A型肉毒神经毒素(BoNT/A)基因序列分析及其B细胞表位预测

比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结构的分析，综合预测BoNT／A的B细胞表位。结果表明，BoNT／A轻链的142-150、284-292区段，轻链的284-292，重链的440-450、465-480、538-549、699-710、751-760、1087-1095、1224-1231、1263-1270区段是B细胞表位优势区的可能性较大。多参数方案井结合不同软件综合预测BoNT／A蛋白的B细胞表位，为进一步实验鉴定BoNT／A的B细胞表位及其多表位疫苗设计和研究奠定了基础。

PCR合成的A型肉毒毒素重链C端结合区基因的高效表达与免疫原性分析

目的A型肉毒毒素重链C-端结合区(BoNT/A Hc-C)的PCR拼接合成、重组表达与免疫原性分析。方法经密码子优化软件对编码基因序列重新优化设计,以16条长片段寡核苷酸引物经重叠PCR合成BoNT/AHc-C基因片段,插入表达载体pET-His,再转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定和抗原性分析。结果表达工程菌裂解液经SDS-PAGE分析,重组蛋白约占细胞总蛋白的65%,为包涵体形式,经亲和层析一步纯化和柱上复性获得纯度大于95%的可溶性重组蛋白,Western blot和ELISA均证明,该重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清抗毒素有特异性结合反应,是BoNT/AHc-C抗原,且免疫小鼠可耐受10个LD50BoNT/A的攻击。结论所获重组BoNT/AHc-C蛋白具有良好的免疫原性,为研制基因工程疫苗奠定了基础。