性者2例,抗p55受体抗体阳性者5例,呈散在、少量分布于表皮基底层及真皮浅层。结论:TNF-α水平在寻常型银屑病患者血清及皮肤组织中均高于正常人。

阿的平保护纹状体神经元免受热处理损伤作用的研究

目的探讨预先使用阿的平对热处理所致的纹状体神经元损伤的保护作用及其机制,为热环境致细胞损伤的干预和药物研究提供参考。方法采用培养的大鼠纹状体神经元,培养液中加入不同浓度的阿的平,给予43℃热处理1h。台盼蓝染色鉴定细胞坏死,活性Caspase3免疫染色和原位末端转移酶法评价细胞凋亡。结果热处理明显影响神经元存活,导致细胞死亡,其中主要由细胞坏死过程介导;单独的阿的平对细胞毒性作用较小,预先使用阿的平能够减少热处理引起的细胞坏死。结论阿的平对热环境致纹状体神经元的损伤有保护作用,这种保护作用主要通过减少细胞坏死过程介导。

结核分枝杆菌培养物不同组份蛋白质组研究

将结核分枝杆菌H3 7RV株在苏通培养基内 ,3 7℃培养 2 1d ,然后将培养物分成上清液(A)、细胞浆 (B)和细胞膜 (C)蛋白质样品。以pH3 0～ 1 0 0的IPG预制胶条等电聚焦电泳为第一向 ,SDS PAGE为第二向进行双向电泳 (2 DE)、银染。经扫描、计算机处理。A组份的部分蛋白质斑点采用质谱仪进行蛋白质鉴定。A、B和C 3个组份蛋白质斑点总数分别为 90 7、884和 6 81 ;3个组份蛋白质分子量分布基本相似 ,约 70 5 %～ 74 4%在 1 0～ 49kD之间 ;蛋白质等电点 (pH)A、B两组份分布基本相似 ,约 80 9%～ 83 5 %在pH3 0～ 6 4之间 ,而C组份pH7 6～ 1 0 0之间的蛋白质斑点数比A和B两组分略多 ;A、B和C 3个组份表达丰度较高的蛋白质斑点数占各组蛋白质斑点总数的比例分别为 7 8%、2 7 4%和 2 8% ,蛋白质等电点90 0 %均分布在pH3 0～ 6 4范围内。B组份蛋白质分子质量 73 1 %分布在 1 0～ 49kD之间 ,比A、B两组份略高。A组份 1 4个蛋白质斑点经肽质量指纹谱分析 ,其中 ,9个点有同源性的或推测的蛋白质功能 ,5个蛋白质功能不清楚。总之 ,初步获得了结核分枝杆菌H3 7RV株在上述体外培养条件下收获的培养物的上清液、细胞浆、细胞膜蛋白质组 2 DE图谱及其特点 。

自体骨髓间充质干细胞促进大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究

目的 观察自体骨髓间充质干细胞在神经再生室中的作用 ,探讨其作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法 成年Wistar大鼠 2 4只 ,随机分成 3组 ,每组 8只 ,硅胶导管桥接右侧 13mm的坐骨神经缺损 ,A组在神经再生室内植入骨髓间充质干细胞 +ECM (extracellularmatrix ,ECM )凝胶 ;B组植入ECM凝胶 ;C组注入生理盐水。术后 12周 ,进行大体观察及坐骨神经功能指数测定、电生理检测、神经组织学等观察。结果 A、B两组均有再生神经生成 ,但A组各项检测指标均优于B组 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论 自体骨髓间充质干细胞能够促进周围神经再生 ,可以作为种子细胞应用于外周神经组织工程。