以霍乱毒素重组B亚单位为佐剂的流感抗原滴鼻免疫效果研究

研究霍乱毒素重组B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,rCTB)为佐剂的流感抗原滴鼻免疫小鼠后,小鼠的体液免疫和局部黏膜免疫反应。三价流感病毒灭活抗原及裂解抗原按比例与rCTB配伍,滴鼻免疫小鼠,分析血清中IgG和IgM的动态变化,二免三周后,分析血清中HAI的变化,收集鼻、肺冲洗液,分析IgG和sIgA的变化。结果表明:全病毒组及rCTB+裂解抗原组各项指标变化较明显,小鼠血清IgG和IgM在二免三周后仍维持在较高的水平,而其他两组均呈下降趋势;全病毒组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度均高于rCTB+全病毒组(P<0.01),而rCTB+裂解抗原组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度明显高于裂解抗原组(P<0.01)。研究表明:以全病毒抗原及rCTB+裂解抗原滴鼻免疫小鼠,均可诱导小鼠产生较强的系统免疫反应和局部黏膜免疫反应。rCTB与流感裂解抗原配伍滴鼻,可提高抗原的免疫原性,增强机体的黏膜免疫应答反应。

mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用

目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用。方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RTPCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1。将所得重组质粒pcDNA3.1mCD1.1通过电穿孔法转至CHO细胞中,在含G418的的选择性培养基中筛选抗性克隆,利用RTPCR和流式细胞术对挑取的克隆进行mCD1.1表达的鉴定。将表达mCD1.1的细胞与新分离的肝脏和肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞进行共培养,并用丝裂霉素C抑制CHO细胞的增殖,然后利用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况;另外将表达mCD1.1的CHO细胞与淋巴细胞共培养后,分离淋巴细胞,然后用PEantiNK1.1和CychromeantiCD3对其进行标记,利用流式细胞术检测CD3细胞中NK1.1阳性细胞的比例。结果:通过RTPCR,得到mCD1.1的编码区基因,序列与预期相符;通过多次鉴定,证明筛选得到的细胞克隆可稳定表达mCD1.1;CHOmCD1.1细胞与新分离的淋巴细胞共培养,在有无LPS存在的情况下,均能刺激淋巴细胞发生增殖,并使CD3+细胞中NK1.1阳性细胞的比例增加。结论:表达mCD1.1的CHO细胞能够刺激NKT细胞增殖。

肉毒毒素及其检测方法研究进展

肉毒毒素是自然界中毒性极强的一类神经麻痹毒素,可引起人类和动物肉毒中毒。因其制备简单、毒性强,已被列为最具威胁的生物恐怖剂之一,同时也是重要的毒素战剂。其感染剂量极低,每个人都易感。肉毒中毒后,病情严重者一般2-3 d内即可能死亡。如采取正确及时的治疗,可使肉毒中毒死亡率降低,而快速检测方法的建立无疑是成功治疗的前提。本文就肉毒毒素及其检测方法做一综述。