微波辐射致小鼠GC-2spd细胞损伤效应研究

目的：探讨微波辐射对小鼠GC．2spd细胞的影响。方法：培养的GC-2spd细胞经平均功率密度为0、10、30mW／cm。微波辐射15min，于辐射后1-24h，应用MTF法、光镜、电镜、流式细胞术和ELISA法观测细胞增殖活力、细胞形态学和超微结构、细胞凋亡及cAMP含量的变化。结果：10、30mW／cm2微波辐射后1-24h（除30mW／cm2辐射后12h外），GC-2spd细胞增殖活力较对照组明显下降（P〈0．01或P〈0．05），光镜见部分细胞突起变短，数目减少，胞内空泡增多；辐射后6h，细胞凋亡率（％）明显增加（14．59±1．09、8．48±1．73傩4．56±2．09，P〈0．05或P〈0．01），电镜见细胞核染色质凝集边移或核膜破裂，内质网明显扩张；辐射后6h和24h，细胞内cAMP含量（nmol／g）明显降低（1．65±0．17、1．96±0．10 vs 2．77±0．24，2．13±0．33、1．69±0．27 vs 3．02±0．47，P〈0．05或P〈0．01）。结论：10和30mW／cm2微波辐射可引起GC-2spd细胞损伤，表现为细胞内cAMP含量降低，细胞增殖活力下降，细胞凋亡增加。

间充质干细胞治疗放射性肠损伤研究进展

放射性肠损伤是急性放射病的重要组织损伤类型,也是腹部肿瘤放疗引起的重要并发症之一。目前,对于放射性肠损伤尚无有效治疗措施。研发新的防治策略,对于改善肿瘤患者预后和生活质量具有重要意义。间充质干细胞是一种成体多能干细胞,实验药理学研究表明,间充质干细胞能够有效治疗放射性肠损伤,特别是基因修饰的间充质干细胞因具有干细胞治疗和细胞生长因子治疗的双重优势,并具有协同作用,这为急性放射性肠损伤的救治提供了新的途径和手段。本文对间充质干细胞对放射性肠损伤的治疗作用及其机制的研究进展进行简要综述。

利用组织芯片技术研究C57BL/6J和C3H/HeN小鼠放射性肺损伤进程差异及其机制

目的建立C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠放射性肺损伤进程相关组织芯片,并应用其研究FN、LN和a-SMA的表达变化及意义。方法采用20Gy60Coγ射线照射C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠复制动物模型,测定肺组织中羟脯氨酸含量,制备组织芯片,应用免疫组织化学(im-munohistochemistry,IHC)染色方法与图像分析技术定量检测纤连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和a-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,a-SMA)在放射性肺损伤进程中的表达变化。结果组织芯片制备成功,其HE和免疫组织化学染色结果与普通切片具有良好一致性。照射后1~6mC57BL/6J小鼠肺组织病变经历炎症期、增生期和纤维化期,胶原沉积增多,照后1~3mFN表达明显高于正常对照组,照后6m逐渐减少至正常,LN表达在照射后呈渐进性增加,a-SMA表达强于C3H/HeN小鼠;照射后1~6mC3H/HeN小鼠肺组织主要表现为间质性炎症改变,FN表达于照射后1~6m与正常对照组相比无明显变化,LN表达于照射后1~3m明显增强,6m逐渐减少。结论γ射线照...

S-HPM辐射致牛X,Y精子的损伤差异研究

目的探讨S-HPM辐射致X、Y精子的损伤及其差异。方法经流式分选得到高纯度的牛X、Y精子,经30 mW/cm2和100 mW/cm2的S-HPM辐射4 min,通过精子动态分析系统检测辐射后1 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h的X精子和Y精子的活动度的差别;吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色检测辐射后1 h、6 h、12 h和24 h的X精子和Y精子凋亡率的变化。透射电镜观察100 mW/cm2S-HPM辐射后4 h X、Y精子超微结构损伤程度的差异。顶体酸性磷酸酶染色检测辐射后1 h、6 h和12 h顶体功能的变化差异。结果经30 mW/cm2和100 mW/cm2的S-HPM辐射后,精子活动度均随时间延长呈降低趋势,X、Y精子活动度的降低未见显著性差别(P>0.05)。S-HPM辐射可致X、Y精子凋亡率增加,呈现Y精子重于X精子,100 mW/cm2重于30 mW/cm2的趋势,其中早期具有显著性差异(P<0.05)。超微结构显示S-HPM辐射后精子以头部病变为主,尾部病变不明显,Y精子损伤重于X精子。S-HPM辐射后精子顶体酸性磷酸酶含量降低,Y精子重于X精子,100 mW/cm2重于30 mW/cm2(P<0.05,P<0.01)。结论 S-HPM辐射后X、Y精子均发生损伤,以精子头部病变为主,精子顶体酸性磷酸酶含量降低,Y精子的损伤重于X精子。

RKIP介导的ERK通路在电磁辐射致海马神经元损伤中的作用

目的:研究电磁辐射对原代培养海马神经元Raf激酶抑制蛋白(RKIP)和磷酸化ERK表达的影响,应用MEK的抑制剂U0126探讨RKIP介导的ERK通路在辐射损伤中的作用。方法:体外培养原代海马神经元,采用X-HPM、S-HPM及EMP作为辐射源,分别建立3种电磁辐射细胞模型。通过免疫荧光标记、激光扫描共聚焦显微镜检测RKIP和磷酸化ERK的表达;利用AnnexinV-PI双标记、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与坏死率。结果:三种电磁辐射后海马神经元RKIP表达均减少,磷酸化ERK表达均增加,且胞核移位发生,辐射组间均未见明显差异;U0126预处理组较单纯辐射组神经元的凋亡与坏死率明显降低,但仍高于假辐射组。结论:RKIP介导的ERK通路过度激活是电磁辐射致海马神经元凋亡与坏死的重要机制之一,U0126对电磁辐射损伤具有一定防护作用。

微波辐射致学习和记忆损伤机制研究进展

微波（microwave）是指频率为300 MHz至300GHz之间的电磁波,目前广泛应用于无线通讯、雷达、医疗等领域。微波辐射生物效应和对健康影响引起了社会广泛关注,微波辐射可引起机体多系统改变[1-4],其中中枢神经系统是微波辐射最敏感靶点[5]。微波辐射可引起脑功能和组织结构改变,

严重急性呼吸综合征肺纤维化的病理过程初步研究

目的：探讨不同时间SAILS死亡患者肺纤维化的病变经历过程及特点。方法：以6例SAILS死亡患者（分别于发病后9，14，20，29，33。38d死亡）肺标本为对象，应用常规HE染色、三联染色、苦味酸-天狼猩红-偏振光法和电镜等技术方法，观察SARS肺组织的病理变化和纤维化的病理过程以及胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的变化特点、Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维分布规律及其超微结构变化。结果：SARS发病后于9—38d死亡的6例患者肺脏出现程度不等的成纤维细胞变化和纤维组织增生，其中2例（33，38d）发生典型的肺纤维化病变。肺间质组织和成纤维细胞变化可大致分为4种类型：成纤维细胞轻度活跃型，见于9，14d死亡例；成纤维细胞增生型，见于20d死亡例；纤维组织增生型，见于29d死亡例；纤维化形成型，见于33，38d死亡例。经三联染色和天狼猩红染色证实，纤维增生以胶原为主，其中Ⅰ型胶原增生较Ⅲ型胶原明显。结论：初步认为，肺脏4种类型病变本质上反映了SARS肺纤维化的发生发展过程，可能经历4个阶段，即：成纤维细胞轻度活跃期、成纤维细胞增生期、纤维组织增生期和纤维化形成期。SARS肺纤维化病变特点为：（1）纤维化出现较早（33d）；（2）纤维化病变呈进行性发展；（3）以Ⅰ型胶原纤维为主：（4）局灶性分布突出。

中子辐射致骨髓损伤及治疗研究进展

中子相对生物效应较高，能对机体产生十分严重的损伤。骨髓是中子辐射高度敏感的器官，低剂量中子照射即可对骨髓造成严重的辐射损伤，产生骨髓型急性放射病，出现外周血血象改变、造血细胞和骨髓基质细胞损伤等一系列改变。中子辐射致骨髓损伤治疗的难度大，以综合对症治疗为基础，细胞因子的适时应用及对极重度中子骨髓型放射病则实施造血干细胞移植。

高功率微波辐照对大鼠免疫组织基因表达的影响

目的:观察高功率微波辐照大鼠致淋巴结、胸腺基因表达谱改变情况,探讨电磁辐射非热效应分子作用。方法:微波接触剂量现场检测于2002-01/2005-05进行;高功率微波对大鼠免疫组织基因表达的影响实验于2003-12/2005-05分别在航天中心医院动物实验室和军事医学科学院放射与辐射医学研究所免疫学研究室完成。①采用德国Narda公司EMR射频电磁辐射分析仪,根据国家作业场所微波辐射卫生标准(GB10436-89)测定和评价该研究所近年(2002/2005)作业人员操作位的微波辐射强度,同时收集该所既往微波现场检测资料。②应用由上海沪晶生物科技有限公司生产的10003个基因的大鼠基因表达谱芯片(SBC-R-RC-100-10)检测10mW/cm2重复照射Wistar大鼠150min后1,3,7,14d的淋巴结、胸腺的基因表达谱改变情况。健康二级成年雄性Wistar大鼠34只,随机分为未照射对照(10只)和平均功率密度10mW/cm2照射(24只)2个组,重复照射150min(照射30min/d,连续照射5d),峰值功率为16W/cm2,屏蔽室内温度约28℃,相对湿度24%。结果:实验大鼠34只均进入结果分析。①10mW/cm2微波一次照射Wistar大鼠30min,不会引起大鼠直肠温度明显升高。②照射后各时间点淋巴结差异表达基因数量均多于胸腺。淋巴结、胸腺差异表达基因数:照后1d分别为913和156个,照后3d为157和88个,照后7d为97和37个,照后14d为208和148个。③10mW/cm2功率密度微波连续5d照射Wistar大鼠共150min,能够引起实验大鼠淋巴结和胸腺组织基因表达变化。差异表达基因涉及信号转导、免疫及防御反应、氧化应激、凋亡、细胞周期、细胞黏附、细胞骨架组建和发生、DNA复制与修复等生物学功能。④在这些已知生物学功能基因中信号转导相关差异表达基因数量最多(淋巴结25个,胸腺11个)。⑤淋巴结中8个氧化应激相关差异表达基因则明显地表现出功能和表达模式的一致性。它们参与的是抗氧化生物学过程,表达量均有一定程度的下调。结论:①10mW/cm2高功率微波重复照射Wistar大鼠150min对免疫组织的影响属于非热效应分子作用。②Wistar大鼠淋巴结对微波的辐照敏感性高于胸腺。③电磁辐射可能在一定程度上扰乱了动物体内氧化和抗氧化平衡。

^(60)Coγ射线照射对肺泡Ⅱ型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应

目的:探讨60Coγ射线照射对肺泡II型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应。方法:原代分离肺内II型上皮细胞(AT-Ⅱ)和间质细胞包括巨噬细胞和成纤维细胞,分别进行0、3、5、7Gy的γ射线照射,用细胞核嗜银染色观察照射对AT-Ⅱ增殖的影响;用酶谱分析检测照射后AT-Ⅱ和间质细胞培养上清中基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2,-9)的活性;用ELISA检测间质细胞培养上清中TGF-β1和IV型胶原含量。结果:AT-Ⅱ的核仁数量随照射剂量增加而增多,其中7Gy组最高;AT-II培养上清中MMP-2、-9活性随照射剂量增加呈先增高后降低趋势,间质细胞上清中MMP-2、-9活性和TGF-β1水平逐渐升高,IV型胶原分泌水平呈先降低后升高趋势。结论:放射性肺损伤早期,AT-Ⅱ、巨噬细胞和成纤维细胞均参与肺组织无效性重建过程,与晚期肺纤维化启动有一定的内在联系。

pcDNA3.0-RKIP重组质粒构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建RKIP真核表达质粒,并检测其在PC12细胞中的表达。方法:从大鼠背根神经节细胞中提取总RNA,应用巢式PCR技术,扩增获得RK IP基因编码序列片段,克隆入真核表达载体pcDNA3.0,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以Vigofect非脂质体介导法转染至PC12细胞,通过Western blot检测RKIP蛋白的表达。结果:酶切和测序结果证明pcDNA3.0-RKIP重组质粒的DNA序列完全正确,将其转染PC12细胞后,RKIP蛋白表达明显增加。结论:pcDNA3.0-RKIP真核表达质粒构建成功,并能在PC12细胞内表达,为深入研究RKIP的神经生物学功能提供了实验基础。

失血复合缺氧缺水缺食对大鼠心脏功能和心肌结构的影响

目的研究模拟掩埋条件下,失血复合缺氧缺水缺食大鼠心脏功能和结构的改变及其损伤特点,为深埋人员的及时救治及生命探测技术的研究提供依据。方法二级Wistar大鼠160只;随机分为正常对照组、单纯失血组、缺氧缺水缺食组(三缺组)、失血复合缺氧缺水缺食组(失血并三缺组)。其中失血模型为剪尾法制备,失血量30%;缺氧组为将动物置于常压低氧舱内,氧浓度10%。所有动物分别处理1 d3、d、5 d7、d后活杀取材,各时间点每组均为10只,雌雄各半。采用血清生化、组织病理、超微病理及定量病理等指标,动态观察心脏功能和形态结构的变化。结果单纯失血组血清LDH、CK明显降低(P<0.01、P<0.05),AST无明显变化;三缺组AST、LDH和CK均先降低后升高(P<0.01、P<0.05);三缺合并失血可加重LDH、CK的变化(P<0.01、P<0.05)。单纯失血组和三缺组心脏的基本病变为心肌细胞变性、凋亡、坏死;肌纤维排列紊乱、断裂、溶解,线粒体肿胀、嵴消失,基质均质状;内质网扩张,脱颗粒;血管内皮细胞凋亡;病变于1 d^7 d呈进行性加重;当复合失血时上述损伤明显加重。其病变具有速发性、进行性、全心性和部位差异性特点(左心重于右心,心室重于心房,内层重于中外层,心肌细胞重于蒲肯野细胞)。结论单纯失血对心肌损伤不明显,三缺可导致大鼠心脏功能和结构损伤,且随时间延长呈进行性加重趋势,失血复合三缺可进一步加重其上述损伤。

不同波段电磁辐射致大鼠睾丸支持细胞的损伤效应

为探讨不同波段电磁辐射对大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)损伤效应的异同,将原代培养的Sertoli细胞经场强6×104 V/m的电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)、平均功率密度为100 mW/cm2的S-波段高功率微波(S-band high power microwave,S-HPM)和X-波段高功率微波(X-band high power microwave,X-HPM)辐射。流式细胞仪结果显示3种波段电磁辐射后,Sertoli细胞的晚期凋亡和坏死率增加;MTT试验显示细胞代谢活性降低;光镜观察发现胞浆的颗粒增多且空泡变性;超微结构主要为线粒体肿胀、空化,内质网扩张。三者比较:总体呈EMP>X-HPM>S-HPM的趋势,且辐射后1 h较重,随时间延长损伤逐渐减轻。表明3种波段的电磁辐射均可致Sertoli细胞不同程度的损伤,且超宽谱波段的EMP效果最明显,微波波段则与频率呈正相关。

微波辐射对原代培养睾丸支持细胞的影响

目的探讨微波辐射是否对原代培养睾丸支持细胞具有损伤效应。方法建立原代培养睾丸支持细胞模型，经平均功率密度为30、100mW／cm^2微波辐射5min，于辐射后6h采用Annexin 和 V—PI双标、Fluo-3-AM荧光标记结合流式细胞术（FCM）和激光共聚焦显微镜（LSCM）检测支持细胞细胞周期、细胞凋亡坏死及胞内Ca^2＋含量的变化。结果30mW／cm^2微波辐射后6hG0-G1和G2-M期细胞数明显减少（分别为62．57％±3．22％、8．25％±1．75％），S期细胞数明显增加（29．17％±4．87％），与对照组（分别为79．18％±0．24％、11．17％±0．50％、9．64％±0．62％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），但细胞凋亡和坏死率及胞内Ca^2＋含量无明显改变；而100mW／cm^2微波辐射后6h G0-G1期支持细胞数明显增加（87．69％±1．32％），G2-M和S期细胞数明显减少（分别为7．41％±0．60％、4．87％＋0．91％），与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）；胞内Ca^2＋含量及细胞凋亡坏死率明显增加，差异亦有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论100mW／cm^2＋微波辐射可引起培养支持细胞生长抑制及凋亡与坏死增加，胞内Ca^2＋升高是其损伤的重要机制。

rhIL-11和rhG—CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用

目的探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用。方法将BALB／c小鼠130只用随机数字表法分为对照组（30只）、照射组（40只）、rhIL-11治疗组（30只）、rhIL-11＋rhG-CSF治疗组（30只），用3．0Gy中子照射，并于照射后给予600μg·kg^-1·d11的rhIL-11和50μg·kg^-1·d11的rhG-CSF，1次/d，共3d；用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等，检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化。结果照射组和rhIL-11治疗组于照射后6h～3d，小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降，Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达，含量进行性增加（F=0．003，P〈0．01）；照射后6h，照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加，以坏死为显著；照射后3d，rhIL-11＋rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加（F=0．037、0．026，P〈0．05），Bax蛋白含量减少（F=0．018，P〈0．05）；rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义。结论3．0Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损，rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用，联合使用效果优于单独使用。

钙信号因子在缺氧缺水缺食致心脏损伤中作用

目的在观察10%缺氧复合缺水缺食对心脏结构和功能影响的基础上,探讨Ca2+信号转导相关因子在其中的作用。方法将80只Wistar大鼠随机分为对照组、缺氧组、缺食缺水组和缺氧缺食缺水组[置于常压低氧舱(10%氧浓度)并禁食水],于第1、3、5、7天,采用全自动血生化仪检测血清代谢酶改变,透射电镜观察心脏超微结构改变,采用免疫组化检测心肌钙调素和磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达变化。结果 10%缺氧缺水缺食后7 d,大鼠血清乳酸脱氢酶[(1628.40±460.8)U/L]和谷草转氨酶[(394.60±187.18)U/L]活性明显高于对照组[分别为(578.40±135.04)、(136.40±14.59)U/L];心肌细胞核型不整,染色质边集,核周间隙增宽,线粒体肿胀空化或代偿性增加、Z线紊乱甚至溶解,肌浆网轻度扩张;心肌肌膜肿胀,呈指状突起;间质细胞和血管内皮细胞退变或凋亡;心肌细胞胞浆钙调素(4.22±0.84)与心肌细胞核磷酸化CREB表达(3.57±0.55)明显高于对照组[分别为(0.73±0.41)、(0.90±0.41)]。结论 10%缺氧复合缺水缺食可引起大鼠心脏结构和功能损伤,其机制可能与Ca2+信号通路激活(钙调素和磷酸化CREB表达增加)有关。