抗CUEDC2单克隆抗体的制备及小鼠组织CUEDC2表达谱的检测

目的制备特异性识别CUE结构域蛋白2(CUE domain containing 2,CUEDC2)的单克隆抗体(mAb),并检测CUEDC2蛋白在小鼠组织中的表达。方法在大肠杆菌中融合表达GST-hCUEDC2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备mAb。采用Western blot方法检测mAb的特异性以及小鼠组织中CUEDC2蛋白的表达。结果获得了可同时识别人源和鼠源CUEDC2 mAb,利用此mAb检测小鼠组织CUEDC2蛋白的表达水平,发现该蛋白的表达在不同小鼠组织中存在差异。结论制备的CUEDC2 mAb特异性好,并可检测CUEDC2蛋白在小鼠组织中的表达,该mAb的制备为进一步研究CUEDC2的功能奠定了基础。

SOX4单克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞表达分析中的应用

应用分子生物学技术,构建了含SOX4编码序列的原核表达载体,在大肠杆菌DH5α中获得了GST-SOX4融合蛋白的可溶性表达。应用谷胱甘肽-Sepharose 4B对重组蛋白进行了纯化,利用纯化的融合蛋白免疫小鼠,制备了可特异性识别SOX4的单克隆抗体。通过间接ELISA法鉴定了抗体的效价为1×10-5,Western blotting分析证实了抗体的特异性。结果显示,该抗体可识别细胞内外源性过表达及内源性的SOX4蛋白。在培养细胞系、小鼠不同组织中,SOX4蛋白的表达存在显著的差异。本研究制备的SOX4单克隆抗体具有良好的特异性,为进一步研究SOX4在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。

p53 K370位乙酰化调控紫外线诱导的p53活化及细胞凋亡反应

目的探讨p53 K370位乙酰化修饰反应在紫外线B(UVB)诱导p53活化及细胞凋亡反应中的作用。方法体外培养野生型和p53基因缺陷型小鼠胚胎成纤维细胞(wt-MEFs和p53-/-MEFs)。以UVB为刺激源,双荧光素酶报告基因法分析wt-MEFs细胞中p53的转录诱导活化情况;Western印迹检测UVB诱导p53在K370位发生乙酰化修饰反应及p53总蛋白表达情况;构建p53点突变体K370R并在p53-/-MEFs细胞中比较UVB诱导wt-p53和p53 K370R的转录活化情况及野生型和突变体蛋白介导细胞凋亡反应的差异。结果 UVB刺激wt-MEFs细胞后p53转录激活活性呈剂量和时间依赖性明显上调;同样条件下UVB能够有效诱导p53在K370位发生乙酰化修饰反应;p53 K370位突变后并不影响UVB刺激作用下p53的蛋白质稳定性,但其转录激活活性显著下降;同时K370位突变后能够有效抑制UVB诱导的细胞凋亡反应。结论 p53 K370位乙酰化修饰反应在UVB诱导的p53活化及细胞凋亡反应中具有重要作用。