DNA免疫激发针对肾母细胞瘤CTL效应初步研究

目的将鼠源肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的针对肾母细胞瘤CTL效应。方法人工合成WT1基因一段序列,含有HLA-A*2402锚定残基的9个氨基酸。构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/WT1y。免疫Balb/c小鼠,通过ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8;将分离的脾淋巴细胞与小鼠肾母细胞瘤细胞共培养,检测其体外溶解组织相容性抗原型别一致的外源性靶细胞能力。结果构建的重组质粒经测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(P<0.01);体外具有较强溶解靶细胞的功能。结论WT1基因的DNA疫苗初步研究具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路。

利用抑制消减杂交技术(SSH)研究与Ty21a免疫相关的基因

目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩阵技术,发现了7条与GenBank中已公布的表达序列标签（expressed sequence tag,EST）片段没有明显同源性,可能为Ty21a免疫相关的新基因。其中3条正在用RACE-PCR法进行获得全长cDNA的工作。结论:SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,Ty21a可诱导多种免疫相关新基因的表达。

双价痢疾菌苗不同途径免疫小鼠对脾细胞及GALT中ASC影响的实验研究

目的：观察侵袭蛋白表达阴性（FSM-2117）和阳性（FS-5416）的两株双价痢疾菌苗经不同途径免疫小鼠后，脾细胞和粘膜相关淋巴组织（gut associated lymphoid tissues，GALT）中抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）的变化，以探讨免疫途径及侵袭蛋白表达与否对痢疾菌苗免疫效果的影响。方法： BALB／c小鼠随机分为 3组，每组 20只， FSM－2ll7或 FS-5416 4 x10^7CFU分别经滴鼻、灌胃及肠内注射3种途径免疫小鼠，间隔2w，第3次免疫后7d活杀分离脾、小肠pp及MIN淋巴细胞，采用BA－ELISASPOT法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG分泌细胞。结果：滴鼻途径及小肠内免疫都能够诱生脾细胞特异性IgA-ASC、IgG-ASC显著升高（P＜0．01）；仅滴鼻免疫组Ipa+株较Ipa-株升高显著（P＜0．01）。滴鼻和小肠内免疫同时诱生肠GALT中派伊尔小结（Payer's patch,PP)和肠系膜淋巴结（mesenteric lymph node,MLN)淋巴细胞ASC显著升高（P＜0．05，P＜0．01），但株间比较无统计学差异。而同等剂量的灌胃免疫未能诱发脾细胞及GALT特异性ASC升高。结论：鼻粘膜和小肠内免疫可以有效地诱导脾脏和GALT淋巴细胞的免疫反应，且显著降低免疫原用量（本实验滴鼻剂量为常规灌胃的1/20），是一个安全有效的免疫途径。研?

布鲁菌免疫分子研究进展

布鲁菌病是布鲁菌引起的人兽共患传染病,包括7种21型,其中感染人的主要有牛、羊、猪布鲁菌3种,其免疫涉及体液免疫和细胞免疫。在布鲁菌的免疫过程中,先天性免疫应答主要通过补体、自然杀伤细胞、巨噬细胞、细胞因子等的参与。获得性免疫应答中,CD4+、CD8+、γβT细胞起重要作用。布鲁菌重组亚单位疫苗是近年研究的热点,而且发现的免疫分子也很多。文章围绕布鲁菌免疫机理、免疫相关分子进行探讨,为筛选疫苗候选分子奠定基础。

粘膜免疫细胞研究进展

人体粘膜面积大于 4 0 0M2 ,是机体与外界相隔的最大屏障。机体 95%以上的感染发生在粘膜或从粘膜入侵 ,是病原体入侵的最大门户 ,接触着大量种类繁多的抗原。粘膜内和粘膜下含有大量弥散的淋巴细胞 ,其数量相当于脾脏细胞数 ,或 4 0 %～ 50 %外周循环淋巴细胞数。粘膜免疫细胞不仅数量多 ,而且还有其独特性质。本文就粘膜免疫相关的细胞和分子简述其各自特点。

双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导粘膜与系统免疫反应

目的 :探讨双价痢疾菌苗滴鼻免疫后对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响。方法 :BALB/c小鼠随机分为3组 ,每组 2 0只 ,FSM 2 117或FS 5 416 4× 10 7CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔 2w ,3次免疫后 7d活杀 ,分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP及MLN淋巴细胞 ,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化 ;收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清 ,采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG。结果 :两株菌苗经鼻内免疫都诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA、IgG的显著增加 (P <0 0 1) ;NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加 ,其中以CD4+ T细胞增加为主 ;FSM 2 117免疫组的脾细胞中B2 2 0 + 细胞显著增加 ,而FS 5 416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加。结论 :两株菌苗经鼻粘膜免疫均可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生 ,鼻粘膜是一个安全有效的免疫途径。

双价痢疾菌苗株免疫小鼠后GALT中ASC的观测

为了观测两株菌苗ＦＳＭ－２１１７（Ｉｐａ－）、ＦＳ－５４１６（Ｉｐａ＋）免疫后所引起的肠粘膜相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）中的免疫反应，以小鼠灌胃免疫为模型，应用ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法检测了ＧＡＬＴ中诱导部位派伊尔小结（ＰＰ）、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）和抗原特异性抗体分泌细胞（ＡＳＣ），发现两菌苗株免疫小鼠后，ＰＰ结、ＭＬＮ中福氏、宋内氏抗原ＳＩｇＡ、ＩｇＧ抗体分泌细胞明显增加，尤以ＳＩｇＡ－ＡＳＣ为甚。株间差别无统计学意义。两株菌苗与对照组相比。

布鲁氏菌外膜蛋白免疫蛋白质组学方法的建立

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点经胶内酶切、肽提取后用基质辅助激光解析/电子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。每个蛋白点的肽质量指纹图谱用Mascot进行检索后,代表了12个开放阅读框。这些蛋白不全是外膜蛋白,还存在胞浆蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域,还有一个功能未知的蛋白。结论成功建立了布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路。

两株双价痢疾工程菌苗不同粘膜免疫途径的免疫原性

目的探讨免疫途径、接种剂量及侵袭蛋白表达对两株双价痢疾工程菌苗免疫效果的影响。方法小鼠分为滴鼻、灌胃和对照组 ,分别以不同剂量免疫 3次 ,间隔 2周 ,3次免疫后 7d收集血清、小肠、鼻咽、肺、阴道冲洗液 ,EL ISA法检测其中特异性福氏、宋内氏 L PS- Ig A和 Ig G。结果 4× 10 7CFU菌苗经鼻途径免疫即可诱导多个粘膜部位以及血清双价特异性抗体显著增高 ;菌苗剂量增加 2 0、2 0 0倍时经灌胃免疫诱发较为局限的粘膜特异性抗体增高。结论鼻粘膜免疫不仅诱导多个粘膜部位 (特别是生殖道 )以及系统免疫的抗体反应 ,是一个安全有效的免疫途径。

痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导不同部位淋巴组织的免疫应答

目的 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后，小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响。方法将Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为３组，每组１５只。舰疾菌苗株 ＴＩＭ－２１１７或 ＦＳ－５４１６，按 ５×10～6、１×１０～７、４×１０～７和４×１０～７ＣＦＵ／只滴鼻跟 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠４次涧隔两 ｗｂ。分离鼻相关淋巴组织（ＮＡＬＴ）、鼻通道（ＮＰ）及脾、小肠的ＰＰ结淋巴细胞。一部分细胞采用流式细胞术检测淋巴细胞表型的变化；另一部分细胞与全菌破碎抗原共培养，于不同时间点取出，提取ＲＮＡ做ＲＴ－ＰＣＲ。结果两株菌苗经鼻内免疫后，ＮＡＬ、ＮＰ和ＰＰ结的淋巴细胞中ＣＤ３Ｔ细胞显著增加，其中以ＣＤ４＋Ｔ细胞增加为主。ＴＳＭ－２１１７株免疫组的脾细胞中，Ｂ２２０＋细胞显著增加；而ＦＳ－５４１６株免疫组的脾细胞中，ＣＤ３＋Ｔ细胞显著增加。免疫小鼠的ＮＡＬＴ、ＮＰ和ＰＰ结淋巴细胞，在体外经抗原刺激后，均在不同时间出现ＩＦＮ－γ和ＩＬ-４ｍＲＮＡ的表达，ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ的表达在免疫前后无明显变化。结论痢疾菌苗经鼻粘膜免疫，可诱导不同粘膜部位及全身免疫应答的产生。

滴鼻免疫有效的诱导粘膜及系统免疫反应

为了探讨粘膜疫苗滴鼻免疫对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响 ,将BALB/c小鼠随机分为三组 ,每组 15只 ,FSM— 2 117或FS— 5 416 4× 10 7cfu/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔两周 ,4次免后 7天活杀 ,收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清 ,ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIg和AIgG ;分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP淋巴细胞 ,细胞中加入全菌破碎抗原共培养 ,于不同时间取出细胞 ,提取RNA做RT PCR。两株菌苗经鼻内免疫均诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA、IgG的显著增加(P <0 0 1) ;免疫动物的NALT、NP、PP结淋巴细胞在体外经抗原刺激后均在不同时间出现IFN γ和IL 4mRNA的表达 ,而TGF βmRNA的表达在免疫前后无明显变化。疫苗经鼻粘膜免疫可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生 。

不同表型双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后黏膜和系统记忆反应观测

目的 观测 5株 2类不同表型的双价痢疾菌苗滴鼻免疫后所引起的黏膜和系统的记忆反应 ,为痢疾菌苗的构建提供理论依据。方法 以小鼠滴鼻免疫为模型 ,3次免疫 (间隔 2周 )后 ,2 0周再次免疫 ,分别于 3次免疫及 2 0周加强免疫后第 7天 ,收取鼻咽、肺、小肠及阴道冲洗液和血清 ,应用ELISA方法检测福氏、宋内氏特异性抗体。结果 2类双价菌苗株滴鼻免疫 3次后 ,多个黏膜部位及血清均产生了抗原特异性sIgA、IgG ,较PBS对照组有明显升高 ;2 0周后再次加强免疫 ,仍可诱导黏膜及系统的免疫反应 ,但较 3次免疫后水平明显降低。结论 2株双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后可诱导多个黏膜及系统的特异性抗体产生 ,并可产生一定时间的记忆反应 。

双价痢疾菌苗免疫小鼠后抗体记忆反应的观测

目的 :FSM 2 117和FS 5 416是我室构建的具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株 ,前者不表达侵袭蛋白 ,无侵袭力 ,而后者表达侵袭蛋白 (Ipa) ,具有侵袭力。拟观测两株菌苗FSM 2 117(Ipa- )、FS 5 416 (Ipa+ )免疫后所引起的肠粘膜局部和系统中的免疫记忆反应 ,为研制痢疾菌苗提供理论依据。方法 :以小鼠灌胃免疫为模型 ,3次免疫后 ,间隔 3个月再次免疫 ,第 7天取血清和小肠冲洗夜 ,应用ELISA方法检测福氏、宋内氏特异性抗体。结果 :两菌苗株免疫组 ,血清中及局部抗原特异性sIgA、IgG抗体明显升高。两株菌苗与对照组相比 ,都具有显著差异。结论 :两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后 。

肠上皮间淋巴细胞的研究进展

肠上皮间淋巴细胞（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｉＩＥＬ）是位于肠上皮细胞间基侧膜表面的一类淋巴细胞，在粘膜免疫防御、口服免疫耐受形成等方面起着十分重要的作用，它们无论在结构、功能上还是在起源、发育、回归上都与一...

两种肠道侵袭性菌与小鼠小肠微皱褶细胞相互作用的初步研究

利用小鼠肠袢模型进行局部感染 ,在不同的时间取Peyer’s结对其进行扫描电镜和透射电镜的观察 ,并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明 ,鼠伤寒沙门氏菌 460 0 43和痢疾杆菌F2a 12两种肠道侵袭性菌与微皱褶细胞的粘附发生在局部感染 3 0min ,感染 60～ 90min在M细胞和淋巴细胞中可见到细菌 ,而在感染 6～ 8h后Peyer’s结中的细胞凋亡百分率与对照相比差异最为明显。提示 :鼠伤寒沙门氏菌 460 0 43和痢疾杆菌F2a 12均是借助于M细胞通过上皮屏障 。

肠粘膜上皮细胞在粘膜免疫调节中的作用

肠粘膜上皮细胞是调节宿主粘膜表面自然免疫与获得性免疫的主要细胞。近年来的研究证实 ,IECS 可以发挥多种免疫调节功能 ,如抗原提呈功能 ,分泌细胞因子 ,表达粘附分子等 ,本文重点介绍其分泌的几种细胞因子包括IL 1Ra ,IL 7,IL 8,TGF β 。

肠粘膜上皮细胞的免疫学功能

肠道是人体重要的消化和吸收器官，同时也是表面积最大的免疫器官，肠粘膜上皮细胞处于机体与外界抗原接触的第一线，表面表达一系列表面分子，在生理及病理情况下能分泌一系列细胞因子，在感染防御及抗原吸收、转运、提呈等方面具有重要作用，本文重点介绍肠上皮细胞的免疫学功能。

双价痢疾菌苗角结膜免疫豚鼠后泪液中特异性抗体的检测

目的 :研究痢疾杆菌侵袭蛋白与局部免疫反应的关系 ,为痢疾菌苗的研制提供理论依据。方法 :用表达和不表达侵袭蛋白 (Ipa+ /Ipa-)的两株福氏、宋内氏双价痢疾菌苗经角结膜免疫豚鼠 ,并分别用福氏、宋内氏毒株攻击 ,BA ELISA方法检测豚鼠泪液中特异性抗体升高情况。结果 :发现角结膜免疫后豚鼠泪液中特异性双价抗体水平较对照显著升高 ,差别具有统计学意义 ,Ipa+ 菌苗免疫组宋内氏抗体水平较Ipa-免疫组升高 ,差别具有统计学意义 ;攻击后 ,两免疫组局部抗体呈二次反应变化。结论 :侵袭蛋白的表达可加强痢疾菌苗诱导的局部抗体水平。两株双价痢疾菌苗均有较好的免疫原性。