北京地区恒河猴试验性繁殖及部分生物学特性观察

本实验于1992年底开始，通过选种、选配，建立了一个11只雄猴，77只雌猴的恒河猴生产繁殖种群并对其繁殖性能进行了观察与研究。三年间，利用大笼群养的“后宫式”繁殖方法，母猴怀孕107例，流产11例，生产仔猴96只，离乳94只。平均妊娠率、产仔率、离乳率分别为51．44％、46．15％、97．92％。在“后宫式”群养方式繁殖成功后，我们又尝试了单笼饲养、定期交配的新的繁殖方法，当年投种9只母猴，怀孕7只，生产7只。怀孕率、生产率均为77．78％。在进行实验性繁殖的同时，对人工条件下饲养的恒河猴的部分生物学特性如妊娠期、月经周期、血液生理生化指标、生长特性等进行了观察、记录和统计。结果表明人工条件下饲养的恒河猴在每年11月至次年4月间交配，4月至9月分娩。恒河猴具有间情期，每年秋冬季发情，平均月经周期为28．31±2．82d（n＝70）。平均怀孕期为163．46±11.87d（n＝13）。本实验为人工繁殖恒河猴进而实现实验动物化积累了基础数据，为将来提供高等级的、遗传背景清楚的、高质量的实验猕猴奠定了工作基础。

动物鹦鹉热衣原体疫苗研究现状

鹦鹉热衣原体为多种人畜共患病的病原体。衣原体免疫学机制研究表明其主要引发Thl细胞调节的细胞免疫和体液免疫。减毒活疫苗、灭活疫苗的使用在一定程度上控制了其发病率。基因工程疫苗,如重组亚单位苗、核酸疫苗、细茵载体苗等也都在深入研究中。同时,人们也在筛选特异性的抗原,构建各种疫苗载体及选择免疫佐剂和免疫途径等方面做了大量的工作。

SARS-CoVS蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究

目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoVS1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western检测S蛋白的表达。结果:PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段,两片段插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染VeroE6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoVS蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。

汉坦病毒在原代人胚肾与人胚肺细胞中增殖及其特性的研究

近年来研究发现,汉坦病毒能在多种细胞株及人体细胞中增殖、适应.国内学者用人胚肺二倍体细胞(2BS)体外适应该病毒成功,但有关原代人胚肺、肾细胞的报道尚少.作者选用两株病毒及两种原代人胚细胞用于体外感染、观察,应用免疫荧光间接法及胶体金包埋前染色电镜技术对宿主细胞中增殖的病毒进行了动态观察及特异性定位研究,现报告如下.1 材料和方法1.1 细胞的分离和培养1.1.1 人胚细胞:取正常孕妇5—7个月水囊引产胚肾及肺组织,按常规方法分散细胞,5—7天后长满单层.1.1.2 非洲绿猴肾上皮细胞(VeroE6):由安徽省医学科学研究所倪大石惠赠.1.2

SARS-CoV-2亚单位疫苗制备及免疫原性初步研究

严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)自2019年年末出现以来,给全人类造成了严重的公共卫生事件和社会经济负担。本实验以SARS-CoV-2突变株XBB1.5的受体结合域(Receptor binding domain,RBD)序列为疫苗核心分子串联SARS-CoV-2的全长S蛋白制备了亚单位纳米颗粒疫苗。将S蛋白的6个氨基酸残基突变为6个脯氨酸残基,提高表达量和蛋白质分子的稳定性。而且将弗林酶酶切位点进行突变以增加蛋白质的稳定性。在羧基端串联昆虫铁蛋白的氨基酸序列,利用铁蛋白纳米颗粒多面体可结合抗原蛋白的特性,增加抗原递呈。在氢氧化铝和CpG1018双佐剂组合免疫小鼠后,可诱导小鼠产生针对SARS-CoV-2多种变异株的中和抗体,且可诱导小鼠产生了较强的细胞免疫和体液免疫。本研究表明,XBB1.5突变株RBD区域串联S蛋白全长序列及昆虫铁蛋白制备的纳米颗粒疫苗可以有效预防SARS-CoV-2变体,是一个很好的候选疫苗分子。

胶体金标法快速检测鼠疫F1抗体的现场应用

目的了解胶体金标快速检测试剂盒检测鼠疫FI抗体的现场应用。方法按鼠疫快速诊断盒(胶体金标法)的使用说明进行,并与间接血凝微量法(IHA)进行比较。结果检测了来自云南家鼠鼠疫流行区和非流行区血清共335份,检出腺鼠疫病人血清阳性32份,与IHA法结果一致。结论胶体金标鼠疫FI抗体快诊盒诊断鼠疫简便、快速、特异、敏感,便于现场鼠疫监测应用。

重组红火蚁毒素致敏原Sol i1的表达及活性分析

目的为研究红火蚁Solenopsis invicta Buren毒素蛋白致病分子机理,制备用于红火蚁蜇伤防治的制剂。方法本研究采用反转录PCR(RT-PCR)与套式PCR(nPCR)扩增出红火蚁体内毒素蛋白Sol i1全基因及其活性基因片段Sol i1a,进行测序与序列分析,构建重组质粒Sol i1-pET43.1a和Sol i1a-pET43.1a,经PCR、酶切和测序鉴定后转化BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot检测后,用亲合层析法纯化,并将纯化的重组蛋白通过动物试验进行了致敏活性分析以及过敏体质治疗研究。结果本研究克隆的Sol i1基因序列与GenBank中红火蚁序列同源性为99 %,原核表达预期大小的2种重组蛋白能与组氨酸单抗发生特异性反应,且具有较高的致敏活性和良好的免疫治疗效果。结论原核表达的2种重组蛋白Sol i1和Sol i1a具有良好的生物活性,为红火蚁蜇伤的致病机理和防治研究奠定了基础。

布鲁菌脂多糖的制备及其免疫效果的初步评价

为研究布鲁菌的一个毒力因子脂多糖的免疫保护效果,采用冷酚法提取脂多糖,并用凝胶过滤层析法对其进行纯化,采用滴鼻免疫和皮下注射两种途径免疫Balb/c小鼠,进而检测血清IgG抗体效价和脾中细胞因子IFN-γ的分泌情况。通过上述实验最终制备了较纯的脂多糖,以皮下注射10μg组血清IgG抗体效价最高,由此证明LPS具有一定的免疫原性。

应用高通量测序技术对蜱携带RNA病毒的检测研究

利用高通量测序技术,对来源于不同边境地区的蜱类进行宏基因组测序,对所携带的病原基因序列进行鉴定和分类。不经事先筛选,直接对含有未知病原体的蜱类样本提取核酸并进行高通量测序,对测序得到的数据采用与病原体数据库比对的方法进行潜在病原体筛查。结果显示,在4组样本中,有3组样本发现一种或一种以上的可疑病毒,且在2个样本中检测到致病性的发热伴血小板减少综合征病毒（SFTS病毒）及白蛉病毒。结果表明,高通量测序技术可以初步描绘蜱类所携带病毒的多样性,为口岸虫媒携带病原体快速筛查提供依据。

双价志贺菌苗滴鼻免疫对小鼠NALT、GALT和脾淋巴细胞的影响

本文是探讨滴鼻免疫对NALT、GALT和脾淋巴细胞中特异性抗体分泌细胞及淋巴细胞表型变化的影响。将Balb/c小鼠随机分为 3组 ,每组 2 0只。FSM 2 117或FS 5 416 4× 10 7CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔 2周 ,3次免疫后 7d活杀 ,分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP及MLN淋巴细胞 ,采用BA ELISPOT法检测其中特异性抗福氏、宋内LPSIgA和IgG分泌细胞 ;采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化。结果是两株菌苗经鼻内免疫都诱发了NALT、NP、GALT内 (PP、MLN、LPL )以及代表系统免疫反应的脾淋巴细胞中特异性抗福氏、宋内LPSIgA、IgG ASC的显著增加 (P <0 0 1) ;NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+T细胞显著增加 ,其中以CD4+T细胞增加为主 ;FSM 2 117免疫组的脾细胞中B2 2 0 +细胞显著增加 (P <0 0 1) ,而FS 5 416免疫组的脾细胞中CD3+T细胞显著增加 (P <0 0 1)。说明两株菌苗经鼻粘膜免疫均可诱导鼻粘膜局部、GALT及系统免疫反应的发生 。

双价志贺疫苗滴鼻免疫小鼠后粘膜免疫与系统免疫应答持续时间的观察

本文探讨双价志贺疫苗滴鼻免疫小鼠一段时间后,粘膜免疫和系统免疫应答的变化.将BALB/c小鼠随机分为三组,每组30只.PBS、FSM-2117和FS-5416(菌量为5×106、1×107、4×107和4×107CFU/只/次)经滴鼻途径免疫小鼠.间隔2周,4次免疫后7、30和90d活杀,收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清.采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内LPS IgA和IgG.结果是两株疫苗经鼻内免疫后,诱发鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内LPS IgA、IgG的显著增加(P＜0.01).特异性抗体水平虽然在免疫后的30、90 d明显下降,但仍明显高于PBS对照组水平.故认为两株双价志贺疫苗滴鼻免疫小鼠后能有效诱导粘膜免疫和系统免疫应答,并持续较长时间.

上呼吸道脱落细胞支原体抗原检测的临床意义

目的探讨呼吸系肺炎支原体感染的早期诊断。方法采用免疫荧光法（ＩＦＡ），检测呼吸系感染患者的上呼吸道脱落细胞肺炎支原体抗原和血清ＩｇＭ抗体。结果上呼吸道脱落细胞肺炎支原体抗原和血清ＩｇＭ抗体的阳性率分别为１７％和２０％，这些患者符合肺炎支原体感染的临床特点。结论上呼吸道脱落细胞肺炎支原体抗原的检测简单易行，可用于呼吸系肺炎支原体感染的早期诊断。

蒙古族人群病原体感染与高血压患病关系

目的探讨肺炎衣原体、肺炎支原体、幽门螺旋杆菌和柯萨奇病毒感染与高血压的关系。方法在蒙古族人群高血压现况研究基础上,选择767例高血压患者和762名血压正常者,进行病例对照研究;对研究对象有关危险因素进行问卷调查和身体指标测量,进行血脂、血糖、肺炎衣原体、肺炎支原体、幽门螺旋杆菌和柯萨奇病毒IgG抗体检测。结果病例组肺炎衣原体(40.6%)、肺炎支原体(18.3%)、幽门螺旋杆菌(56.3%)和柯萨奇病毒(41.4%)IgG抗体阳性率均分别高于对照组肺炎衣原体(36.8%)、肺炎支原体(18.0%)、幽门螺旋杆菌(53.0%)和柯萨奇病毒(40.9%)IgG抗体阳性率,但差异均无统计学意义(P>0.05);在调整心血管危险因素后,肺炎衣原体、肺炎支原体、幽门螺旋杆菌和柯萨奇病毒感染对高血压患病危险性影响差异均无统计学意义。结论肺炎衣原体、肺炎支原体、幽门螺旋杆菌、柯萨奇病毒感染与高血压危险性无明显关联。