缺氧对海马神经元培养的影响及巴曲酶的保护作用—HSP70的表达及细胞形态学的研究

本文采用新生大鼠海马神经元培养技术，以细胞形态学及ＨＳＰ７０免疫阳性细胞表达为指标，首次观察了巴曲酶对缺氧海马神经元损伤的直接保护作用。结果发现：在缺氧前０．５ｈ给予巴曲酶（０．５ＢＵ／ｍｌ），海马神经细胞存活率以及ＨＳＰ７０免疫阳性细胞率均明显高于缺氧对照组（Ｐ＜０．０１），而在缺氧前２４ｈ给予巴曲酶后，二者与缺氧对照组均无明显差别。表明：巴曲酶对缺氧海马神经细胞损伤有直接的保护作用，而且其作用与给药的时机有关。

在缺氧条件下培养的海马神经元形态结构及热休克蛋白(HSP)70表达变化及丹参的影响

在体研究曾发现在缺血再灌注模型中，丹参具神经保护作用。本文采用新生大鼠海马神经元培养技术，以细胞形态学及HSP70免疫性细胞表达为指标，首次观察了缺氧条件下培养的海马神经无形态结构及HSP70表达变化及丹参的影响。结果发现：（1）不论缺氧1h或2h，在培养的海马神经细胞中，有的细胞出现细胞体周围光晕消失，胞浆内颗粒变性，细胞膜肥厚、粗糙，轴突变粗、断裂，并且出现HSP70免疫阳性细胞；（2）缺氧1h组的海马神经细胞存活率及HSP70免疫阳性细胞率均显著高于缺氧2h组，（3）丹参组（在缺氧0．5h前给丹参100mg／ml（终浓度）的海马神经细胞存活率及HSP70免疫阳性细胞率均显著高于缺氧2h组。结果提示丹参具有直接的抗缺氧性神经细胞损伤的作用，减轻了缺氧所造成的神经细胞形态学上的改变。

原代培养神经细胞膜经N-甲基-D-天冬氨酸和MK-801作用后原子力显微镜观察

目的：对比观察正常培养皮层神经元在N－甲基－D－天冬氨酸（NMDA）及其受体拮抗剂－MK－801作用下膜表面三维构像形态的改变。方法：利用分辨率为0．1－0．01nm的原子力显微镜（AFM）对原代培养大鼠皮层神经细胞膜表面进行纳米尺度的扫描观测。结果：正常神经元膜表面光滑，起伏均匀，隆起的颗粒状蛋白密集，间隔规律。NMDA损伤后神经元破碎，崩解，膜失去连续性，NMDA＋MK－801作用下神经元膜皱折增加，边缘粗糙，起伏程度介于前两者之间，结论：（1）AFM具有分辨率高，制样简单特点，（2）AFM能细微地分辨损伤保护作用后引起的细胞膜表面三维形态改变。（3）NMDA作用后膜结构开始解体，膜蛋白颗粒聚集增大，脂质凹陷加深，间距增宽，表面粗糙度增加。