抗人白细胞间素Ⅱ高效价多克隆及单克隆抗体的制备

采用不同免疫方案免疫家兔及小鼠制备抗人IL-2多克隆及单克隆抗体。其中以沙门氏菌体吸附方法效果最佳,其免疫效价比福氏佐剂方法高数倍、而抗原用量却仅为前者的1/4。选用强化加强免疫及细胞富集措施,并采用大鼠胸腺混合培养上清替代滋养细胞,一次融合获得106个阳性株。经过自然淘汰试检,筛选出18株稳定分泌抗人IL-2单克隆抗体的杂交瘤,其中未亚克隆化的原始孔细胞在体外连续传代2个月以上,仅三株出现抗体转阴现象。

介绍一种有效的拯救小鼠杂交瘤的方法:脾内接种法

在小鼠杂交瘤的制备、传代过程中，常遇到一些棘手问题；小到影响实验进展，大到细胞丢失：其中常见的是1．污染，包括支原体、细菌及真菌污染。在杂交瘤未冻存前，这些污染会造成很大的损失。2．有些杂交瘤复苏后不易存活。3．个别情况下杂交瘤增殖不良，不易向24孔板内扩增。腹腔接种在一定程度上可以解决这一问题，

抗人白细胞间素—2McAb亲和力排列及亲和指数的测定

利用蛋白浓度校正的ELISA稀释曲线快速确定了抗人白细胞间素-2(IL-2)单克隆抗体(McAb)的亲和力排列。该排列与用竞争ELISA测定的亲和常数(K_D值)相一致。为了更实际地确定McAb的用途,又用十二烷基磺酸钠(SDS)等解离因素,建立了反映 McAb在实际应用时亲和力变化强度的吸附-解离ELISA,测定McAb的亲和指数(ID)。根据亲和力排列和亲和指数可更准确地取舍McAb,供检测或亲和色谱使用。

用菌体作载体制备抗合成多肽片段的抗体

利用氨基酸合成仪合成蛋白多肽片段作为免疫原制备针对各种大分子的抗血清或单克隆抗体,不但可以避免目标抗原在来源及纯化上的困难,而且可以选择性制备具有预定表位特异性的抗体.在抗原结构与功能的分析研究中极为有用。然而,由于多肽片段分子量小,免疫原性弱,需要与大蛋白分子偶合后才能激发机体产生较高水平的抗体。

新型单克隆抗体

本文综述了单克隆抗体(McAbs)技术的最新进展。结合细胞杂交和基因工程的优势,开展了新型McAbs的研究,包括双功能抗体、嵌合抗体、新效能抗体及单域抗体(single domain antibodies)(dAbs)等。本文重点介绍了dAbS的制备、生物学性质及优缺点。制备dAbs新技术的出现是基于单独的重链可变区与抗原结合发生特异性反应,这种结合的紧密程度与整个抗体所起作用完全一致。这一重大发现是利用多聚酶链反应(PCR)促使目的基因在体外扩增的结果。使有可能从数以几十亿计的重链基因中,选择和复制编码具有结合位点的重链基因,并护它在细菌中克隆化,以产生不同的重链片段。每一克隆能制造由真核细胞生产转变为细菌生产,制造工艺较为简单,制造时间大大缩短(仅需数天),将结束了200年来由动物免疫产生抗体的历史。由于dAbd体积小(俗称小抗体),可以攻击实体瘤内的癌细胞和堵塞病毒上的深“峡谷” 位点,发挥整个抗体难以达到的效能。研制dAbs可能成为研究新药(生物弹头)和新的诊断制剂的基础,也可能为攻克病毒打开缺口。我们相信,随着单域抗体的崛起和不断完善,其应用前景是不可限量的,这将使McAbs技术的发展与应用更趋完善。

绿脓杆菌外毒素A的Ⅰ+Ⅱ区基因的克隆与表达

绿脓杆菌外表素Ａ是由６１３个氨基酸残基组成的单链杀细胞毒素；利用ＰＣＲ技术直接从绿脓杆菌染色体ＤＮＡ中扩增了外毒素Ａ的Ⅰ＋Ⅱ区的结构基因，通过酶切鉴定、ＤＮＡ序列分析，证实了克隆的基因片段为外毒素Ａ的结构基因；重组表达质粒经诱导表达后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了表达的产物为外毒素Ａ分子。对外毒素Ａ的Ⅰ＋Ⅱ区结构基因的克隆表达为疫苗研制、毒素类似物的制备以及导向药物的构建打下了基础。